σκοπός Μεταλλάξεις στα μεταβολικά ένζυμα IDH1 IDH2 2HG Παρατηρείται συχνά στην AML ΟΜΩΣ ποιά είναι η σημασία των μεταλλαγμένων ΙDH ενζύμων στην διατήρηση και πρόδο της AML; ΜΠΟΡΟΥΝ να αποτελέσουν θεραπευτικό στόχο στην αντιμετώπιση της ΟΜΛ;

εισαγωγή Κύκλος του κιτρικού οξέος

εισαγωγή Μεταλλάξεις στην ενεργή θέση αργινινών στις IDH 1,2 ταυτοποιήθηκαν στο 20% ΟΜΛ(Οπως και σε γλοιοβλάστωμα ,χονδροσάρκωμα , κακοήθεια προστάτη) Παράγεται 2 υδροξυ γλουταρικό(2HG) το οποίο μπορέι να δράσει ως αναστολέας των διοξυγενασών εξαρτώμενων απο το α κετογλουταρικό Internal tandem duplication in FMS-like tyrosine kinase 3 (Flt3ITD) and mutations that promote the cytoplasmic localization of Nucleophosmin1 (NPMc+) ΡΟΛΟΣ IDH1,2 ΜΕΤΑΛΛΑΞΕΩΝ ΣΤΗΝ ΔΙΑΤΗΡΗΣΗ ΤΗΣ ΛΕΥΧΑΙΜΙΑΣ

ΔΙΑΓΟΝΙΔΙΑΚΑ ΠΟΝΤΙΚΙΑ mouse model of IDH2R140Q mutation capacity to be both tissue-specific and on/off-inducible (A) Schematic depicting the strategy for generation of an inducible IDH2R140Q allele in the mouse. Following Flp-mediated recombination, the IDH2R140Q cDNA flanked by a tetracycline response element (TRE) and a protamine-1 poly-A cassette is integrated into the ColA1 locus. The PGK promoter drives hygromycin resistance, allowing selection of integrants

ΔΙΑΓΟΝΙΔΙΑΚΑ ΠΟΝΤΙΚΙΑ Η παραγωγή μεταλλαγμένων πρωτεινών επάγεται με την πρόσληψη δοξυκυλίνης από το φαγητό σε ποντίκια 3 εβδομάδων Με την χρήση liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS) 2HG στον ορό στα μονοκύτταρα στο μυελό (B) 2-HG in BM MNCs measured by LC-MS following 8 weeks of transgene induction. Οταν όμως διακόπηκε η χορήγηση δοξυκυκλίνης επιστροφή στα φυσιολογικά επιπεδα(ΑΝΑΣΤΡΕΨΙΜΟΤΗΤΑ)

ΕΚΦΡΑΣΗ IDH2R140Q ΚΑΙ ΑΙΜΟΠΟΙΗΣΗ Στις 8 εβδομάδες: καμία διαφορα στα κυτταρα του περιφερειακού αίματος ,στα αρχέγονα αιμοποιητικά ,ώριμα ΒκαιΤ λεμφοκύτταρα ΟΜΩΣ σπλήνας μεγαλύτερος Σημαντική εξωμυελική αιμοποίηση

ΕΚΦΡΑΣΗ IDH2R140Q ΚΑΙ ΑΙΜΟΠΟΙΗΣΗ Σε 7 μήνες: Αυξημένα επιπεδα KSL κύτταρα στο μυελό

ΕΚΦΡΑΣΗ IDH2R140Q ΚΑΙ ΔΙΑΦΟΡΟΠΟΙΗΣΗ ΕΡΥΘΡΩΝ CFU χρησιμοποιώντας ημιστερεό μέσο με κυτοκίνες διαφοροποίηση Δοξυκυκλίνη ερυθρά μειωμένα υπόλοιπα κύτταρα μυελικής σειρας σταθερά σταθερά Methylcellulose CFU-GEMM assay using KSL cells sorted from IDH2R140Q-t or control mice following 8 weeks of doxycycline treatment. Doxycycline was added to the media to maintain transgene expression throughout the differentiation process (n = 7 biological replicates/group).

ΕΚΦΡΑΣΗ IDH2R140Q ΚΑΙ ΔΙΑΦΟΡΟΠΟΙΗΣΗ ΕΡΥΘΡΩΝ Γινεται να αντιστραφούν τα αποτελέσματα αυτα; αναστολέας IDH2R140Q(AGI6780A) dox Taken together our data demonstrate that mutant IDH proteins are sufficient to induce defects in the differentiation of primary hematopoietic cells. Critically, we have shown that these effects are reversible by pharmacological inhibition of 2-HG production by the mutant protein.

