Η παρουσίαση φορτώνεται. Παρακαλείστε να περιμένετε

Η παρουσίαση φορτώνεται. Παρακαλείστε να περιμένετε

Αν υποθέσουμε ότι σε κάποιο βακτηριακό κλώνο μιας γονιδιωματικής βιβλιοθήκης έχει εισαχθεί «ανέπαφο» ένα γονίδιο, θα ήταν άραγε δυνατόν το γονίδιο αυτό.

Παρόμοιες παρουσιάσεις


Παρουσίαση με θέμα: "Αν υποθέσουμε ότι σε κάποιο βακτηριακό κλώνο μιας γονιδιωματικής βιβλιοθήκης έχει εισαχθεί «ανέπαφο» ένα γονίδιο, θα ήταν άραγε δυνατόν το γονίδιο αυτό."— Μεταγράφημα παρουσίασης:

1

2

3 Αν υποθέσουμε ότι σε κάποιο βακτηριακό κλώνο μιας γονιδιωματικής βιβλιοθήκης έχει εισαχθεί «ανέπαφο» ένα γονίδιο, θα ήταν άραγε δυνατόν το γονίδιο αυτό να εκφραστεί; Μια cDNA βιβλιοθήκη είναι ένα σύνολο βακτηριακών κλώνων που περιέχουν αντίγραφα του ώριμου mRNA όλων των γονιδίων που εκφράζονται σε συγκεκριμένα κύτταρα ( ηπατικά, παγκρεατικά, πρόδρομα ερυθροκύτταρα, κλπ)

4 Στάδια κατασκευής cDNA βιβλιοθήκης 1 2ν ώριμο mRNA γονιδίου Χ 1. απομόνωση ολικού ώριμου mRNA από τα κύτταρα- «στόχους» 2. σύνθεση mRNA – cDNA 3. το υβριδικό μόριο αποδιατάσσεται 4. με καλούπι το cDNA δημιουργούνται δίκλωνα μόρια DNA 5. τα δίκλωνα μόρια εισάγονται σε πλασμίδια

5 6. τα πλασμίδια εισάγονται σε βακτήρια-ξενιστές. 7.τα βακτήρια καλλιεργούνται σε θρεπτικό υλικό που περιέχει αντιβιοτικό. 8.προσδιορίζονται τα βακτήρια που έχουν προσλάβει πλασμίδιο 9. Με ειδική διαδικασία επιλέγεται ο επιθυμητός κλώνος…. Το σύνολο των βακτηριακών κλώνων που περιέχει όλα τα γονίδια που εκφράζονται σε ένα κυτταρικό τύπο, απαλλαγμένα από τα εσώνια τους, ονομάζεται cDNA βιβλιοθήκη.

6 Στάδια κατασκευής cDNA βιβλιοθήκης 1.Απομόνωση ώριμου mRNA από τα κύτταρα «στόχους» 2.Σύνθεση complementary DNA: σχηματίζονται υβριδικά μόρια mRNA-cDNA 3.Το mRNA διασπάται με χημικές ουσίες ή αποχωρίζεται από την συμπληρωματική αλυσίδα cDNA με θέρμανση 4.Το cDNA γίνεται δίκλωνο: 5.Τα δίκλωνα μόρια DNA εισάγονται σε πλασμίδια 6.Τα πλασμίδια εισάγονται στα κύτταρα-ξενιστές (μετασχηματισμός βακτηρίων) 7.καλλιέργεια των βακτηρίων σε θρεπτικό υλικό που περιέχει αντιβιοτικό 8.Προσδιορίζονται τα βακτήρια που έχουν δεχθεί πλασμίδιο. 9.επιλογή ενός κλώνου που έχει το επιθυμητό τμήμα DNA με ειδική διαδικασία animation

7 Ποια ένζυμα και με ποια σειρά συμμετέχουν στην κατασκευή μιας cDNA βιβλιοθήκης; 1.Αντίστροφη μεταγραφάση 2.DNA πολυμεράση 3.Μια περιοριστική ενδονουκλεάση 4.DNA δεσμάση


Κατέβασμα ppt "Αν υποθέσουμε ότι σε κάποιο βακτηριακό κλώνο μιας γονιδιωματικής βιβλιοθήκης έχει εισαχθεί «ανέπαφο» ένα γονίδιο, θα ήταν άραγε δυνατόν το γονίδιο αυτό."

Παρόμοιες παρουσιάσεις


Διαφημίσεις Google