Χρώση ενδοσπορίων Dr ΣτΕλιοΣ ΛογοθΕτηΣ

Λίγο για τις χρώσεις Είναι υδατικά ή αλκοολικά διαλύματα μιας μόνο βασικής χρωστικής . Συνήθως μπλε του μεθυλενίου , βασική φουξίνη , κρυσταλλικό ιώδες. Μορφολογία τ ωνβακτηρίων (σχήμα, διάταξη ). Στο μονιμοποιημένο δείγμα – για ΟΡΙΣΜΕΝΟ χρονικό διάστημα ,ξέπλυμα – στέγνωμα – παρατήρηση

ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ ΜΟΝΙΜΟΠΟΙΗΣΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ ΜΟΝΙΜΟΠΟΙΗΣΗΣ Η μονιμοποίηση των μικροοργανισμών σε αντικειμενοφόρο πλάκα Σκοτώνει τα μικρόβια Συντηρεί τα διάφορα μέρη των μικροβίων ( ́παγώνουν ́ ́). Heat fixing ( θέρμανση σε φλόγα ) Chemical fixing ( με εφαρμογή διαλύματος μεθυλικής αλκοόληςγια 1 min, διατήρηση έμορφων στοιχείων, καθαρό υπόστρωμα

Ενδοσπόριο ανθεκτική μορφή την οποία λαμβάνουν κάποια βακτήρια σε αντίξοες περιβαλλοντικές συνθήκες. Τα ενδοσπόρια έχουν τη δυνατότητα σε ευνοϊκές συνθήκες να πάρουν την τυπική βακτηριακή τους δομή και να ανπαραχθούν. Σπόροι Μέλη μερικών βακτηριακών γενών μπορούν να σχηματίσουν σπόρους

Τα δύο συνηθέστερα είναι Gram Θετικά βακτήρια: Το υποχρεωτικά αερόβιο γένος Bacillus και Tο υποχρεωτικά αναερόβιο γένος Clostridium Τα άλλα βακτήρια που είναι γνωστό ότι σχηματίζουν σπόρους είναι ο Gram θετικός κόκκος, η Sporosarcina και η ρικέτσια του πυρετού Q, Coxiella burnetii. Ο σπόρος είναι κύτταρο σε ανάπαυση που αντιστέκεται εξαιρετικά σε υψηλές θερμοκρασίες, στην αποξήρανση, την θερμότητα και τα χημικά μέσα. Όταν επανέλθει σε ευνοικές συνθήκες θρέψεως και ενεργοποιηθεί ο σπόρος γονιμοποιείται για να παραγάγει ένα και μόνο βλαστικό κύτταρο.

Σπορογονία Αρχίζει όταν οι θρεπτικές συνθήκες γίνονται δυσμενείς με σημαντικότερο παράγοντα την εξάντληση της πηγής αζώτου και άνθρακα Εμφανίζεται σε καλλιέργειες που έχουν τελείωσει την λογαριθμική φάση ανάπτυξης Συνεπάγεται την παραγωγή πολλών νέων δομών, ενζύμων και μεταβολιτών μαζί με την εξαφάνιση πολλών βλαστικών κυτταρικών συστατικών

Μορφολογία της σπορογονίας Απομόνωση ενός τελικού πυρήνα με την εσωτερική ανάπτυξη της κυτταρικής μεμβράνης. Αυτό συνεπάγεται πτύχωση της μεμβράνης προς τα μέσα έτσι που να σχηματίσει μία διπλή μεμβρανική δομή που οι απέναντι επιφάνειες της αντιστοιχούν στην επιφάνεια του κυτταρικού περιβλήματος που συνθέτει το κυτταρικό τοίχωμα Τα σημεία αναπτύξεως κινούνται τώρα προοδευτικά προς τον πόλο του κυττάρου έτσι ώστε να περιβάλλουν τον αναπτυσόμενο σπόρο Οι 2 μεμβράνες σπόρων αρχίζουν τώρα την ενεργό σύνθεση ειδικών στοιβάδων που θα σχηματίσουν το κυτταρικό περίβλημα Το τοίχωμα και τον Φλοιό του σπόρου που βρίσκονται μεταξύ των μεμβρανών που είναι η μία απένατι απο την άλλη Το περίβλημα και το εξωσπόριο που βρίσκονται έξω απο τισ απένατι μεμβράνες Στο απομωνομένο κυτόπλασμα η πυρήνα πολλά βλαστικά κυτταρικά ένζυμα εκφυλίζονται και αντικαθίστανται απο μία σειρά ιδιαίτερων συστατικών σπόρων

Σχήμα σπορογονίας

Απο τι αποτελέιται ένας σπόρος? ΠΥΡΗΝΑΣ Είναι ο πρωτοπλάστης του σπόρου.Περιέχει ένα πλήρη χρωμόσωμα,όλα τα συστατικά του μηχανισμού συνθέσεως πρωτείνης και ενεργοποιητικό σύστημα βασισμένο στην γλυκόλυση. ΤΟΙΧΩΜΑ ΣΠΟΡΟΥ Είναι η έσώτατη στοιβάδα που περιβάλει την εσωτερική μεμβράνη του σπόρου Περιέχει κανονικό πεπτιδιγλυκάνιο και γίνεται το κυτταρικό τοίχωμα του γονιμοποιημένου βλαστικού κυττάρου ΦΛΟΙΟΣ Η παχύτερη στοιβάδα του περιβλήματος του σπόρου. Περιεχει διαφορετικού τύπου πεπτιδογλυκάνιο με πολύ λιγότερες χιαστές συνδέσεις και είναι εξαιρετικά ευα’ισθητο στην λυσοζύμηΗ αυτόλυσή του παίζει σημαντικό ρόλο ατην εκβλάστηση του σπόρου ΠΕΡΙΒΛΗΜΑ Αποτελείται απο κερατονοειδή πρωτείνη με πολλόυς δεσμούς δισουλφιδίου. Αδιαπέραστη στοιβάδα που δίνει την αντοχή στα αντιμικροβιακά χημικά μέσα ΕΞΩΣΠΟΡΙΟ Λιποπρωτεινική στοιβάδα με λίγο υδατάνθρακα

Χρώση Ενδοσπορίων Endospore Schaeffer-Fulton Stain ΤΕΧΝΙΚΗ: Πράσινο του μαλαχίτη σε μονιμοποιημένο δείγμα με θέρμανση μέχρι βρασμού 5min Ξέπλυμαμε νερό για 30sec Xρωστική αντίθεσης – σαφρανίνη 30 sec