Cuplarea lanţului respirator cu fosforilarea oxidativă 1. Teoria chimică (a intermediarilor comuni) - 1953 - E.C.S. Slater
2. Teoria conformaţională - 1964 – P.D. Boyer - modificarea conformaţională a transportorilor de e- 3. Teoria chemiosmotică (a intermediarilor comuni) - 1961 – Peter Mitchell - gradient de protoni transmembranar stare energizată H2O H+ + HO- η 54%
Controlul sintezei ATP - ADP - blocarea ATP-sintazei – F1 - fluxul de protoni prin F0 - stim. fosfataza activarea piruvat dehidrogenazei - modulator alosteric pozitiv – izocitrat-dehidrogenaza
Transportul ATP-ului din mitocondrie - pH mitocondrial – ATP4- - pH citoplasmatic – ADP3- - ATP-translocaza ATP din mitoc. în citoplasmă [ATP] + [ADP] = cst.
Inhibitorii lanţului respirator şi ai fosforilării oxidative - rotenona – inh. C I - pericidina, amobarbital, compuşi organo-mercurici complex cu Fe-S inh. reducerea CoQ - malonat, oxalacetat – inh. succinat-DH-aza - antimicina A (Streptomyces cereus) – C III – CoQH2 cit. bT - CN-, azide – C IV - Fe3+ (cit. a3) - CO – cit. (Fe2+) Lonchocarpus nicou
2. Inhibitorii fosforilării oxidative - oligomicina A – inh. ATP-sintaza (F0) - dicilohexil-carbodiimida (DCCD) – gr. COOH din ac. glutamic (F0) - aurovertina – subunit. β (F1) 3. Decuplanţi LR-FO - termogenina - florile plantelor - acizi – gradient de pH - gramicidina A - gradient de pH - tiroxina (T4) – decuplant - 2,4-(NO2)2-fenol – fluxul de protoni
Alte procese oxidative celulare - monooxigenaze (hidroxilaze) R-H + O2 + 2 H+ + 2 e- R-OH + H2O - sursă de H – NADH, NADPH - oxidaze cu funcţii mixte microsomiale (OFMM) Citocrom P450 - membrana REN - structură - proteină heminică – citocrom P450 – substrat, O2 - flavoproteină – NADPH-CYP450-reductaza - fosfatidilcolina - 2007 – 7700 de citocromi - CYP450 – 36 de izoenzime
- CYP 2D6, CYP 2C19 - au afinitate diferită faţă de substrat
- metabolizarea compuşilor endogeni, exogeni (medicamente 75%) - sinteza estrogenilor, testosteronului, colesterolului - metabolizarea vitaminei D CYP 3A4 - metabolizarea medicamentelor - fetus CYP3A7 - intestin –pro-drug
Substrat – blocante ale canalelor de calciu, imunusupresoare, haloperoidol, sildefanil, contraceptive hormonale, codeina, paracetamol Inhibitori – macrolide, azoli antifungici, amiodarona, cimetidina, metronidazol, inhibitori de protează, fluoxetină, verapamil, - bergamotina (grape fruit), echinacea Inductori – barbiturice, carbamazepină, fenitoină, rifampicină - hiperforină (sunătoare)
METABOLISMUL GLUCIDELOR glucide – compuşi polihidroxicarbonilici sau derivaţi ai acestora surse – vegetale (cereale, seminţe, cartofi), animale (glicogen) rol în organism - energetic - 1 g 4,1 kcal - structural – glicolipide, glicoproteine - funcţional – Ac, H
40-65% aport zilnic min 130 g carbohidraţi
Clasificare monozaharide oligozaharide polizaharide
MONOZAHARIDE după natura gr. carbonil – aldoze (glu), cetoze (fru) după nr. at de C – trioze, tetroze, pentoze, hexoze Stereochimia izomerie optică nr. izomerilor = 2n D(+), D(-) racemic - +/- după nr. at de C asimetrici - enantiomeri - diastereoizomeri
Structura ciclică semiacetali (semicetal intern) hidroxil semiacetalic (glicozidic) anomeri – α, β
