DISCIPLINA DE FARMACOGNOZIE UNIVERSITATEA DE MEDICINĂ ŞI FARMACIE “IULIU HAŢIEGANU” CLUJ-NAPOCA, FACULTATEA DE FARMACIE DISCIPLINA DE FARMACOGNOZIE ANALIZA FITOCHIMICĂ ȘI POTENȚIALUL ANTIOXIDANT ȘI ANTIMICROBIAN PENTRU MENTHA SPECIES Daniela Benedec, R.I. Moldovan, L. Vlase, D. Hanganu, B. Tiperciuc, M. Duma, I. Oniga

Menta – scurt istoric Povestea tristă a nimfei Mintha începe în vremuri de mult apuse, în momentul în care Hades, zeul Infernului s-a îndrăgostit de aceasta. Soţia lui Hades, Persefona, fiica lui Zeus şi a Demetrei, de durere, a schimbat-o pe Menta în planta cu acelaşi nume, dar a avut grijă ca aceasta să dăinuiască veşnic şi să tămăduiască boli. Menta, ca plantă benefică, este cunoscută din Antichitate, fiind amintită în scrierile greceşti, precum cele ale lui Dioscorides sau în cele romane, precum cele ale lui Plinius. Romanii, înainte de festivităţi, pulverizau în încăperi ulei şi infuzii din aceasta, iar mesele erau frecate bine cu mentă pentru senzaţie de răcoare şi prospeţime papirusul Ebers - în boli de stomac India - în indigestii, afrodisiacă şi aducătoare de noroc Farmacopeea Londoneză din anul 1721, apare pentru prima dată - Mentha piperita sapore - britanicii fiind primii care au cultivat-o (XVII, Mitcham, de către Charles Eales)

Date botanice Sistematica M. x piperita var. officinalis f. rubescens Încrengătura: Magnoliophyta M. longifolia Clasa: Magnoliatae Subclasa: Asteridae erbacee, perene Ordinul: Lamiales tulpini tetramuchiate Familia: Lamiaceae frunze oval-lanceolate Genul: MENTHA inflorescenţe cimoase Speciile: flori bisexuate M. rotundifolia înălţimi de la 10 la 150 cm M. spicata subsp. crispata miros specific, aromat M. suaveolens var. variegata M. x piperita var. officinalis f. pallescens

Mentha piperita var. rubescens (neagră) - tulpini şi frunze: nuanţe roşietice-maronii - frunzele - adânc serate pe margini - uleiul volatil - calitate inferioară, concentraţie mare Mentha piperita var. pallescens (albă) - uleiul volatil - concentraţie mai mică, slabă, cu aromă mai delicată şi este mai scump - planta este mai delicată, fiind sensibilă la îngheţ şi secetă M. longifolia - frunze rotund-ovate, groase, sesile, vârf rotunjit, cu peri pe partea inferioară

Mentha suaveolens - perenă, de până la 40-100 cm. Frunzele foarte scurt peţiolate (1-2 mm), ovoidale, de până la 5 cm lungime, dens-pufos păroase pe faţa inferioară, marginile îndoite în jos, serate. Inflorescenţe spiciforme, cu flori roz. Preferă condiţii însorite sau puţin umbroase. Mentha spicata subsp. crispata (sin. Mentha crispa, Mentha viridis - izmă creaţă) - hibrid între M. longifolia şi M. suaveolens, Mentha spicata şi Mentha x gracilis (M. arvensis şi M. spicata). Se deosebeşte de M. piperita prin stoloni mai scurţi; frunze lungi de cca 5 cm, oval rotunjite cu marginea creață, lipsite de peţiol; florile mai mici Mentha rotundifolia - hibrid între M. longifolia şi M. suaveolens. Confundată adesea cu M. villosa.Frunze alungit lanceolate, la bază rotunjite, slab păroase pe partea inferioară.

