I. Electroforeza şi aplicaţiile sale pentru diagnostic

Παρουσίαση με θέμα: "I. Electroforeza şi aplicaţiile sale pentru diagnostic"— Μεταγράφημα παρουσίασης:

1 Metode electrokinetice: electroforeza, electrofocalizarea, imunoelectroforeza

2 I. Electroforeza şi aplicaţiile sale pentru diagnostic
11/23/2018

3 I.1.Principiul fizic al electroforezei
Metoda de separare prin migrarea particulelor încărcate electric în câmp electric + - Electrozi - + + - + + - - + + + - - - 11/23/2018

4 Forţe care acţionează asupra particulei în câmp electric:
pH Ze + Fe Ff _ Fe = Ff ZeE= 6rv

5 Fe = ZeE Ff = 6rv Explicarea termenilor: Fe = forţa electrică
Fη = forţa de frecare Ze = sarcina electrică a particulei E = intensitea câmpului electric η = viscositea mediului r = raza particulei v = viteza particulei Fe = ZeE Ff = 6rv

6 FACTORI DE DEPENDENŢĂ AI VITEZEI PARTICULEI :
sarcina electrică (pH-ul mediului) raza particulei (deci dimensiunile) viscozitatea mediului intensitatea câmpului electric

7 11/23/2018

8 I.2.Dispozitivul 11/23/2018

9 Schema electroforezei
pipetă deplasare tampon l Electro-fore-grama: Schema electroforezei

10 11/23/2018

11 II.3. Electroforeza proteinelor serice
11/23/2018

12 Electroforeza = migrare diferenţială în câmp electric, deci posibilitate de separare a:
AMINOACIZILOR PEPTIDELOR PROTEINELOR ACIZILOR NUCLEICI

13 Electroforeza proteinelor serice
separarea proteinelor în cinci fracţiuni. 11/23/2018

14 Electroforegrama normală
11/23/2018

15 Benzile proteice separate pot fi cuantificate prin densitometrie sau fotocolorimetrie

16 Electrophoregrama normală - valori:
Albumine % Alfa-1 globuline 2-4% Alfa-2 globuline 6-12% Beta- globuline 8-14% Gamma globuline % 11/23/2018

17 Aplicaţie: electroforegrama patologică (exemple):
11/23/2018

18 11/23/2018

19 Normal Boala hepatică: pacient în vârstă de 46 ani, diagnosticat cu ciroză hepatică, secundară abuzului cronic de alcool. Decedează 5 luni după acest rezultat.

20 Normal Pattern inflamator acut: gamma diminuate, alfa2 mare

21

22 Electroforegramă urinară
Electroforeza de urină este tehnica de electie pentru identificarea de proteinei Bence-Jones, la pacienţii cu mielom multiplu. Acesta trebuie să fie întotdeauna efectuata în lcomparatie cu electroforeza serica, astfel încât rezultatele sa poata fi comparate direct.

23 II. Alte tehnici electrokinetice:
Focalizarea izoelectrică Imunoelectroforeza 11/23/2018

24

25 Normal Gammapatie policlonală Secundar unor boli cronice. Ex.: secundar sarcoidozei

26 Focalizarea izoelectrică: electroforeză în gradient de pH, migrarea şi separarea depinde doar de pI (punctul izoelelctric) Principiul fizic: Dacă un amestec de proteine este supus unei electroforeze în gradient de pH fiecare proteină va migra până în locul unde pH-ul mediului corespunde pH-ului său izoelectric (când proteina va avea sarcină globală nulă). 11/23/2018

27 11/23/2018

28 Imunoelectroforeza Principiul fizic: 2 etape: 1. electroforeza
2. imunodifuzia. 11/23/2018

29 = ELECTROFOREZA + IMUNODIFUZIE
= separarea unui amestec de antigeni elctroforeza în gel + amestec de anticorpi : Reacţie Ag –Ac +imunodifuzie

30 Imunoelectroforeza (rezultate)
Grosimea şi poziţia arcurilor de precipitare. Aplicaţie frecventă: gamapatie monoclonală. 11/23/2018