ΕΚΦΡΑΣΗ IDH2R140Q ΚΑΙ ΔΙΑΦΟΡΟΠΟΙΗΣΗ ΕΡΥΘΡΩΝ Ποιά γονίδια όμως παιζουν ρόλο; Ανάλυση με μικροσυστοιχίες Κύρια ευρήματα: αριθμός μεταγράφων που ενεργοποιούνται από GATA1 υποξία Ενεργοποίηση TNFa μονοπάτι

Continued Expression of IDH2R140Q Is Essential for Maintenance of HoxA9/Meis1a η μετάλλαξη αυτη απο μόνη της δεν αρκεί για την ανάπτυξη λευχαιμίας συνέργεια με αλλους παράγοντες 5

Continued Expression of IDH2R140Q Is Essential for Maintenance of HoxA9/Meis1a Στη συνέχεια σε κάποια ποντίκια διακόπηκε η χορήγηση δοξυκυκλίνης και σε κάποια οχι για να βεβαιωθούμε οτι δεν υπάρχουν υπολείματα λευχαιμίκών κυττάρων PCR τουλάχιστον η μεγάλη πλεινότητα των λευχαιμικών κυττάρων εξαλείφθηκαν μετά την γενετική απενεργοποίηση του IDH2R140Q

Continued Expression of IDH2R140Q Is Essential for Maintenance of HoxA9/Meis1a Πιο συνοπτικά σε πειράματα που ακολούθησαν-παραλλαγές του προηγούμενου ,παρατηρείται οτι μετά την απενεργοποίηση του γονιδίου Μείωση λευχαιμικών κυττάρων και αποκατάσταση φυσιολογικής αιμοποίησης ckit+/ckit- Μειορρύθμιση (Atf3, Ptgs2, and S100A9) στα οποία είχε παρατηρηθεί αυξορρύθμιση στα IDH2R140Q-t KSL κύτταρα τα αρχέγονα κύτταρα τα οποία απέκτησαν την IDH μετάλλαξη και μεταλλάχθηκαν και λόγω άλλων γενετικών παραγόντων , για τη διατήρηση εξαρτώνται από τη συνεχή δράση της πρωτείνης

Flt3ITD AML Model Εσωτερικός διαδοχικός αναδιπλασιασμός Flt3 συχνό σε ασθενείς με ΟΜΛ Κακή πρόγνωση Συνυπάρχει με αλλες μεταλλάξεις Ως μοναδική μεταλλαξη δεν προκαλεί ΟΜΛ αλλά μπορει να προκαλεσει σε πειραματόζωα μυελουπερπλαστικά νοσήματα Αλλά αν συνδυαστεί και με άλλες μεταλλάξεις οξεία λευχαιμία

Flt3ITD AML Model Τα ποντίκια με συνδυασμό μεταλλάξεων Flt3ITD και IDH παρουσίασαν ΟΜΛ με σημαντική μείωση της επιβίωσης (229-352) σε σχέση με την ομάδα ελέγχου (μόνο Flt3ITD μετάλλαξη) Οι λευχαιμίες χαρακτηρίζονται απο διήθηση μεγάλων μονόμορφων βλαστών σε αιμοποιητικά και μη όργανα ταυτοποιήθηκαν λευχαιμίες που εκφράζουν μυελικους (CD3ε B220Mac1lowcKit+) και λεμφικούς δείκτες (Mac1 B220CD3ε +CD8+CD4 and Mac1B220CD3εCD8+CD4+)

Flt3ITD AML Model Μπορεί να επάγει την λευχαιμία αλλά διατήρηση;

συμπερασματικά Idh μεταλλαγμένες πρωτείνες αποτελούν θεραπευτικό στόχο καθώς μπορουν να αποφευχθούν οι δράσεις τους με αναστολείς (κυρίως η παραγωγή 2HG) ΟΜΩΣ είναι τοσο σημαντική η δράση του 2HG για τη διατήρηση καρκινικών κυτταρων; IDH 2 HSPC στο σπλήνα και στο μυελό αλλά από μόνη της Οχι αρκετη για εναρξη λευχαιμίας(τουλάχιστον στο χρονικό πλαίσιο της μελέτης) μειορρύθμιση της GATA1 δραστηριότητας και αυξορρύθμιση υποξίας and TNF-a pathways οδηγούν σε μείωση της διαφοροποίησης ερυθρών

συμπερασματικά Το μπλόκ της διαφοροποίησης μπορεί να να αναστραφεί με AGI-6780 2-HG από μεταλλαγμένη IDH μπορεί να προκαλέσει μυελική αποκλιση της διαφοροποίησης Μετά απο την απενεργοποίηση των μεταλλαγμένων γονιδίων παρατηρήθηκαν αλλαγές στο πολλαπλασιασμό διαφοροποίηση των βλαστών αλλά δεν αποδείχθηκε διαφορά στην επιβίωση. Μπορεί να παρατηρείται όφελος στον μυελό αλλά ποντικια απεβίωναν λόγω εξωαιμοποιητικών διηθήσεων Για τη μείωση επιπέδων 2-HG απαιτείται κάποιο χρονικό διάστημα (2 εβδομάδες) οπότε τα λευχαιμικά κυτταρα ίσως προκαλούν στο διάστημα αυτό σοβαρές βλάβες

συμπερασματικά We therefore validate mutant IDH proteins as very strong candidates for continued development of targeted anticancer therapeutics

ΕΥΧΑΡΙΣΤΟΥΜΕ ΓΙΑ ΤΗΝ ΠΡΟΣΟΧΗ ΣΑΣ !!!