Παρουσίαση Πρακτικής Άσκησης ασκούμενος φοιτητής: Σπανέας Κων/νος

 Τόπος Διεξαγωγής Πρακτικής Άσκησης: Εργαστήριο Φυτοπαθολογίας  Υπεύθυνο μέλος ΔΕΠ: Κα Αντωνίου Πολύμνια, Επίκουρος Καθηγήτρια  Ημερολογιακή Διάρκεια Πρακτικής: 1/9/2012 – 31/10/2012

Λίγα λόγια για το εργαστήριο Φυτοπαθολογίας Το Εργαστήριο Φυτοπαθολογίας είναι ένα από τα ένδεκα εργαστήρια του Τμήματος Φυτικής Παραγωγής του Γεωπονικού Πανεπιστημίου Αθηνών. Αν και το μάθημα της Φυτοπαθολογίας καθιερώθηκε από της ιδρύσεως της Ανωτάτης Γεωπονικής Σχολής Αθηνών (Α.Γ.Σ.Α.) το 1920, αρχικά η έδρα και το αντίστοιχο εργαστήριο ήταν της Φυσιολογίας Φυτών και Φυτοπαθολογίας. Μετά την επανασύσταση της Α.Γ.Σ.Α. το 1943, ιδρύθηκε ανεξάρτητο εργαστήριο Φυτοπαθολογίας. Το εργαστήριο Φυτοπαθολογίας βρίσκεται στον πρώτο όροφο του κτιρίου Διοίκησης και περιλαμβάνει τέσσερις αίθουσες για εργαστηριακή έρευνα, δύο αίθουσες διδασκαλίας, παρασκευαστήριο υλικών και γραφεία διοίκησης. Το Εργαστήριο Φυτοπαθολογίας είναι ένα από τα ένδεκα εργαστήρια του Τμήματος Φυτικής Παραγωγής του Γεωπονικού Πανεπιστημίου Αθηνών. Αν και το μάθημα της Φυτοπαθολογίας καθιερώθηκε από της ιδρύσεως της Ανωτάτης Γεωπονικής Σχολής Αθηνών (Α.Γ.Σ.Α.) το 1920, αρχικά η έδρα και το αντίστοιχο εργαστήριο ήταν της Φυσιολογίας Φυτών και Φυτοπαθολογίας. Μετά την επανασύσταση της Α.Γ.Σ.Α. το 1943, ιδρύθηκε ανεξάρτητο εργαστήριο Φυτοπαθολογίας. Το εργαστήριο Φυτοπαθολογίας βρίσκεται στον πρώτο όροφο του κτιρίου Διοίκησης και περιλαμβάνει τέσσερις αίθουσες για εργαστηριακή έρευνα, δύο αίθουσες διδασκαλίας, παρασκευαστήριο υλικών και γραφεία διοίκησης. Συμπληρωματικό ερευνητικό και διδακτικό έργο παρέχεται στον αγρό του Εργαστηρίου, έκτασης περίπου 250 m2 και σε δύο γυάλινα κλιματιζόμενα θερμοκήπια που βρίσκονται απέναντι από την είσοδο του δενδροκομείου. Συμπληρωματικό ερευνητικό και διδακτικό έργο παρέχεται στον αγρό του Εργαστηρίου, έκτασης περίπου 250 m2 και σε δύο γυάλινα κλιματιζόμενα θερμοκήπια που βρίσκονται απέναντι από την είσοδο του δενδροκομείου.

Ερευνητικό Έργο του εργαστηρίου Ηλιοαπολύμανση του εδάφους Ηλιοαπολύμανση του εδάφους Βιολογική καταπολέμηση ασθενειών των φυτών. Βιολογική καταπολέμηση ασθενειών των φυτών. Ανοσοποίηση των φυτών κατά αδρομυκώσεων και αδροβακτηριώσεων. Ανοσοποίηση των φυτών κατά αδρομυκώσεων και αδροβακτηριώσεων. Αξιολόγηση ανθεκτικών υποκειμένων ελιάς στη Βερτισιλλίωση Αξιολόγηση ανθεκτικών υποκειμένων ελιάς στη Βερτισιλλίωση Εκτίμηση του κινδύνου και ολοκληρωμένη διαχείριση της Ωχρατοξίνης Aστα σταφύλια και στο κρασί. Εκτίμηση του κινδύνου και ολοκληρωμένη διαχείριση της Ωχρατοξίνης Aστα σταφύλια και στο κρασί. Ιοί και ιώσεις λαχανικών, ελιάς, αμπέλου και άλλων φυτών Ιοί και ιώσεις λαχανικών, ελιάς, αμπέλου και άλλων φυτών Ιοειδή καρποφόρων δένδρων και αμπέλου Ιοειδή καρποφόρων δένδρων και αμπέλου Φυτοπλάσματα Φυτοπλάσματα Mυκητολογικές ασθένειες δενδρωδών, κηπευτικών και καλλωπιστικών καλλιεργειών. Mυκητολογικές ασθένειες δενδρωδών, κηπευτικών και καλλωπιστικών καλλιεργειών. Ανάπτυξη βελτιωμένων μεθόδων μελέτης της αλληλεπίδρασης των παθογόνων με το φυτό ξενιστή. Ανάπτυξη βελτιωμένων μεθόδων μελέτης της αλληλεπίδρασης των παθογόνων με το φυτό ξενιστή. Εφαρμογή μοριακών τεχνικών για τη διαφοροποίηση ειδών του γένους Verticillium. Εφαρμογή μοριακών τεχνικών για τη διαφοροποίηση ειδών του γένους Verticillium. Μελέτη των φυλογενετικών σχέσεων παθογόνων με τη χρήση μοριακών δεικτών. Μελέτη των φυλογενετικών σχέσεων παθογόνων με τη χρήση μοριακών δεικτών. Αξιολόγηση compostως κατασταλτικών εδαφογενών παθογόνων. Αξιολόγηση compostως κατασταλτικών εδαφογενών παθογόνων. Ασθένειες χλοοταπήτων και αξιολόγηση μεθόδων αντιμετώπισής τους. Ασθένειες χλοοταπήτων και αξιολόγηση μεθόδων αντιμετώπισής τους.

