Σ. Παπαβασιλείου, Α. Φωτεινοπούλου ΄Ασκηση 10 Έμμορφα συστατικά του αίματος Ερυθρά αιμοσφαίρια Λευκά αιμοσφαίρια Λευκοκυτταρικός τύπος Αιμόλυση των ερυθροκυττάρων Αιματολογικές παράμετροι Ράνια Τσιτσιλώνη Σ. Παπαβασιλείου, Α. Φωτεινοπούλου

Συστατικά του αίματος πλάσμα έμμορφα στοιχεία ερυθρά (απύρηνα) λευκά (εμπύρηνα) αιμοπετάλια

Προέλευση των έμμορφων συστατικών του αίματος μυελική σειρά κοινό αρχέγονο πολυδύναμο κύτταρο (μυελός των οστών) μονοβλαστική σειρά λεμφική σειρά

Ερυθρά αιμοσφαίρια φυσιολογικά 4,5-6 x 106/mm3 αίματος

Ερυθρά αιμοσφαίρια - Ερυθροποίηση

Ερυθρά αιμοσφαίρια έλλειψη Fe φυσιολογικά 4,5-6 x 106/mm3 αίματος μικροκυττάρωση ανισοκυττάρωση ποικιλλοκυττάρωση φυσιολογικά 4,5-6 x 106/mm3 αίματος

Φυσ. τιμή : 4-10 x 103/mm3 αίματος Λευκά αιμοσφαίρια (Ι) Φυσ. τιμή : 4-10 x 103/mm3 αίματος

Λευκά αιμοσφαίρια (ΙΙ) ουδετερόφιλο & βασεόφιλο    μονοκύτταρο & ουδετερόφιλα πολυλοβωτά ουδετερόφιλα (μεγαλοβλαστική αναιμία)    λεμφοκύτταρο & ουδετερόφιλο

Λευκά αιμοσφαίρια - Διαφοροποίηση Αιμοποιητικοί παράγοντες Ερυθροποιητίνη FILGRASTIM (G-CSF), SAGRAMOSTIM (GM-CSF), Θρομβοποιητίνη

Μέτρηση έμμορφων συστατικών Αραίωση αίματος Πλάκα Neubauer Καλυπτρίδα Παρατήρηση στο μικροσκόπιο Καταμέτρηση

Πλάκα Neubauer ή αιμοκυτταρόμετρο 16 x (1/20x1/20x1/10) 1x1x1/10

Πείραμα Α1. Μέτρηση ερυθρών αιμοσφαιρίων Θα χρησιμοποιήσετε: Αίμα από μοσχάρι Θα αραιώσετε: 3,98 ml (~4 ml) φυσιολογικό ορό στο σωληνάκι «RBC» 20 μl αίμα με πιπέττα σταθερού όγκου Ανάδευση στο vortex ΑΡΑΙΩΣΗ 200 φορές Με σιφώνιο με κόκκινο λαστιχάκι Αίμα μέχρι ένδειξη 0,5 Φυσιολογικό ορό μέχρι ένδειξη 101 ΑΡΑΙΩΣΗ 200 φορές Θα μετρήσετε: Αριθμό RBC σε πλάκα Neubauer (5 τετράγωνα με 16/αδες) Μέτρησα χ κύτταρα σε όγκο 16 x (1/20 x 1/20 x 1/10) mm3 για το ένα τετράγωνο ή 5 x 16 x (1/20 x 1/20 x 1/10) mm3 για τα πέντε τετράγωνα =80 Θα υπολογίσετε: Αριθμό RBC ανά mm3 αρχικού αίματος

Πείραμα Α2. Μέτρηση λευκών αιμοσφαιρίων Θα χρησιμοποιήσετε: SOS: βλέπουμε μόνο τους πυρήνες των λευκοκυττάρων Αίμα από μοσχάρι Θα αραιώσετε: 380 μl (~400 μl) διάλυμα Turk στο σωληνάκι «WBC» 20 μl αίμα με πιπέττα σταθερού όγκου Ανάδευση στο vortex ΑΡΑΙΩΣΗ 20 φορές Με σιφώνιο με λευκό λαστιχάκι Αίμα μέχρι ένδειξη 0,5 Διάλυμα Turk μέχρι ένδειξη 11 ΑΡΑΙΩΣΗ 20 φορές Θα μετρήσετε: Αριθμό WBC σε πλάκα Neubauer (4 πλευρικά τετράγωνα με 16/αδες) Μέτρησα χ κύτταρα σε όγκο 1 x 1 x 1/10 mm3 για το ένα τετράγωνο ή 4 x (1 x 1 x 1/10) mm3 για τα τέσσερα τετράγωνα Θα υπολογίσετε: Αριθμό WBC ανά mm3 αρχικού αίματος

