DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL INFLAMATIEI

REACTANTI (PROTEINE) DE FAZA ACUTA (I) Definitie: proteine hepatocitare, cresterea / scaderea concentratiei cu > 25 % in inflamatie Apar in inflamatii acute, dar si cronice (in evolutie) Sunt nespecifici: NU indica etiologia !

REACTANTI (PROTEINE) DE FAZA ACUTA (II) POZITIVI (↑) a) ↑ cu 50%: ceruloplasmina, fractii complement b) ↑ de cateva ori: fibrinogen, α1-antitripsina, haptoglobina, feritina c) ↑ de sute-1000 ori :CRP, SAA ! dinamica rapida NEGATIVI (↓) albumina transferina transthyretina

PRACTIC VSH FIBRINOGEN CRP ELECTROFOREZA PROTEINELOR SERICE De testat toate! (asincronism, discrepanta)

VSH Masoara indirect modificarile reactantilor de faza acuta si imunoglobulinelor Tub Westergren (200 mm, ϕ=2,5 mm) Normal <15 mm/h la barbati <20 mm/h la femei Avantaje: simplu, ieftin

Dezavantaje: Influentat de multi factori (eritrocite, constituenti plasmatici, medicamente) Se modifica lent Amplitudine de variatie mai mica Depinde de varsta, sex, rasa, obezitate, sarcina VSH b = v/2, VSH f = (v+10)/2

VSH – interpretare nuantata Cresteri fals pozitive dependente de tehnica Modificari in conditii non-inflamatoare ( ↑ in IRC, Sd.N, CH, DZ, anemie, etc sau ↓ in ICC, poliglobulie, a/h/dis γglob, fibrinogen) Exceptii ( boli sistemice reumatice active, dar cu teste de inflamatie normale) : PR, LES, PM/DM, vasculite Horton, Takayasu

CRP Proteina pentamerica, produsa de hepatocit Reactioneaza si precipita polizaharidul C al pneumococului Activeaza complementul pe cale clasica Moduleaza comportamentul celulelor fagocitare Tehnici: ELISA, nefelometrie

Valori Normal <0,2-1 mg/dl (traumatisme zilnice, efort fizic) ↑ moderata: 1-10 mg/dl (majoritatea bolilor sistemice reumatice,infectii, neoplazii) ↑ marcata >10 →15-20 mg/dl ( septicemie, vasculite sistemice, trauma majora)

Avantaje si dezavantaje Dinamica rapida Nu este influentata de multi factori ce afecteaza VSH Mai costisitoare Poate fi crescuta in conditii non-inflamatoare (IRC) sau normala in BSR active, IH severa

Electroforeza proteinelor serice Cea mai costisitoare Cuantifica direct reactantii de faza acuta ↑ Ig = β/γ-globuline (inflamatie cronica) CRP: γ Fibrinogen: β/γ C3: β ↑α1-globuline si α2-globuline (inflamatie acuta) ↓ ↓ α1 AT Hp ↓ albumina, transthyretina (prealbumina), transferina: β

Complement Balanta intre crestere (reactant de faza acuta) si scadere (consum de catre CIC; deficiente genetice, insuficienta hepatica severa) 3 probe uzuale: C3, C4 (nefelometrie, ELISA), CH50 – ptr. integritatea caii clasice Determinari utile in bolile cu consum crescut: LES, vasculita crioglobulinemica si urticariana, GN postStr., EB subac

Crioglobuline Definitie: Ig care precipita spontan la rece si se resolubilizeaza la cald (≠ criofibrinogen) Tehnica riguroasa: recoltare, coagulare, centrifugare la 37ºC, apoi precipitare la 4ºC si imunoelectroforeza Clasificare - tip I: monoclonal IgM (gamapatii monoclon) - tip II: mixt mono IgM si poli IgG (VHC / B) - tip III: poli IgG si M (LES, SSj, PR)

DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL AUTOIMUNITATII

Factorul reumatoid Definitie: Ig M (G, A, D, E) anti Ig G (Fc) Determinare: ● aglutinare (Waaler-Rose, Latex) ● ELISA ● Nefelometrie

Situatii asociate cu FR Boli reumatice: PR, SSj, BMTC, CME, LES, PM/DM Boli nereumatice: - infectii cronice -boli pulmonare -neoplazii Normal! (>70 ani: 10-25%)

Utilitatea Test screening prost (Sp ↓); Sb in PR: 60-80% RP, polimialgie reumatica cu FR+: evolutie spre PR Titru ↑ (IgM si IgA) in PR semnifica: 1. boala eroziva 2. boala severa 3. progresie mai rapida a bolii 4. manifestari extraarticulare (vasculita, NR) 5. mortalitate ↑