- epimeri
Deoxiglucozidele 2-deoxiriboza – ADN L-fucoza - glicoproteine Aminoglucozidele glucozamina
Proprietăţi fizico-chimice - substanţe solide, cristaline - reactivitate chimică ridicată 1. Reducere D-glucoză D-sorbitol D-fructoză D-manitol 2. Oxidare D-glucoză acid gluconic D-glucoză acid glucuronic
3. Condensare cu amine 4. Esterificare 5. Sinteza glicozidelor glucoză + proteine proteine glicozilate 4. Esterificare glucoză + ATP glucoză-6-fosfat + ADP 5. Sinteza glicozidelor - ozide – glucozide, galactozide - O-glicozide, S-glicozide, N-glicozide
OLIGOZAHARIDE 2-10 monozaharide nereducătoare – 2 gr. OH glicozidice - zaharoza reducătoare – 1 gr. OH glicozidică, 1 gr. OH alcoolică – maltoza, lactoza
OLIGOZAHARIDE 2-10 monozaharide nereducătoare – 2 gr. OH glicozidice - zaharoza reducătoare – 1 gr. OH glicozidică, 1 gr. OH alcoolică – maltoza, lactoza
POLIZAHARIDE (glicani) eliberează prin hidroliză monozaharide sau derivaţi ai acestora după structură - homoglicani – amidon, glicogen, celuloză - heteroglicani rol - structural – celuloză, mucopolizaharide - rezervă energetică – amidon, glicogen
Glicogen dispoziţie – ficat, muşchi structură - α(14), α(16) moleculă ramificată nucleu proteic cu apa formează soluţii coloidale
DIGESTIA ŞI ABSORBŢIA GLUCIDELOR Digestia glucidelor alimente – monozaharide, dizaharide, polizaharide cavitatea bucală – amilaza salivară – hidroliza amidonului prelucrat termic oligozaharide intestinul subţire - amilaza pancreatică – dizaharide, dextrine limită, oligozaharide - leg. 14 interne - dizaharidazele (marginea în perie) - α-glucozidaza (maltaza) - sucraza-izomaltaza - lactaza - trehalaza
lipsa sau reducerea digestiei la nivelul marginii în perie IG bacterii intestinale degradare acizi, CO2, H2, CH4 tulburări digestive intoleranţa la lactoză, zaharoză celuloza nu este degradată în IS, cantităţi mici în IG
Celule epiteliale intestinale Absorbţia glucidelor sub formă de monozaharide viteza – 120 g glu/h glu - mecanism activ - simport Lumenul intestinal Celule epiteliale intestinale Lichid interstitial, sânge
- gal – similar glu. sub formă de monozaharide fru – proteine transportoare, mecanism de transport saturabil IS vena portă ficat depozitare glicogen (150 g glu) ţesuturi utilizare celule – susteme transportoare - GLUT 1 – eritrocite, BHEN - GLUT 2 – tb. ren, ficat, pancreas (β) - GLUT 3 – neuroni, placenta - GLUT 4 – ţ. adipos, m. scheletici
CĂILE DE UTILIZARE ALE GLUCOZEI glucoza - sursă de energie – glicoliză CATC - sinteză de compuşi - glicogen - pentoze nucleotide, acizi nucleici - acizi uronici proteoglicani, detoxifiere - glicerol, acetil-CoA neolipogeneză - aa neesenţiali, purine, pirimidine - NADPH reacţii de reducere
utilizarea glu în ţesuturi depinde de: - starea metabolică - anabolică (postprandial) - glu piruvat CATC ATP - ficat TG, PL, colest ţ. adipos - catabolică (interprandial) - glu energie în ţ. glucodependente - tipul de ţesut - eritrocite – glicoliză anaerobă, pentoze - creier – insulino-dep., glicoliză aerobă, pentoze - ţ. adipos - insulino-dep., acetil-CoA AG - ficat – glicoliză, depozitare, ac. glucuronic