Mentha piperita L. Acţiuni: tonică-stomahică Compoziţie chimică: carminativă, colagog- coleretică antiemetică, antispastică antidiareică antifungică-antivirală antibacteriană Compoziţie chimică: ulei volatil (0.3-1%) Flavonoide (12%) Compuşi fenilpropanici (3,5-4,5%) tanin triterpene pentaciclice carotenoide 47 – 73,6 % 7,4 – 25,4 % 2 – 5 % mentol (+izomeri) mentona mentofuran

Oxid de piperitonă Oxid de piperitenonă Mentha longifolia L. ulei volatil cu: mentonă, carvonă antibacteriană (E. coli) antidiareică, antiemetică anticatarală şi expectorantă Mentha suaveolens Ehrh. ulei volatil cu: α şi β-pinen, trans- limonen, trans-calamen antiaritmică, analgezică colagog-coleretică anticatarală antiparazitară (Giardia lamblia, Trichomonas vaginalis) 9 – 25 % 45 – 70 % Oxid de piperitonă Oxid de piperitenonă

M. rotundifolia (L) Huds. Mentha spicata L. subsp. crispata Schrad. Compoziţie chimică: 1,8-2,5% ulei volatil: Carvona (48,60 %) Cis-carveol (21,30 %) Limonen (11,30 %) Acţiuni: Stomahică, colagog-coleretică Anticatarală, mucolitică, antiinflamatoare Antioxidantă şi antimicrobian Compoziţie chimică: ulei volatil: oxid de piperitenonă (80,8%) sabinen (2%) Acţiuni: Stomahică, colagog- coleretică antispastică

Partea experimentală Analiza calitativă şi cantitativă a polifenolilor prin metode: cromatografice şi spectrofotometrice (HPLC- MS) Activitatea antioxidantă fost determinată cu DPPH Acțiunea antimicrobiană s-a realizat folosind testul difuzimetric în agar. Materii prime: folium (Cluj, terenurile Fares, Orăştie, recoltă 2012) M. rotundifolia M. piperita var. rubescens M. spicata M. suaveolens M. piperita var. pallescens M. longifolia M. spicata (Cluj)

Analiza cantitativă a flavonoidelor Analiza cantitativă a compuşilor fenilpropanici spectrofotometrică, bazată pe reacţia de culoare reactivului Arnow cu compuşii fenilpropanici metodă spectrofotometrică, bazată pe reacţia de culoare a flavonoidelor cu o soluţie de AlCl3

Analiza cantitativă a polifenolilor totali Metodă spectrofotometrică, bazată pe reacţia de culoare a polifenolilor cu reactivul Folin- Ciocâlteu

Analiza HPLC/MS a polifenolilor metoda standardului extern Sistem Agilent 1100 HPLC Series (Agilent, USA), pompă binară, degazor G1322A, autosampler, termostat (setat la temperatura de 48°C), detector UV HP 1100 Series, coloană Zorbax SB-C18 100 mm x 3.0 mm i.d., 3.5 µm (Agilent, USA) Faza mobilă: metanol:soluţie acid acetic 0,1%; eluţia s-a realizat în gradient liniar datele au fost înregistrate cu un detector UV la 330 nm, volumul de injectare 5µl mg/100 g produs vegetal

Analiza HPLC/MS a polifenolilor Compuşi polifenolici Mentha longifolia Mentha spicata- Cluj Acid caftaric < 0.2 Acid cafeic Ac. clorogenic Ac. p-cumaric 2,68 15,24 Acid ferulic 27,32 Acid sinapic - 6,60 Izoquercitrina 15,80 Rutozida 0,82 Quercetol Luteolina 1,76 4,68 Apigenina Cromatograma HPLC M. longifolia Cromatograma HPLC M. viridis var. crispa

Analiza HPLC/MS a polifenolilor Compuși polifenolici Tr (min) M. rotundifolia M. spicata M. suaveolens Acid caftaric 2.10 x Acid gentisic 2.15 Acid cafeic 5.60 Acid clorogenic 5.62 Acid p-cumaric 8.70 3,691 0,441 2,126 Acid ferulic 12.20 - Izoquercitrina 19.60 16,069 31,634 Rutozida 20.20 Quercitrina 23.00 4,665 2,235 3,543 Luteolina 29.10 3,371 2,542 Cromatograma HPLC Mentha rotundifolia Cromatograma HPLC Mentha spicata Cromatograma HPLC Mentha suaveolens

Analiza HPLC/MS a polifenolilor Compuși polifenolici Tr (min) M. piperita rubrescens M. piperita pallescens Acid caftaric 2.10 x Acid gentisic 2.15 Acid cafeic 5.60 Acid clorogenic 5.62 Acid p-cumaric 8.70 0,621 2,307 Acid ferulic 12.20 0,355 0,456 Izoquercitrina 19.60 9,443 15,607 Rutozida 20.20 12,436 14,663 Quercitrina 23.00 - Luteolina 29.10 2,127 1,919 Cromatograma HPLC M. piperita rubrescens Cromatograma HPLC M. piperita pallescens