Πείραμα Α3. Προσδιορισμός λευκοκυτταρικού τύπου Θα χρησιμοποιήσετε: Πολύ πρόσφατο, ΜΗ ΑΡΑΙΩΜΕΝΟ αίμα (έδρα) Θα φτιάξετε πλακάκι με επίχρισμα: Απλώνετε μια σταγόνα σε αντικειμενοφόρο Αφήνετε να στεγνώσει Βάφετε με May-Grunwald και στη συνέχεια με Giemsa Ξεπλένετε καλά SOS: εδώ βλέπουμε τα λευκοκύτταρα Θα μετρήσετε: Τουλάχιστον 50 WBC Θα ξεχωρίσετε ουδετερόφιλα, λεμφοκύτταρα, υπόλοιπα κοκκιοκύτταρα Θα υπολογίσετε: % αναλογία του κάθε πληθυσμού στο σύνολο των WBC που μετρήσατε

Αιμόλυση = η έξοδος Hb από τα ερυθροκύτταρα

Πείραμα Β1. Προσδιορισμός ωσμωτικής αντίστασης ερυθροκυττάρων Θα χρησιμοποιήσετε: Φρέσκο αίμα από μοσχάρι (Πίνακας 10.2, Σειρά Α) Θα φτιάξετε τα δείγματα: Προσθέστε στους σωλήνες 1-10 τα διαλύματα του Πίνακα 10.2 - Ανάδευση Προσθέστε 0,1 ml φρέσκου αίματος με πιπέττα σταθερού όγκου Καλή ανάδευση (με parafilm) και επώαση 30 min Φυγοκέντρηση 5 min, 3000 rpm Φωτομέτρηση υπερκειμένων στα 540 nm ΜΕ ΤΗΝ ΙΔΙΑ ΚΥΨΕΛΙΔΑ Θα υπολογίσετε: OD δείγματος Χ 100 = % αιμόλυση + γραφική παράσταση OD προτύπου(=σωλ. 1) εύρος αιμόλυσης: αρχή – τέλος αιμόλυσης (~ 0,50 % - 0,30 % NaCl)

Πείραμα Γ1. Ποσοτικός προσδιορισμός της αιμοσφαιρίνης Μετατροπή αιμοσφαιρίνης σε κυανομεθαιμοσφαιρίνη Θα φτιάξετε δείγματα με: 5 ml διαλύματος Drabkin (ANTΛΙΑ) + 0,02 ml αίμα (με πιπέττα σταθερού όγκου) ανάδευση επώαση για 15 min στους 25ο C φωτομέτρηση στα 540 nm Θα υπολογίσετε: συγκέντρωση Hb σε gr/100 ml αίματος

Πείραμα Γ2. Προσδιορισμός του αιματοκρίτη Φυγοκέντρηση 3000 rpm 30 min 25o C

Πείραμα Γ3. Προσδιορισμός ταχύτητας καθίζησης Θα χρησιμοποιήσετε: Σιφώνιο Westergen και αντίστοιχο πλαίσιο Γεμίζουμε το σιφώνιο μέχρι την ένδειξη 0 Τοποθετούμε σε κάθετη θέση στο πλαίσιο Θα μετρήσετε: ΤΚΕ μετά από 1 και 2 ώρες Καταγράψτε τις ενδείξεις

Αιματολογικές παράμετροι Θα υπολογίσετε: MCΗ (mean corpsular Hb): συγκέντρωση Hb (gr/100 ml) (φ.τ. 30-32 x 10-12 gr) (πόση Hb έχει κάθε RBC) αριθμό RBC MCHC (mean corpsular Hb concentration): Hb (gr/100 ml) (φ.τ. 33,5%) (μέση συγκέντρωση Hb στα RBC) αιματοκρίτη MCV (mean corpsular volume): αιματοκρίτης (φ.τ. 80-90 μ3) (‘πόσο μεγάλα’ είναι τα RBC) αριθμό RBC Mόρια Hb/RBC: MCH x (6 x 1023) (x 107 μόρια Hb/ερυθρό) MB Hb 6,7 x 104