celule – fosforilare glu-6-P ionizare lipofobă enzime – hexokinaze - KM mic - glucokinaza - KM mare - inductibilă – glu, insulină - stim. – fru-1-P - inh. – fru-6-P
degradarea monozaharidelor la piruvat proces exergonic GLICOLIZA degradarea monozaharidelor la piruvat proces exergonic calea Embden-Meyerhof-Parnas 10 reacţii C6H12O6 + 2 NAD+ + 2 ADP + 2P 2 CH3-CO-COOH + 2 (NADH+H+) + 2ATP +2H2O
pentozo-P glu-6-P glu-1-P glicogen, acid glucuronic hexokinaza – KM glucokinaza – inductibilă, KM , hepatocite, celule β-pancreatice pentozo-P glu-6-P glu-1-P glicogen, acid glucuronic fru-6-P glicoliză
2
3 PFK1 - ATP, P-enolpiruvat, 1,3-P2-glicerat - inh. - citrat – inh. - glucagon stim. lipoliza AG β-ox. acetil CoA CATC citrat inh. PFK1 acumulare glu-6-P - fru-2,6-P2 –stim. alosteric - afinit pt. substrat
fru-2,6-P2 –stim. alosteric - afinit pt. substrat - glucagon AMPc fru-2,6-P2 inh. glicoliza, lipogeneza - insulina stim. PDE AMPc stim. PFK2 fru-2,6-P2
4 r. endergonică 5
6 fixarea GA3P pe E prin gr. SH ox. NAD+ NADH eliberarea de pe E fosforilarea tioesterului leg. macroergică
7 - [ATP] r. blocată eritrocite - 2,3-P2-glicerat fixarea O2 pe Hb - deficit de hexokinază fixarea O2 pe Hb
8 9 - Mg2+ - conformaţional, catalitic
10 - E - inactivată prin fosforilare (glucagon, ADR) - activată prin defosforilare (insulina, este şi inductor) - E 2 forme – L şi M - r. exergonică
piruvat acetil CoA CATC LR FO Glicoliza aerobă piruvat acetil CoA CATC LR FO Glicoliza anaerobă - lactat sânge ficat piruvat gluconeogeneză glucoză - lactat pH acid inh. PFK1
- desfăşurarea r. din glicoliză depinde de: - necesarul de ATP - glicemie – hipoglicemie stim. gluconeogeneza, inh. Glicoliza - necesarul de intermediari pentru - gluconeogeneză - metabolismul lipidic - calea pentozo-fosfaţilor - CATC
Bilanţul energetic al degradării glucozei anaerobioză reacţia Consum ATP Sinteză ATP glu glu-6-P - 1 mol - fru-6-P fru-1,6-P2 1,3-P2-glicerat 3-P-glicerat + 2 moli P-enolpiruvat piruvat TOTAL -2 moli + 4 moli 2 moli / mol glu
aerobioză glicoliză Sinteză FADH2 Sinteză NADH Consum ATP Sinteză ATP glu glu-6-P - 1 mol fru-6-P fru-1,6-P2 1,3-P2-glicerat 3-P-glicerat + 2 moli P-enolpiruvat piruvat gliceraldehid-3-P 1,3-P2-glicerat ........ + 6 moli CATC piruvat acetil CoA + 6 (4) moli iso-citrat α-ceto-glutarat α-ceto-glutarat succinil CoA succinil CoA succinat succinat fumarat .............. + 4 moli L-malat oxal-acetat TOTAL - 2 moli + 40 moli + 38 (36) moli
Inhibitorii glicolizei 2-deoxiglucoza – inh. r. catalizată de hexokinază comp. cu Hg, ag. alchilanţi – gr. SH GA3P-DH-aza fluoruri – inh. enolaza arseniat – r. cu GA3P
CALEA HEXOZO-FOSFAŢILOR (şuntul pentozo-monofosfaţilor) proces anaerob, participă şi pentoze din alimente rezultă NADPH reacţii de reducere, biosinteze (AG, steroizi, colesterol), reacţii de hidroxilare (CYP450) NADPH în reacţiile de apărare antiinfecţioasă NADPH pentru refacerea GSH hexoze pentoze nucleotide, acizi nucleici, coenzime (NAD, FAD, CoA)
2 etape - oxidativă (hexoze pentoze) - neoxidativă (conversia pentozelor) 1. Etapa oxidativă
necesar NADPH > necesar pentoze pentoze sunt transf. în hexoze
2. Etapa neoxidativă
