ΑΔΕΝΟΪΟΙ-Ιστορική αναδρομή 1953 Rowe - καλλιέργειες κυττάρων αδενοειδών εκβλαστήσεων Μέσα σε 12 περίπου χρόνια - 31 ορότυποι (οφθαλμική και αναπνευστική νόσος) Σήμερα : 53 ορότυποι-ταξινομούνται σε 7 υποείδη (Α, Β1, Β2, C, D, E, F) 1962 – ανακάλυψη ογκογόνου δράσης σε τρωκτικά Ορότυποι 2,5,7 και 12 – χαρτογράφηση DNΑ, καθορισμός λειτουργιών.
ΓΟΝΙΔΙΩΜΑ
Δομή Διάμετρος 70-75 nm Γενετικό υλικό ds DNA Kαψίδιο:252 υπομονάδες (καψομερίδια) Δομή εικοσαέδρου: 20 πλευρές και 12 κορυφές Χωρίς έλυτρο Ινίδια : από τις κορυφές του εικοσαέδρου
Καψιδικές υπομονάδες Εξαμερίδια Πενταμερίδια Είναι 240 Γειτονεύουν με 6 το καθένα Πενταμερίδια Είναι 12 Γειτονεύουν με 5 το καθένα
Δομή
ΑΝΤΙΓΡΑΦΗ
Θανατηφόρος διάχυτη λοίμωξη 3, 7, 21, 30 Βρέφη - νήπια ΗΛΙΚΙΑΚΗ ΟΜΑΔΑ ΣΥΝΔΡΟΜΟ ΣΥΧΝΟΤΕΡΟΙ ΟΡΟΤΥΠΟΙ Νεογνά Θανατηφόρος διάχυτη λοίμωξη 3, 7, 21, 30 Βρέφη - νήπια Καταρροή, φαρυγγίτιδα (ασυμπτωματική λοίμωξη) 1, 2, 5 Παιδιά Λοίμωξη ανώτερου αν/κού 1, 2, 4-6 Φαρυγγοεπιπεφυκοκός πυρετός 3, 7 Αιμορραγική κυστίτιδα 7, 11, 21 Διάρροια 2, 3, 5, 40, 41 Εγκολεασμός 1, 2, 4, 5 Μηνιγγοεγκεφαλίτιδα 2, 6, 7, 12 Νεαροί ενήλικες Οξεία αν/κή νόσος - Πνευμονία 3, 4, 7 Ενήλικες Επιδημική κερατοεπιπεφυκίτιδα 8, 19, 37 Ανοσοκατεσταλμένοι Πνευμονία – λοίμωξη ουροποιητικού 5, 31, 34, 35, 39 Εντερική λοίμωξη 42-51 Λοιμώξεις ΚΝΣ (εγκεφαλίτιδα) 12, 32
Κυτταροκαλλιέργεια Κυτταρική μονοστιβάδα κύτταρα εμβρύου ανθρώπου (πνεύμονα ή νεφρού) HeLa KB Hep-2 Α549: συνεχής κυτταρική σειρά από ανθρώπινο αδενοκαρκίνωμα (ενδεδειγμένη).
Κυτταροπαθογόνος δράση Σε 4-7 ημέρες (συλλογή δείγματος εντός 3 ημερών από την έναρξη της νόσου) 1-3 εβδομάδες (συλλογή δείγματος > 3 ημέρες από την έναρξη της νόσου Μεγάλη ευαισθησία αλλά αργεί (καθυστέρηση θεραπείας)
Κυτταροπαθογόνος δράση Διόγκωση και στρογγυλοποίηση κυττάρων Συνάθροισή του σε ομάδες
Κυτταροπαθογόνος δράση 10x 5 ημέρες 7 ημέρες Giemsa Giemsa-stained HeLa cells (from a human cervical carcinoma) 5 days postinfection with human adenovirus showing cell rounding and clustering. Cells were observed with a 10X objective. (Erica Suchman and Carol Blair, Colorado State University—Fort Collins) FIG. 12. Giemsa-stained HeLa cells (from a human cervical carcinoma) 7 days postinfection with human adenovirus showing pronounced cell enlargement, rounding, and distinctive “grape-like" clusters. Cells were observed with a 10X objective. (Erica Suchman and Carol Blair, Colorado State University—Fort Collins)
