Školiteľ: doc. RNDr. Andrej Boháč, PhD. UNIVERZITA KOMENSKÉHO V BRATISLAVE Prírodovedecká fakulta Katedra organickej chémie Rýchla chromatografická technika pre preparatívnu separáciu so strednou rezolúciou Miroslav Murár Školiteľ: doc. RNDr. Andrej Boháč, PhD. BRATISLAVA 2014

Autori porovnávajú flash chromatografiu s bežnou (gravitačnou chromatografiou) a opisujú postup flash chromatografie Gravitačná chromatografia je pri preparatívnom delení časovo náročná metóda. Pri delení 1 až 2 gramov sa rapídne predlžuje čas a ďalšie použitie chromatografickej kolóny ťažko realizovateľné.

Autori popisujú kombináciu tlakovej a stĺpcovej chromatografie, ktorú nazvali flash chromatografia. Vychádzali z chromatografických metód, kedy bolo možné podeliť látky s rozdielom RF = 0.05 a metód skrátenia času o 1 až 3 hodiny. Cielom bolo opísať najvhodnejšiu metodiku a parametre flash chromatografie a upozorniť na jej praktické obmedzenia

Autori pri flash chromatografii sledovali nasledovné parametre: - rezolúciu - mesh SiO2 - prietok - priemer kolóny a množstvo SiO2 - veľkosť vzorky Vypracovali metodiku ako postupovať pri flash chromatografii.

Rezolúcia bola určovaná na základe pomeru čas medzi píkmi látkami a šírky v ½ výšky signálu. Mesh sili gélu udáva veľkosť povrchu na základe veľkostí častíc. Čím menší rozmer SiO2 čím menší rozmer sili gélu tým väčší mesh. Prietok pri ktorom dostávali autori najefektívejšie delenie látok bol 2 ml/L ( 2 palce za minútu na kolóne)

Priemer kolóny a množstvo sili gélu je závislé od veľkosti vzorky, RF hodnôt, autori v tabulke aj odporúčajú ideálnu veľkosť frakcie.

Metodika pri flash chromatografii 1 Pomocou TLC nájsť vhodnú elučnú zmes 2 Určiť kolónu o vhodných rozmerov (tabuľka) 3 Pridanie SiO2 do chrom. kolóny 4 Premývanie SiO2 v kolóne elučnou zmesou 5 Nanesenie vzorky

1. Identifikácia ideálnej elučnej zmesi Pomocou TLC hľadáme elučnú zmes, kde je rozdiel medzi RF hodnotami látok 0.35 ideálne ak je tento rozdiel v strede TLC platničky. Dosiahnutie rozdielných RF hodnôt dosahujeme zmenou polarity eleučnej zmesi alebo jej kvality. V prípade rozdielu RF hodnôt pod 0.15 je delenie problematické, treba zvoliť väčší priemer kolóny, menšie frakcie...

2. Určenie vhodnej veľkosti kolóny Autori udávajú konštantnú výšku 5-6 palcov (12-14 cm)

3 Pridanie SiO2 do chrom. Kolóny Na dno chromatogra- fickej kolóny vata, po- tom zrnite jší SiO2 (1/8), alebo aj morský piesok, následne dané množ- stvo pevnej fázy, opäť zrnitejší SiO2.

4 Premývanie SiO2 v kolóne elučnou zmesou Následne začíname premývať chromatografickú kolónu elučnou zmesou pri prietok ideálne 2ml/L. Nezabudnite otvoriť ventil !!! Tento konštantný prietok je dosahovaný pri istom tlaku, ktorý pevnú fázu zhutní Túto elučnú zmes je možno opätovne použiť na chromatografické delenie.

5 Nanesenie vzorky Autori nanášajú vzorku na v roztoku pri 20-25 % koncentrácii. Vzorka by nemala byť nanesená na suchý sili gél. Nanášanie na pevnej fáze autori nespomenuli. Pri samotnom delení je vhodné robiť TLC analýzu z frakcii (každá druhá). Odporúčaný objem na TLC je 5 μL.

Záver Flash chromatografia je lacná metóda. Pri hore uvedenej metodike je možné počas 10-15 minút podeliť od 0.1 – 10 g látky. Najlepšie výsledky ak je rozmer SiO2 40-63 μm, prietok 2 ml/min a RF viac ako 0.35. Pri veľkých kolónach je vhodná ich regenerácia, premytím polárnejšou zmesou (EA  Acetón)

NEZABUDNITE SI NECHAŤ ŠTANDART DELENEJ ZMESI !!! Ďakujem za pozornosť