GA-3-P + DHAP fru-1,6-P2 fru-6-P glu-6-P 6 glu-6-P + 12 NADP+ + 6 H2O 4 fru-6-P + 2 GA-3-P + 6 CO2 + 12 (NADPH + H+) GA-3-P DHAP GA-3-P + DHAP fru-1,6-P2 fru-6-P glu-6-P muşchi 2fru-6-P + GA-3-P 2 xil-5-P + ribozo-5-P
Reglarea căii hexozo-fosfaţilor necesar de NADPH stim. etapei oxidative GSSG / GSH creşte stim. etapei oxidative per. de creştere stim. căii consum de carbohidraţi stim. glu-6-P-DH-aza, 6-P-gluconat-DH-aza lactaţie - sinteza DH-azelor post alimentar, diabet - sinteza DH-azelor în ficat
Deficienţe enzimatice glucozo-6-P-DH-aza – eritrocit – deficit de GSH anemie hemolitică – methemoglobinemie hemoliză - infecţii, cetoacidoză transcetolaza – afinitate pt. TPP tulb. neurologice, comportamentale (sd. Wernicke-Korsakoff)
CALEA ACIDULUI GLUCURONIC UDP-glucuronil - sinteza de proteoglicani - conjugare metaboliţi detoxifiere - sinteză de xiluloză
GLUCONEOGENEZA sinteza de glucoză din: piruvat (lactat), aminoacizi, lipide condiţii - inaniţie - aport crescut de proteine, lipide şi scăzut de glucide - efort muscular prelungit - utilizarea lactatului din glicoliza anaerobă localizare – ficat, rinichi, muşchi importanţă - menţinerea echilibrului H+-HO- - reconversia lactatului - utilizarea NH3 din aa - controlul conc. aa - intermediari pentru sint. glicolipide, glicoproteine, glucide
1. Sinteza glucozei din piruvat şi lactat consum de alcool exces de NADH reducerea piruvatului la lactat reducerea OA la malat
2 piruvat + 6 ATP + 2 (NADH + H+) + 2 H2O glucoză + 6 ADP + 2 NAD+ + 6 P
2. Sinteza glucozei din aminoacizi
glicină, cisteină serină, HO-prolină triptofan aspartat arginină, glutamină histidină, prolină izoleucină, valină metionină, treonină piruvat OA α-cetoglutarat CATC succinil CoA
3. Sinteza glucozei din lipide TG glicerol GNG AG - cu nr. par de at. de C acetil CoA - cu nr. impar de at. de C propionil CoA GNG
Reglarea gluconeogenezei Glicoliza ~ 1 / GNG 1. Alosterică
2. Hormonală insulina (-) glucagon, corticosteroizi, catecolamine (+) lipoliza AG (+) (+) piruvat carboxilaza (+) aminotransferaze (-) acetil CoA piruvat DH-aza CATC, LR, FO ATP (+) corticosteroizi proteoliza aa GNG
(+) glucagon [AMPc] kinaze (+) (+) FEP carboxikinaza fru-1,6-bifosfataza (-) PFK2
METABOLISMUL GLICOGENULUI glicogenoliza glicogenogeneza
GLICOGENOLIZA hidroliza legăturilor 1-4, 1-6
ţesuturi glucodependente glu-1-P glucomutaza glu-6-P ficat muşchi glicoliză glucoză energie sânge ţesuturi glucodependente glicoliză menţinerea glicemiei energie
Reglarea glicogenolizei glicogen fosforilaza - alosteric – AMP, glu-6-P, ATP - covalent – fosforilare-defosforilare
UDP-glucopirofosforilaza GLICOGENOGENEZA glu glu-6-P glu-1-P glu-1-P + UTP UDP-glucopirofosforilaza glu-UDP + PP 2P
Reglarea glicogenogenezei
Afectarea enzimelor implicate în metabolismul glicogenului glicogenoza hepato-renală (boala von Gierke) – glucozo-6-fosfataza - hipoglicemie, lipoliză, gluconeogeneză, hiperlactacidemie - tulburări digestive, convulsii, hepatomegalie, tulburări neurologice glicogenoza generalizată (sindromul Pompe) – 1,4-1,6-glucozidaza - depunere de glicogen în miocard, muşchi, SNC glicogenoza McArdle – fosforilaza musculară - depuneri de glicogen anormal - crampe musculare, dureri, rabdomioliză, oboseală gliocogenoza Herbs – fosforilaza hepatică - depuneri de glicogen în ficat glicogenoza de tip “0” – glicogensintaza - hipoglicemie, cetoză, întârzierea creşterii, osteopenie, tulburări neurologice