Καλλιέργεια με το σύστημα Shell vial Επώαση και χρώση με φθορίζοντα αντιορό την 3η ημέρα Παρατήρηση σε μικροσκόπιο φθορισμού. Συλλογή δείγματος εντός 7 ημερών από την έναρξη των συμπτωμάτων (καλή συσχέτιση με κοινή κυτταροκαλλιέργεια)
Ανίχνευση αντιγόνων ΕΙΑ Αποτελέσματα σε 75 λεπτά Μειονέκτημα : χαμηλή ευαισθησία Απαιτείται υψηλό ιϊκό φορτίο (ως 3 ημέρες από την έναρξη νόσου)
Ανίχνευση αντιγόνων Ανοσοφθορισμός
Ιστολογική εικόνα Πνευμονίας από αδενοϊό σε ανοσοκατεσταλμένο παιδί, με απόφραξη βρογχιολίων. Παρατηρούμε την έντονη διάμεση διήθηση από μονοπύρηνα και υαλοειδείς μεμβράνες. Οι αδενοϊοί που εμπλέκονται είναι κυρίως τύπου 3 και 7 και προκαλούν νεκρωτική βρογχίτιδα και βρογχιολίτιδα
Ορολογική διάγνωση (ανίχνευση αντισωμάτων) Αντισώματα κοινά της ομάδας (σύνδεση συμπληρώματος) Διατηρούνται μήνες – χρόνια Εξουδετερωτικά αντισώματα ειδικά του τύπου Διατηρούνται ισοβίως. Αναστολή αιμοσυγκόλλησης
PCR Μεγάλη ευαισθησία και ειδικότητα Πολύ γρήγορα αποτελέσματα Υψηλό κόστος Εξειδικευμένο προσωπικό Μεγάλη προσοχή για την αποφυγή επιμολύνσεων
Ανίχνευση αδενοϊών
Τυποποίηση αδενοϊών PCR PCR-RFLP Real-time PCR Ανίχνευση με ηλεκτροφόρηση Ανίχνευση με υβριδισμό σε strips ή σε πλακίδια τύπου ELISA PCR-RFLP Real-time PCR
Τυποποίηση αδενοϊών (PCR) (από Akerblom et. al. J Med Virol 1999 Subgenus-Specific Primers for the Amplification of Adenoviruses Subgenus Primer length (bp) A HsgA1 5-AAGGTGTCAATYATGTTTG-3 A HsgA2 5-ACGGTTACTTKTTT-3 HsgA1/A2 299 B HsgB1 5-TCTATTCCCTACCTGGAT-3 B HsgB2 5-ACTCTTAACGGCAGTAG-3 HsgB1/B2 465 C HsgC1 5-ACCTTTGACTCTTCTGT-3 C HsgC2 5-TCCTTGTATTTAGTATC-3 HsgC1/C2 269 D HsgD1 5-CCATCATGTTCGACTCCT-3 D HsgD2 5-AGGTAGCCGGTGAAGCC-3 HsgD1/D2 331 E HsgE1 5-GACTCTTCCGTCAGCTGG-3 E HsgE2 5-GCTGGTAACGGCGCTCT-3 HsgE1/E2 399 F HsgF1 5-ATTTCTATTCCTTCGCG-3 F HsgF2 5-TCAGGCTTGGTACGGCC-3 HsgF1/F2 586
Τυποποίηση αδενοϊών (PCR (από Akerblom et. al. J Med Virol 1999
Τυποποίηση αδενοϊών (PCR-RFLP) (από Saitoh-Inagawa et al Τυποποίηση αδενοϊών (PCR-RFLP) (από Saitoh-Inagawa et al. J Clin Microbiol 1996) ΧΡΗΣΗ ΚΟΙΝΩΝ ΕΚΚΙΝΗΤΩΝ (consensus primers) – nested pcr
Τυποποίηση αδενοϊών (PCR-RFLP) (από Saitoh-Inagawa et al Τυποποίηση αδενοϊών (PCR-RFLP) (από Saitoh-Inagawa et al. J Clin Microbiol 1996)
