Εδραίωση και επικύρωση ενός γενετικού τεστ για την ταυτοποίηση της Νευρινωμάτωσης τύπου 1 Ε. Περιστέρη1, Σ.Ν. Αυγέρης1, Π. Παπαδοπούλου2, Α. Μισεγιάννη2, Δ.Ι. Στραβοπόδης3 και Γ.Ε. Βουτσινάς1,2 1Εργαστήριο Περιβαλλοντικής Μεταλλαξιγένεσης και Καρκινογένεσης, Ινστιτούτο Βιοεπιστημών & Εφαρμογών, ΕΚΕΦΕ «Δημόκριτος», Αγία Παρασκευή Αττικής 2Αμερικανικό Κολλέγιο Ελλάδος – Deree, Τμήμα Επιστημών, Τεχνολογίας και Μαθηματικών, Αγία Παρασκευή Αττικής 3Τομέας Βιολογίας Κυττάρου και Βιοφυσικής, Τμήμα Βιολογίας, ΕΚΠΑ, Πανεπιστημιόπολη, Ζωγράφου Κλινική εικόνα Μέθοδος 1 - Απομόνωση RNA από λεμφοκύτταρα δότη - Αντίστροφη μεταγραφή (RT) Αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR) με 24 ζεύγη εκκινητών που καλύπτουν το συνολικό μήκος του cDNA - Κυκλική αλληλούχιση - Ανάλυση προϊόντων αλληλούχισης - Σπάνια γενετική πάθηση (1:4000) - Προκαλεί όγκους σε - κεντρικό νευρικό σύστημα - δέρμα - οφθαλμούς - Κύτταρα στόχοι - κύτταρα γλοίας (Schwann,αστροκύτταρα) - μελανοκύτταρα - ινοβλάστες Κλινική Διάγνωση 1. Έξι ή περισσότερες κηλίδες café au lait 2. Δύο ή περισσότερα νευρινώματα ή ένα πλεγματόμορφο νευρίνωμα 3. Φακίδες στην μασχάλη ή στην βουβωνική χώρα 4. Έγχρωμοι αμαρτωματικοί σπίλοι ίριδας (Σωμάτια Lisch >2) 5. Όγκοι οπτικού νεύρου 6. Σκελετικές ανωμαλίες 7. Ψυχιατρικές και νευρολογικές εκδηλώσεις 2 3’ UTR 5’ UTR 1 2 3 4 5 6 7 8 56 57 58 59 60 I II IV V XXII XXIII III XXIV 420 bp 342 bp 355 bp 412 bp 460 bp 520 bp 515 bp NF1 genomic DNA  60 exons 1 2 3 4 5 6 7 8 56 57 58 59 60 transcription into mRNA 1 2 3 4 5 6 7 8 56 57 58 59 60 reverse transcription into cDNA Ανάλυση cDNA του NF1 4 6 Γενετική Γενετικός Έλεγχος - Κληρονομική ή σποραδική - Επικρατής αυτοσωμική - Διεισδυτικότητα 100% - Ποικίλη εκφραστικότητα - Πολυσυστημική - Προβληματική συσχέτιση γονότυπου – φαινότυπου Νέα μετάλλαξη NF1: μετατόπισης αναγνωστικού πλαισίου Νέα μετάλλαξη NF1: παρανοηματική κόρη πατέρας μητέρα άγριος τύπος, 1ος τομέας p.Leu273Arg, 1ος τομέας κόρη 1η κόρη 2η μητέρα άγριος τύπος, 3ος τομέας p.Phe2706Leufr*32, 3ος τομέας Γονίδιο NF1 - Στο χρωμόσωμα 17q11.2 - 60 εξόνια (κλωνοποιήθηκε το 1990) - Στο εσώνιο 27 εδράζονται 3 γονίδια Μήκος αρχικού μεταγράφου 350 kb 3 ώριμα μετάγραφα (11-13kb) 16 ψευδογονίδια c.818T>G (εξόνιο 8) p.Leu273Arg c.8118delT (εξόνιο 56) p.Phe2706Leufr*32 Νευρινωματίνη - 2818 αμινοξέα (327 kDa) Κυτταροπλασματική πρωτεΐνη: εκφράζεται στους νευρώνες, τα κύτταρα Schwann, τα ολιγοδενδρο- κύτταρα, τα αστροκύτταρα και τα λευκοκύτταρα Δράση Ras GTPασης: aρνητικός ρυθμιστής Ras -> αναστέλλει την κυτταρική αύξηση και τον πολλαπλασιασμό Σύνοψη Αποτελεσμάτων Εδραίωση μοριακού τεστ για γενετικό έλεγχο της νευρινωμάτωσης, βασισμένου στην ανάλυση του cDNA του NF1 - Επικύρωση του τεστ με τη μελέτη 2 οικογενειών -> Ταυτοποίηση 2 νέων μεταλλάξεων - εξόνιο 8, c.818T>G, p.Leu273Arg, παρανοηματική - εξόνιο 56, c.8118delT, p.Phe2706Leufr*32, απαλοιφή Οι συγγραφείς ευχαριστούν θερμά την Πανελλήνια Ένωση Σπάνιων Παθήσεων (ΠΕΣΠΑ) για την εποικοδομητική συνεργασία Η εργασία αυτή χρηματοδοτήθηκε από το Αμερικανικό Κολλέγιο Ελλάδος (American College of Greece - Deree)