METABOLISMUL GALACTOZEI în structura glicolipidelor, glicoproteinelor, proteoglicani transformare în glu gal + glu lactoză sinteza mielinei
Tulburări ale metabolismului deficit de galactokinază – galactozemie, galactozurie cataractă UDP-glu-gal-1-P-uridil-transferaza – acumulare de gal-1-P afectare hepatică, tulburări neuro-psihice
METABOLISMUL FRUCTOZEI fructe – struguri, pere, mere capacitate de îndulcire
vezicule seminale – fructoza glicoliză CATC ATP cristalin – calea poliolilor diabet - acumulare sorbitol, deficit de NADPH cataractă, retinopatie diabetică
GLICOPROTEINE oligozaharide fixate covalent pe proteine 1-80% glucide monozaharide – gal, manoză, fucoză, acid sialic, glucozamină, arabinoză, xiloză, N-acetil-glucozamina, N-acetil-galactozamina, acid N-acetil neuraminic legături - O-glicozidică – serina (treonina) - N-glicozidică - asparagina - O-glicozidică – HO-lizina partea proteică – activitate biologică partea glucidică – modularea funcţiei, localizare, durata de activitate
Clasificare O-glicozide N-glicozide – simple – N-acetil-glucozamină, manoză - complexe – fucoză, acid N-acetil neuraminic, N-acetil-galactozamină
Biosinteză Sinteza oligozaharidului precursor Transferul oligozaharidului pe proteină Sinteza glicoproteinei mature
Sinteza oligozaharidului precursor - RE Transferul oligozaharidului pe proteină - RE
3. Sinteza glicoproteinei mature – aparatul Golgi – procesare, elongare - glicozidaze - glicozil transferaze - glicoproteina matură membrane
Rol biologic structura membranelor – structural, funcţional (recunoaşterea celulelor), adezivitate grupele sanguine – A, B procesele de apărare – imunoglobuline, interferon, complement coagularea sângelui – protrombina, fibrinogen transportul compuşilor endo-, exogeni – transferina, ceruloplasmina, transcortina lubrifianţi – tub digestiv, mucoasa vaginală metabolismul hemoglobinei – haptoglobine stabilitatea celulelor – glicoforine (hematii)
PROTEOGLICANI conţin heteropolizaharide neramificate fixate covalent pe proteine trizaharid de legătură – gal-gal-xil localizare – intracelular, cartilagii, tendoane, piele, lichid sinovial polizaharidele – glucozamină/galactozamină - acid glucuronic (acid iduronic) clasificare – după structura dizaharidului - acid glucuronic + N-acetil glucozamină – acid hialuronic, - acid glucuronic + N-acetil-galactozamină - condroitin-4-sulfat, condroitin-6-sulfat - acid glucuronic/acid iduronic + N-acetil-galactozamină - dermatan sulfat - acid glucuronic/acid iduronic + N-acetil-glucozamină - heparan sulfat, heparină - D-galactoză+N-acetil-glucozamină + glucide – keratan sulfat
mucopolizaharidoze acumulare de dermatan sulfat, heparan sulfat – întârziere mintală, opacifierea corneei, deformări scheletice, modificări somatice, surditate,
Acid hialuronic structură liniară asociere cu proteoglicani localizare – cartilagii, lichid sinovial, corp vitros, derm, ţesut nervos, ţesut epitelial cu apa formează soluţii vâscose lubrifiant, protecţie mecanică hidrolizat de hialuronidază
