Έκφραση και ρόλος της α5 ιντεγκρίνης στο πρώιμο έμβρυο Κωνσταντίνος Κωνσταντόπουλος, Αλέξανδρος Δημηρόπουλος, Μαρία Χριστοπούλου, Νικόλας Ζάγκρης Τμήμα Βιολογίας, Πανεπιστήμιο Πατρών, Πάτρα 26500 Ιντεγκρίνες Είναι ετεροδιμερείς διαμεμβρανικοί υποδοχείς Αποτελούνται από μία α και μία β υπομονάδα Η α5 ιντεγκρίνη ετεροδιμερίζεται με τη β1 υπομονάδα σχηματίζοντας την α5β1 ιντεγκρίνη και είναι ο κύριος υποδοχέας της ινονεκτίνης Οι ιντεγκρίνες λειτουργούν ως αμφίδρομα μόρια-σηματοδότες και συνδέουν πρωτεΐνες της εξωκυττάριας ουσίας με τον κυτταροσκελετό και με πρωτεΐνες των μονοπατιών μεταγωγής σημάτων από και προς τον πυρήνα.

Πότε εκφράζεται το mRNA της α5 ιντεγκρίνης Υλικά και μέθοδοι Πότε εκφράζεται το mRNA της α5 ιντεγκρίνης Μέθοδος RT-PCR Ηλεκτροφόρηση προϊόντων RT-PCR σε πήκτωμα πολυακρυλαμιδίου 5% (0,75mm) Σε ποιούς κυτταρικούς πληθυσμούς εκφράζεται η α5 ιντεγκρίνη Απομόνωση εμβρύων σε διαφορετικά στάδια ανάπτυξης (μορίδιο έως οργανογένεση) Μονιμοποίηση (Carnoy’s fixation) και μικροτόμηση (7μm) εμβρύων Μέθοδος ανοσοφθορισμού με χρήση μονοκλωνικού Αb (D71E2) και 2γενούς Ab-FITC Ποιος ο ρόλος της α5 ιντεγκρίνης κατά την ανάπτυξη του εμβρύου Καλλιέργεια εμβρύων απουσία και παρουσία μονοκλωνικού αντισώματος (D71E2) για ~17h και 36h, 37,5ο C Μονιμοποίηση (Carnoy’s fixation), έγκλειση σε μπλοκ παραφίνης, μικροτόμηση (7μm) εμβρύων Χρώση με Alcian Blue και Nuclear Fast Red RT-PCR / Έκφραση mRNA α5 ιντεγκρίνης

Έκφραση της α5 ιντεγκρίνης στο πρώιμο έμβρυο Έκφραση της α5 ιντεγκρίνης στο πρώιμο έμβρυο XIII (blastula) HH3-4 (primitive streak) HH5-6 (early neurula) Abbreviations: a, aortic arch; c, cardiac primordia; ca, endocardium; d, diencephalon; da, dorsal aorta; dm, dermomyotome; e, epiblast; ec, ectoderm; en, endoderm; g, gut; h, hypoblast; lr, liver rudiment; m, mesoderm; mc, myocardium; mp, myelencephalon; n, notochord; nc, neural crest; ne, neuroectoderm; nt, neural tube; p, pharyngeal arch; ps, primitive streak; pv, precardinal vein; sc, sclerotome; sv, sinus venosus; v, vitelline membrane HH9-10 (10 somites) HH17 (29 somites)

Ρόλος της α5 ιντεγκρίνης κατά την ανάπτυξη του πρώιμου εμβρύου Abbreviations: c, cardiac primordia; ca, endocardium; d, diencephalon; ec, ectoderm; em, extracellular matrix; en, endoderm; g, gut; m, mesoderm; mc, myocardium; n, notochord; np, neural plate; nt, neural tube; o, optic stalk

Συμπεράσματα Η α5 ιντεγκρίνη αρχικά ανιχνεύεται στο στάδιο του μοριδίου και η έκφραση της ρυθμίζεται αναπτυξιακά. Στα έμβρυα στα οποία αναστείλαμε τη λειτουργία της α5 ιντεγκρίνης επηρεάστηκαν οι ιστοί και τα όργανα στα οποία είχαμε ανιχνεύσει την έκφραση της α5. Στα πειραματικά έμβρυα δεν έγιναν φυσιολογικά οι μορφογενετικές κινήσεις της γαστριδί-ωσης. Τα κύτταρα της νευρικής πλάκας δεν ήταν επιθηλιοποιημένα αλλά εμφάνιζαν μεσεν-χυματικά χαρακτηριστικά με αποτέλεσμα να μην μπορούν να σχηματίσουν το νευρικό σω-λήνα. Τα τοιχώματα του διεγκεφάλου ήταν αποδιοργανωμένα και τα τοιχώματα των οπτικών κυστιδίων είχαν καταρρεύσει. Τα τοιχώματα του καρδιακού σωλήνα ήταν επίσης αποδιορ-γανωμένα και ανεστάλη η μορφογένεση της καρδιάς