ΑΠΟΜΟΝΩΣΗ ΝΟΥΚΛΕΪΚΩΝ ΟΞΕΩΝ
Λήψη ιστού-κυττάρων
Λήψη ιστού-κυττάρων
Ομογενοποίηση ιστού-κυττάρων Ομογενοποίηση ιστού-κυττάρων Μηχανική Ομογενοποίηση Ομογενοποίηση με Υπέρηχους
Ομογενοποίηση ιστού-κυττάρων Ομογενοποίηση ιστού-κυττάρων Μηχανική Ομογενοποίηση
Ομογενοποίηση ιστού-κυττάρων Ομογενοποίηση ιστού-κυττάρων Ομογενοποίηση με Υπέρηχους
Διάλυμα Ομογενοποίησης SDS – απορρυπαντικό EDTA – χυλική ένωση NaCl – σταθεροποίηση DNA Ρυθμιστικό Διάλυμα pH7.5-8
Διάλυμα Ομογενοποίησης SDS – απορρυπαντικό
Διάλυμα Ομογενοποίησης EDTA χυλική ένωση δεσμεύει δισθενή ιόντα Δέσμευση Mg2+ Αναστολή DNAσών Δέσμευση Ca2+ Παρεμπόδιση πήξης αίματος
Διάλυμα Ομογενοποίησης NaCl – σταθεροποίηση DNA Ρυθμιστικό Διάλυμα pH7.5-8
Απομάκρυνση Πρωτεϊνών Πρωτεϊνάση Κ 37oC, 2h
Εκχύλιση υδρόφοβων ενώσεων Οργανικοί Διαλύτες π.χ. Φαινόλη & Χλωροφόρμιο
Φυγοκέντρηση
Αποτέλεσμα Φυγοκέντρησης Υδατική Φάση με DNA, RNA, σάκχαρα Μεσόφαση με αμφιπαθείς πρωτεΐνες Οργανική Φάση με Λιπίδια, υδρόφοβες πρωτεΐνες
Κατακρήμνιση Νουκλεϊκών Οξέων Ισοπροπανόλη ή Αιθανόλη Αφυδάτωση μορίων DNA Συσσωμάτωση DNA
Κατακρήμνιση Νουκλεϊκών Οξέων
Διαφορική Φυγοκέντρηση
Διαφορική Φυγοκέντρηση
Φυγοκέντρηση σε Κλινές Συγκέντρωσης
Τι είναι η ομογενοποίηση ενός ιστού; Τι είναι η εκχύλιση; Τι είναι η φυγοκέντρηση; Γιατί κατά την απομόνωση νουκλεϊκών οξέων χρησιμοποιείται Α. SDS, Β. EDTA, Γ. NaCl, Δ. Ρυθμιστικό Διάλυμα pH7.5-8, Ε. Φαινόλη-Χλωροφόρμιο, ΣΤ. Ισοπροπανόλη Κατά την απομόνωση νουκλεϊκών οξέων μετά την εκχύλιση και τη φυγοκέντρηση σχηματίζονται φάσεις στο διάλυμα. Ποιες είναι αυτές και τι περιέχει καθεμία;