Μάθημα: Υγιεινή Τροφίμων Ποσοτικός προσδιορισμός Αφλατοξίνης Μ1 σε γάλα με την μέθοδο της ELISA Σκανδάμης Π.

Μυκοτοξίνες Tοξίνες οι οποίες παράγονται από είδη μυκήτων των Aspergillus, Penicillium και Fusarium sp. Συγκεκριμένα: είναι προϊόντα δευτερογενούς μεταβολισμού των μυκήτων είναι χημικές ενώσεις χαμηλού, σχετικά μοριακού βάρους Κυριότερες: Αφλατοξίνες, Ωχρατοξίνη Α, Πατουλίνη,Τριχοθεκίνες, Φουμανισίνες, Ζεαραλενόνη

Ωχρατοξίνη Α Aspergillus carbonarius Aspergillus ochraceus Penicillium verrucosum (OTA/11) Τρόφιμα: σιτηρά, κρασί, αποξηραμένα φρούτα, καφές, ξηροί καρποί. (Zimmerli and Dick, 1996; Bellí et al., 2005; Pardo et al., 2005) Eπίσης… : ανθρώπινο αίμα & γάλα θηλασμού. (Gareis, 2000; Thuvander, 2001) Νεφροτοξικές, καρκινογόνες, ανοσοτοξικές και τερατογόνες ιδιότητες. (IARC, 1993; Schlatter et al., 1996; Murphy et al., 2006) Χημική δομή Ωχρατοξίνης Α

Αφλατοξίνες Παράγονται κυρίως από τα είδη Aspergillus flavus και A. parasiticus Σημαντικότερες Αφλατοξίνες είναι: Β1 και Β2 G1 και G2 Μ1 και Μ2 παράγονται από την Β1 και Β2 αντίστοιχα Τρόφιμα που συναντώνται: καλαμπόκι, φιστίκια, δημητριακά και όσπρια Μ1 και Μ2 : μητρικό γάλα, γιαούρτη, τυρί

Τοξικότητα αφλατοξινών Οξεία τοξικότητα: έχει επιπτώσεις στο συκώτι, στους πνεύμονες, στο μυοκάρδιο, στα νεφρά, στον εγκέφαλο Χρόνια τοξικότητα: καρκινογένεση ήπατος, κίρρωση ήπατος, μεταλλάξεις, τερατογενέσεις, ανοσοκαταστολή Σειρά δραστικότητας: B1 > G1 > B2 > G2

Magan and Aldred 2007 Int. J. Food Microbiol. 119,131-139

Μέθοδοι ανίχνευσης-ποσοτικοποίησης Ανοσοενζυμικές μέθοδοι: ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) Αναλυτικές μέθοδοι: Υγρή Χρωματογραφία Υψηλής Απόδοσης (HPLC) Στάδια: 1) Εκχύλιση 2) Καθαρισμός- Στήλες ανοσοσυγγένειας (Immunoaffinity Columns) 3) Ανάλυση

ELISA Ανοσοενζυμικές Τεχνικές A Προσκόλληση αντιγόνου B προσθήκη 1ου αντισώματος -ξέπλυμα C Προσθήκη 2ου αντισώματος, σύζευξη αντισώματος ενζύμου -ξέπλυμα D Προσθήκη υποστρώματος Ανοσοενζυμική μέθοδος

Μέθοδοι ανίχνευσης-ποσοτικοποίησης Ανοσοενζυμικές μέθοδοι: ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) Αναλυτικές μέθοδοι: Υγρή Χρωματογραφία Υψηλής Απόδοσης (HPLC) Στάδια: 1) Εκχύλιση 2) Καθαρισμός- Στήλες ανοσοσυγγένειας (Immunoaffinity Columns) 3) Ανάλυση

Στήλες ανοσοσυγγένειας Αντισώματα

Πειραματικό μέρος Τρόφιμο: Γάλα Φόρτιση με διαφορετικές συγκεντρώσεις Αφλατοξίνης Μ1 Μέθοδος: ELISA ΣΤΟΧΟΣ: Ποσοτικοποίηση των άγνωστων συγκεντρώσεων με την χρήση πρότυπης καμπύλης