Ινστιτούτο Αγροβιοτεχνολογίας Ο ρόλος της πρωτεΐνης RecA στον ομόλογο ανασυνδυασμό στο χλωροπλάστη και η σημασία της στην γενετική του τροποποίηση Μαδέσης Παναγιώτης Ερευνητής Δ΄ Ινστιτούτο Αγροβιοτεχνολογίας accD atpB rbcL aadA γονίδιο RecA RecA
Υλικά και Μέθοδοι ♀ ♂ Δημιουργία RNAi φυτών καπνού με το γονίδιο recA Δημιουργία φυτών καπνού που εκφράζουν το γονίδιο RecA συγχωνευμένο με το GFP NH2 RecA GFP CO2 Ομόρροπες επαναλαμβανόμενες DNA Αλληλουχίες RecA ΔrbcL mutant Ομόλογος Ανασυνδυασμός X ♂ Kanamycin Φυτά στο χώμα Ανάλυση απογόνων ♀
Αποτελέσματα Μάρτυρας RecA (DR) RecA (OX) ποσοστό Απουσία Χλωρ. τομέων Μικροί Χλωρ. τομείς Μεγάλοι * Pale green sectors MW 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 Μάρτ. Αυτ. RecA OX DR kb 21 9.4 6.6 5.2 4.4 Over exposed Ανιχνευτής rbcL 7 kb: ανασυνδυασμένο χλωροπλαστικό γονιδίωμα 6.1 kb: Προϊόν αποκοπής 11.5 kb: εξωπλαστιδιακό DNA * Άλλες αναδιατάξεις :
Αποτελέσματα DR - RecA control OX Control Neu 4mM μm 10 WT TomRecA GFP Η πρωτεΐνη RecA είναι απαραίτητη για την επιδιόρθωση βλαβών από τη μεταλλαξιγόνο ουσία NEU Η πρωτεΐνη RecAGFP που εκφράζεται στον πυρήνα στοχεύεται και συσσωρεύεται στον χλωροπλάστη
Συμπεράσματα Η πρωτεΐνη RecAGFP συσσωρεύεται στους χλωροπλάστες. Η πρωτεΐνη RecA είναι απαραίτητη για την επιδιόρθωση βλαβών που προκαλούνται στο χλωροπλαστικό DNA από τη μεταλλαξογόνο ουσία NEU. Η πρωτεΐνη RecA εμπλέκεται στον ομόλογο ανασυνδυασμό στους χλωροπλάστες. Η κατανόηση του μηχανισμού του ομόλογου ανασυνδυασμού θα βοηθήσει στην ανάπτυξη της γενετικής τροποποίησης των χλωροπλαστών σε νέα είδη.
Ευχαριστώ