Condroitin sulfat cartilagii, artere, cornee, ţesut nervos mineralizarea osoasă, matricea cartilajului ionizarea gr. sulfat osteoartrită suplimente nutritive
Heparina
localizare – ficat, piele, plămân anticoagulant - antitrombina clarificarea plasmei postprandial
AMINOACIZI 20 proteinogeni – L, α neproteinogeni - -alanina, GABA cod genetic - codon
Gly Ala Val Leu Ile His Phe Pro Trp Ser Thr
Tyr Cys Met Asp Asn Glu Gln Arg Lys
Proprietăţi fizico-chimice subst. solide solubilitate variabilă în apă, sol. în sol. H+, HO- izomerie optică – excepţie glicina, L propr. H+- HO- - pKNH2, pKCOOH punct izoelectric (pI) - R influenţează proprietăţile – hidrofob nepolar, polar, încărcat electric
r. gr. NH2 - condensare comp. carbonilici - alchilare - acilare - dezaminare - NH2 OH r. gr. COOH - amide - esteri - anhidride - nitrili - decarboxilare r. gr. NH2 + r. gr. COOH - metale – Mg2+, Ca2+, Ni2+, Zn2+, Co2+ - legătura peptidică r. pt. R - SH -S-S- - OH esteri
Rol biologic sinteza de proteine structura coenzimelor – SAM sinteza de molecule active biologic – hem, serotonină, histamină sursă de energie intermediari CATC sinteza de glucoză transmiterea impulsului nervos - GABA
PEPTIDE lanţuri de aa N-terminal, C-terminal rol - apărare antioxidantă – glutation - reglarea tensiunii arteriale – angiotensina II - hormoni - insulina
PROTEINE “proteios” (greacă) lanţuri de aa – 1010-1012 proteine proteom proteomică sinteză în ribozomi – transcriere, translaţie specificitate de specie
Structură - primară secundară terţiară cuaternară
Structura primară lanţ de aa structură unică capete – N-terminal, C-terminal imprimă acţiunea biologică înlocuirea aa modificarea proprietăţilor evidenţierea mutaţiilor genetice analiza proteinei - hidroliză chimică, enzimatică
Structura secundară leg. de H - >C=O ...... –HN- legătură dublă parţial - trans β-pliată α-helix
Structura terţiară leg. necovalente – leg. de H, ionice, hidrofobe leg covalente -S-S- R încărcat/R hidrofob – 0,9-1,4 (alungită), 0,3-0,6 (globulară) organizarea în domenii
Structura cuaternară monomeri (protomeri, oligomeri) legături necovalente
Proprietăţi solubilitate - fibrilare, globulare - precipitare selectivă în soluţii saline - 0-40o – creşte solubilitatea în apă proprietăţi electrochimice - amfoliţi - pI – 7, < 7, >7 - sisteme tampon - hemoglobină/hemoglobinat - proteină/proteinat - separare electroforetică - denaturarea proteinelor – chimică, termică
Clasificare după solubilitate - globulare – globine, albumine, histone - fibrilare – colagen, keratină, elastină după structură - simple - conjugate (heteroproteine) - fosfoproteine – cazeină, enzime fosforilate - glicoproteine - lipoproteine - cromoproteine – Hb, mioglobina, flavoproteine - metaloproteine – feritina, ceruloplasmina - nucleoproteine după funcţie - enzimatice - de transport - contractile - hormonale
Rol biologic structural – membrană, matricea extracelulară, oase, ligamente enzime transport şi depozitare – Hb, mioglobina, albumina, transferina apărare imunitară – Ig hormoni contracţia musculară procese fiziologice – rodopsina coagularea sângelui transmiterea informaţiei – receptori motilitate