Acţiunea antioxidantă prin DPPH DPPH• (violet) este redus la un compus galben Valorile AAO sunt exprimate ca şi cantitatea de AO ce descreşte absorbanţa DPPH•

Activitatea antimicrobiană difuziune ĩn agar a godeurilor Metoda indică susceptibilitatea tulpinii bacteriene pentru substanţele testate, prin aparitia unei zone de inhibiţie ĩn jurul godeurilor Diametrul zonei rezultate este considerat proporţional cu gradul de susceptibilitate <10 mm (rezistent) 10-15 scăzut (intermediar, 13-14) 15-20 moderat (> 15 – susceptibil) > 20 mare Probe Diametrul zonei de inhibiţie (mm) S. aureus L. monocytogenes E. coli S. typhymurium C. albicans M. spicata 18 26 10 12 22 M. spicata Cluj 16 8 21 M. rotundifolia 28 20 M. suaveolens M.f. rubrescens M. f.pallescens 24 14 M. longifolia 15 11 Gentamicina 19 - Fluconazol 25

CONCLUZII Probele de mentă luate în studiu au prezentat deosebiri atât de ordin calitativ (prezenţa/absenţa acidului ferulic), dar mai ales cantitativ (izoquercitrina, rutozida, concentraţii de polifenoli, flavonoide, etc.), deosebiri care ar putea fi utilizate ca un potenţial marker taxonomic, de identificare a speciilor. Rezultatele noastre confirmă faptul că speciile din genul Mentha pot fi considerate surse importante de polifenoli cu proprietăți antioxidante și antimicrobiene - vin în sprijinul introducerii în cultură a acestor specii, subspecii sau forme luate în studiu.

Fitopreparate – Laboratoarele Fares Menta, o plantă cu 10 beneficii pentru digestie Mentă cu eucalipt, ceai la plic Ceai ecologic, mentă, la plic Mentă, iarbă, cutie Ceai mentă cu lămâie 20 doze (Ceaiurile casei)  Ceai mentă, rozmarin şi măceşe 80 doze (Ceaiurile casei) Theia, ceai verde cu mentă, ceai la plic Ulei esenţial de mentă

CEAIUL V PROSTATĂ ŞI VEZICĂ (50 g FARES) Cucurbitae pepo semen, Equiseti herba, Menthae herba, Urticae Herba Sambuci flos, Ononidis radix CEAI FARES SVELTAFLOR (slăbit, 50 g) Sennae folium, Chamomillae flos, Sambuci flos, Meliloti herba, Lavandulae flos, Menthae herba  CEAIUL G (pietre la fiere şi rinichi) 50 g Fares Ononidis radix, Polygonii herba, Menthae herba, Millefolii herba Chamomillae flos CEAIUL"U" STOMAC (50 g Fares) gălbenele, muşeţel, troscot, coada şoricelului, mentă CEAI BABY CALM 20dz Fares muşetel, fenicul, chimion, mentă

Ceai Hepatocol: Boldo folium, Sylibi mariani fructus, Chelidonii herba , Cichorii radix , Menthae herba, Hyperici herba , Calendulae flos, Meliloti herba Ceai pentru stimularea lactației : Anisi fructus, Foeniculi fructus, Carvi fructus, Urticae herba , Melissae herba , Serpylli herba, Menthae herba Ceai de la bunica pentru digestie Chamomillae flos, Coriandri fructus, Mentha herba, Millefolii herba, Citrus decumana aetheroleum Colon sănătos, D66, capsule vegetale : Olivae folium, Menthae herba, Convolvuli herba, Valerianae radix, Hyperici herba, Calami hizoma, Lavandulae flos, Cinnamomi cortex

Bitter Herba dacică, D94, tonic : + Mentha herba Farebil soluție 10 ml: 13.75 gr. α-pinen, 3.40 gr. β-pinen, 4.60 gr. camfen, 2.00 gr. 1.8-cineol, 5.00 gr. borneol, 29.75 gr. mentol, 6.00 gr. mentonă, ulei de floarea soarelui Hapciu solubil 20plicuri M. aetheroleum Tinctura Renalex 30 ml: Raphanus sativus nigra, Juniperi fructus, Betulae folium, Phyllanthus niruri (ochii șoricelului) Ononidis radix, Menthae aetheroleum, Foeniculi aetheroleum

Trusa de călătorie plăcută 6 produse necesare Fares R13 - PLANTUSIN comp. masticabile (Menthae aetheroleum, mentol) D68 - ENTEROSTOP (antidiareic) cps. (Menthae herba)

VĂ MULŢUMESC!