Τυποποίηση αδενοϊών (PCR) ADENOVIRUS DETECTION AND TYPING (ARGENE, FRANCE)
Τυποποίηση αδενοϊών (Real Time PCR) από Gu et al. J Clin Microbiol 2003
Τυποποίηση αδενοϊών (Real Time PCR) από Gu et al. J Clin Microbiol 2003
PARVOVIRUS
HPV dsDNA ιός χωρίς φάκελο Προσβάλλει τα ανώτερα σπονδυλωτά Κυκλικό γονιδίωμα περίπου 8kb Σφαιρικό καψίδιο Προσβάλλει τα ανώτερα σπονδυλωτά Ειδικότητα προσβολής Τροπισμό ως προς το πλακώδες επιθήλιο Δημιουργία θηλωμάτων (κονδυλωμάτων) και μυρμηγκιών
ΓΟΝΙΔΙΩΜΑ
ΓΟΝΙΔΙΩΜΑ E1: Viral replication; maintains episome E2: Transcriptional regulation, co-factor for viral replication E4: Disrupts cytokeratins E5: Interacts with growth factor receptors E6: Transforming protein; p53 degradation E7: Transforming protein; Rb binding
ΓΟΝΙΔΙΩΜΑ ΜΟΝΟ ΟΙ Ε6 ΚΑΙ Ε7 ΠΑΡΑΓΟΝΤΑΙ ΟΤΑΝ Ο ΙΟΣ ΕΊΝΑΙ ΕΝΣΩΜΑΤΩΜΕΝΟΣ ΣΤΟ ΓΟΝΙΔΙΩΜΑ ΚΑΙ ΕΙΔΙΚΑ ΣΤΟΝ ΚΑΡΚΙΝΟ ΤΟΥ ΤΡΑΧΗΛΟΥ ΤΗΣ ΜΗΤΡΑΣ
ΤΑΞΙΝΟΜΗΣΗ Περισσότεροι από 100 τύποι, >80 έχουν ταυτοποιηθεί πλήρως Η τυποποίηση βασίζεται αποκλειστικά στην νουκλεοτιδική αλληλουχία >10% μεταβλητότητα = νέος τύπος 2-10% = υπότυπος, <2% = ποικιλία Οι τύποι αριθμούνται με αύξοντα αριθμό ανάλογα με την σειρά ανακάλυψης
ΤΑΞΙΝΟΜΗΣΗ High Risk = Carcinogenic Low Risk = Non-carcinogenic 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68 and 69 16 and 18 cause 70 % of cervical cancers Low Risk = Non-carcinogenic 6 and 11 cause 90 % of warts http://www.cancer.gov/cancertopics/factsheet/Risk/HPV
ΔΙΑΓΝΩΣΗ Δεν καλλιεργούνται εύκολα Η ανίχνευση αντισωμάτων δεν έχει μεγάλη ευαισθησία Η διάγνωση της λοίμωξης απαιτεί ανίχνευση του γενετικού υλικού του ιού Σε δείγμα από την περιοχή της βλάβης Ο ιός πρέπει να είναι ενεργός για να μπορεί να ανιχνευθεί
ΟΓΚΟΓΕΝΕΤΙΚΗ ΔΡΑΣΗ
ΟΓΚΟΓΕΝΕΣΗ
ΔΙΑΓΝΩΣΤΙΚΕΣ ΜΕΘΟΔΟΙ Κυτταρολογία Ιστολογία Ηλεκτρονικό μικροσκόπιο Ανοσοϊστοχημεία Μοριακές τεχνικές Ορολογία
ΜΟΡΙΑΚΕΣ ΤΕΧΝΙΚΕΣ ΧΩΡΙΣ ΕΝΙΣΧΥΣΗ IN SITU ΥΒΡΙΔΙΣΜΟΣ DOT BLOT SOUTHERN, NORTHERN BLOT
ΜΟΡΙΑΚΕΣ ΤΕΧΝΙΚΕΣ ME ΕΝΙΣΧΥΣΗ
HYBRID CAPTURE
HYBRID CAPTURE
HYBRID CAPTURE
HYBRID CAPTURE
HYBRID CAPTURE
HYBRID CAPTURE
PCR
PCR
PCR ΤΥΠΟΠΟΙΗΣΗ
PCR ΤΥΠΟΠΟΙΗΣΗ ΑΝΙΧΝΕΥΣΗ ΠΡΟΪΟΝΤΩΝ ΣΕ GEL ΑΓΑΡΟΖΗΣ Ή BLOT ΣΕ ΜΙΚΡΟΠΛΑΚΕΣ ELISA
PCR ΤΥΠΟΠΟΙΗΣΗ ΥΒΡΙΔΙΜΟΣ ΜΕΤΑ ΤΗΝ PCR ΣΕ ΜΙΚΡΟΣΥΣΤΟΙΧΙΑ DNA
ΔΙΑΓΝΩΣΤΙΚΕΣ ΜΕΘΟΔΟΙ ROCHE LINE BLOT
ΔΙΑΓΝΩΣΤΙΚΕΣ ΜΕΘΟΔΟΙ ROCHE LINE BLOT
ΔΙΑΓΝΩΣΤΙΚΕΣ ΜΕΘΟΔΟΙ ROCHE AMPLICOR