Anticorpii anti CCP / ACPA = peptide ciclice citrulinate (I) Epitop comun -filagrina (AFA) -keratohialina (APF) -keratina (AKA) -vimentina (anti-Sa) -fibrina/fibrinogen Citrulina = deiminarea argininei: proces nespecific ce apare in apoptoza celulara indusa de inflamatie Sp ↑ ptr. PR (>90%): prezentarea CCP de catre HLA DR asociate PR Sb 50 → 85% (~ FR)

Anticorpii anti CCP (II) Determinare: ELISA - anti CCP 1 = anticitrulina - anti CCP2 = anti peptide ciclice citrulinate Utilitate: - diagnostica (cel mai Sp test) - preced debutul bolii: test dg precoce - discrimineaza bine poliartritele nediferentiate - prognostica (boala eroziva si agresiva) - NU se coreleaza cu manif. Extraartic. - NU se utilizeaza ptr. monitorizarea bolii

Anticorpii antinucleari Definitie: anticorpi impotriva acizilor nucleici, proteinelor nucleare, complexelor acizi nucleici-proteine, enzime nucleare Detectare: -imunofluorescenta indirecta (standard de aur) SI - ELISA sau alte metode imune in faza solida

Boli asociate cu anticorpi antinucleari Boli reumatice sistemice: LES, SSj, BMTC, SS, PM/DM, PR, etc. Boli hepatice autoimune Boli tiroidiene autoimune Diverse: medicamente, infectii, neoplazii Normal!

Substraturi IFI Ficat sau rinichi de rozatoare→ LES ANA negativ HEp-2: substrat standardizat, cu nucleoli mari, bogat in Ro, sensibilitate crescuta pt. anticorpi nucleari si citoplasmatici

Interpretare rezultate Titru semnificativ ≥1/80 impreuna cu anamneza si examen clinic sugestiv Lipsa manifestari → suspiciune de boala autoimuna doar la titruri foarte mari Rezultate fals pozitive: Normal →1/160: 5% → 1/320: 3% 1 LES….....1000 N……..50 ANA

Tipuri de imagini IFI pe substraturi de rozatoare Omogen (difuz) Inelar (periferic) Patat Nucleolar

Tipuri de imagini IFI pe HEp-2 Nucleara - omogena: Ac anti ADNdc, anti histone, etc - omogena / fin patata: anti SCL 70 - membranoasa - matriceala - patat grosier: anti spliceozom (U1-RNP/Sm, U2, U4/U6-RNP) - patat fin: anti Ro, La, etc - punctatii Nucleolara - omogena (PM/Scl, Th/To) - in gramajoare (U3-RNP) - patata (ARN pol I) Dependenta de ciclul celular (ex. centromeric , PCNA, etc) Citoplasmatica - patat (ex. ribozomal, ARNt-sintetaze, mitocondrial, etc) - fibrilar (ex. antiactina, tropomiozina, etc)

Omogen ADN dc Histone Nucleozom

Patat grosier Sm/U1RNP U2RNP RNPnh

Patat fin SSA/Ro SSB/La Mi-2 Ku, Ki ARN pol II, III

Nucleolar U3RNP ( in gramajoare) ARN pol I PM/Scl etc

Centromeric CENP-A CENP-B CENP-C

Citoplasmatic patat Proteine ribozomale (fin, dens granular, omogen) SRP ARNt sintetaze Mitocondrie etc

Anticorpi anticitoplasma neutrofil Definitie: anticorpi anti PRO3 = cANCA anticorpi anti MPO si alte enzime = pANCA Detectare: imunofluorescenta, ELISA

Boli asociate cANCA Granulomatoza Wegener Poliangiita microscopica Sd. Churg-Strauss PAN etc

Boli asociate pANCA Poliangiita microscopica Sd. Churg-Strauss Sd. Goopasture GW PAN LES, PR, SSj Medicamente etc

Anticorpi antifosfolipidici Teste serologice fals pozitive pt. lues Anticoagulantul lupic: prelungirea timpilor de coagulare (APTT, etc) Anticorpi anticardiolipina, fosfatidilserina, etc Anticorpi anti β2-GP I

Sindromul antifosfolipidic - clinic Tromboze arteriale si venoase Trombopenie Evenimente obstetricale (avort spontan, moarte in utero, etc ) Alte manifestari

Sindromul antifosfolipidic Primar Secundar: -LES -SSj -APs -PR -SS -Behçet -infectii, medicamente, etc