Ρετρομεταθετά στοιχεία Ο ΕΝΔΟΓΕΝΗΣ ΡΕΤΡΟΪΟΣ HERV-K10 ΡΕΤΡΟΜΕΤΑΤΙΘΕΤΑΙ ΣΕ ΑΝΘΡΩΠΙΝΑ ΚΑΡΚΙΝΙΚΑ ΚΥΤΤΑΡΑ HeLa ΚΑΙ ΩΟΚΥΤΤΑΡΑ Ε. Δημητριάδου1, Δ. Νουτσόπουλος1, Γ. Μαρκόπουλος1, Γ. Βαρθολομάτος2, Ι. Γεωργίου3, Μ. Σύρρου1 & Θ. Τζαβάρας1. Εργαστήριο Γενικής Βιολογίας, Ιατρική Σχολή, Πανεπιστήμιο Ιωαννίνων, Αιματολογικό Εργαστήριο, Μονάδα Μοριακής Βιολογίας, Π.Γ.Ν.Ι. & Εργαστήριο Γενετικής της Αναπαραγωγής, Ιατρική Σχολή, Πανεπιστήμιο Ιωαννίνων. ΕΙΣΑΓΩΓΗ Μεταθετά Στοιχεία: ~45% - 3x106 DNA τρανσποζόνια ~3% - 0.3x106 Ρετρομεταθετά στοιχεία ~42% - 2.7x106 non-LTR: ~33.9% LTR: ~8.3% HERV 7.7% Περισσότερα ανενεργά Έκφραση σε πληθώρα καρκίνων και σε γαμετικά κύτταρα 1 νέα ενσωμάτωση / 10-100 γεννήσεις

HERV-K10: εξελικτικά νεότερη οικογένεια (<5x106 χρόνια) ΥΛΙΚΑ & ΜΕΘΟΔΟΙ 30-50 οικογένειες HERVs HERV-K10: εξελικτικά νεότερη οικογένεια (<5x106 χρόνια) Διαθέτει λειτουργικά ανοιχτά πλαίσια ανάγνωσης για τις πρωτεΐνες gag, prt, pol και env Προ-ιϊκά σωμάτια (virus-like particles) σε καρκινικές κυτταρικές σειρές Δομή ενδογενούς ρετροϊού HERV-K10 Ανασυνδυασμένο HERV-K10/EGFP-INT (Ελλειμματικός ρετροϊός) Λογική ανίχνευσης γεγονότων ρετρομετάθεσης

Πιστοποίηση ρετρομεταθέσεων σε γενωμικό επίπεδο με ανάλυση PCR ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ Ανίχνευση γεγονότων ρετρομετάθεσης μέσω EGFP θετικών κυττάρων με μικροσκοπία UV Πιστοποίηση ρετρομεταθέσεων σε γενωμικό επίπεδο με ανάλυση PCR Μέτρηση της συχνότητα ρετρομετάθεσης σε μονήρεις και μαζικούς πληθυσμούς κυττάρων HeLa Ο ενδογενής ρετροϊός HERV-K10 ρετρομετατίθεται σε ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα HeLa

Ο ενδογενής ρετροϊός HERV-K10 ρετρομετατίθεται σε ανθρώπινα ωοκύτταρα ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ Ανίχνευση γεγονότων ρετρομετάθεσης του ανασυνδυασμένου HERV-K10/EGFP-INT σε ανθρώπινα GVs με μικροσκοπία UV και ανάλυση PCR Ο ενδογενής ρετροϊός HERV-K10 ρετρομετατίθεται σε ανθρώπινα ωοκύτταρα

ΣΥΜΠΕΡΑΣΜΑΤΑ - ΣΥΖΗΤΗΣΗ Σε αντίθεση με την τρέχουσα θεώρηση, τα αποτελέσματά μας αποδεικνύουν για πρώτη φορά ότι ο ενδογενής ρετροϊός HERV-K10 δύναται να ρετρομετατεθεί. Ο ενδογενής ρετροϊός HERV-K10 είναι ρετρομεταθετικά ενεργός, ακόμα και όταν είναι ελλειμματικός. Η συχνότητα ρετρομεταθέσεων σε καρκινικά κύτταρα HeLa βρέθηκε σε υψηλά επίπεδα που φτάνουν ακόμη και το 17%. Τα καρκινικά και αναπτυσσόμενα γαμετικά κύτταρα αποτελούν ευνοϊκό κυτταρικό περιβάλλον για τη γένεση γεγονότων ρετρομετάθεσης. Συνολικά, τα ανθρώπινα LTR ρετροτρανσποζόνια δεν είναι άχρηστο, εγωιστικό, παρασιτικό DNA, αλλά αποτελούν ένα ρετρομεταθετικά ενεργό υποσύνολο του γενώματος που διαδραματίζει σημαντικό ρόλο σε βασικές βιολογικές διεργασίες. Ευχαριστώ