ΕΠΙΛΟΓΗ ΠΙΘΑΝΩΝ ΔΙΑΓΟΝΙΔΙΑΚΩΝ ΦΥΤΩΝ Εργαστηριακή άσκηση Νο2
Το A. tumefaciens ως εργαλείο της γενετικής μηχανικής Τα vir γονίδια και το Τ-DNA μπορούν να βρίσκονται σε ξεχωριστά πλασμίδια Μόνο το δεξιό και αριστερό συνοριακό απαιτούνται για τη μεταφορά του T-DNA. Περιοχή κλωνοποίησης Φυτικών γονιδίων Binary vector LB Γονίδιο επιλογής NPTII (Για φυτά) Γονίδιο επιλογής (τζενταμυκίνη) RB T-DNA vir γονίδια Γονίδιο επιλογής (Για βακτήρια καναμυκίνη) ori (E.coli) ori (Agrobacterium) ori (Agrobacterium) Το γονιδίωμα του στελέχους του Α. tumefaciens φέρει γονίδιο που του προσδίδει ανθεκτικότητα σε αντιβιοτικό (ριφαμπικίνη)
GUS
ταυτοποίηση διαγονιδιακών φυτών Mε PCR, με εκκινητές εξειδικευμένους για τα γονίδια προς ένθεση για τα συνοριακά για περιοχές δίπλα στa συνοριακά (για εξακρίβωση ενσωμάτωσης DNA του φορέα) Ανάστροφη PCR (IPCR) Real-Time PCR Mε Southern ανάλυση για την αναγνώριση μοναδιαίου αντίγραφου του ένθετου γονιδίου στο φυτικό γονιδίωμα FISH (Fluorescence in situ hybridization)
Ι-PCR
Τ-DNA fingerprinting Theuns I, et al. , 75-84 2002