Έργο που πραγματοποιήθηκε κατά την διάρκεια της πρακτικής άσκησης Παρασκευή τεχνητών θρεπτικών υποστρωμάτων ανάπτυξης φυτοπαθογόνων μικροοργανισμών (PDA, NAS, NAG) Παρασκευή τεχνητών θρεπτικών υποστρωμάτων ανάπτυξης φυτοπαθογόνων μικροοργανισμών (PDA, NAS, NAG) Ανακαλλιέργειες (βακτηρίων/μυκήτων σε θρεπτικό υλικό) Ανακαλλιέργειες (βακτηρίων/μυκήτων σε θρεπτικό υλικό) Απομονώσεις (βακτηρίων/μυκήτων σε θρεπτικό υλικό/υγρό θάλαμο) Απομονώσεις (βακτηρίων/μυκήτων σε θρεπτικό υλικό/υγρό θάλαμο) Μεταφύτευση φυτικών υλικών προς μόλυνση και παρατήρηση Μεταφύτευση φυτικών υλικών προς μόλυνση και παρατήρηση Μικροσκοπική Παρατήρηση καλλιεργειών μυκήτων από τρυβλία Μικροσκοπική Παρατήρηση καλλιεργειών μυκήτων από τρυβλία Αποστείρωση/απολύμανση εργαστηριακών εργαλείων/υλικών Αποστείρωση/απολύμανση εργαστηριακών εργαλείων/υλικών Προσδιορισμός σκληρώτιων στο έδαφος Προσδιορισμός σκληρώτιων στο έδαφος

Παρασκευή θρεπτικών υλικών PDA - 200g Πατάτα καθαρισμένη πλυμένη και κομμένη σε κύβους - 20g Δεξτρόζη - 20g Άγαρ - 1L Απιονισμένο νερό PDA - 200g Πατάτα καθαρισμένη πλυμένη και κομμένη σε κύβους - 20g Δεξτρόζη - 20g Άγαρ - 1L Απιονισμένο νερό Βράζουμε τους κύβους της πατάτας σε 500 ml απιονισμένο νερό σε κωνική φιάλη για 45’, μέσα σε υδατόλουτρο. Αφού βράσει το σουρώνουμε (κρατάμε το εκχύλισμα και πετάμε την πατάτα) Συμπληρώνουμε το θρεπτικό υλικό μέχρι τα 1000 ml. Στη συνέχεια διαλύουμε την δεξτρόζη, προσθέτουμε το άγαρ μέσα στο εκχύλισμα και πωματίζουμε την κωνική φιάλη με το θρεπτικό υπόστρωμα. Ακολουθεί υγρή αποστείρωση της κωνικής φιάλης με το θρεπτικό υπόστρωμα σε κλίβανο στους 121°C για 20’. Με την έξοδο απ’ τον κλίβανο το θρεπτικό υλικό τοποθετείται σε τρυβλία τα οποία, αφού απομακρυνθεί η υγρασία, διατηρούνται στο ψυγείο.

Ανάδευση εκχυλίσματος πατάτας και προσθήκη Δεξτρόζης και Άγαρ

Τρυβλία με PDA

NAS Για 1L NAS χρησιμοποιούμε: - 8g Nutrient Broth - 50g sucrose - 20g Άγαρ Σε 1L απιονισμένο νερό. Σε μια κωνική φιάλη προσθέτουμε το απιονισμένο νερό κι στη συνέχεια τα συστατικά αναδεύοντας μέχρι πλήρους διάλυσης και πωματίζουμε την κωνική φιάλη με το θρεπτικό υπόστρωμα. Ακολουθεί υγρή αποστείρωση της κωνικής φιάλης με το θρεπτικό υπόστρωμα σε κλίβανο στους 121 °C για 20’. Με την έξοδο απ’ τον κλίβανο το θρεπτικό υλικό τοποθετείται σε τρυβλία τα οποία, αφού απομακρυνθεί η υγρασία, διατηρούνται στο ψυγείο. NAS Για 1L NAS χρησιμοποιούμε: - 8g Nutrient Broth - 50g sucrose - 20g Άγαρ Σε 1L απιονισμένο νερό. Σε μια κωνική φιάλη προσθέτουμε το απιονισμένο νερό κι στη συνέχεια τα συστατικά αναδεύοντας μέχρι πλήρους διάλυσης και πωματίζουμε την κωνική φιάλη με το θρεπτικό υπόστρωμα. Ακολουθεί υγρή αποστείρωση της κωνικής φιάλης με το θρεπτικό υπόστρωμα σε κλίβανο στους 121 °C για 20’. Με την έξοδο απ’ τον κλίβανο το θρεπτικό υλικό τοποθετείται σε τρυβλία τα οποία, αφού απομακρυνθεί η υγρασία, διατηρούνται στο ψυγείο. NAG Για 1L NAG χρησιμοποιούμε: - 8g Nutrient Broth - 20g Glycerol - 20g Άγαρ Σε μια κωνική φιάλη προσθέτουμε το απιονισμένο νερό κι στη συνέχεια τα συστατικά αναδεύοντας μέχρι πλήρους διάλυσης και πωματίζουμε την κωνική φιάλη με το θρεπτικό υπόστρωμα. Ακολουθεί υγρή αποστείρωση της κωνικής φιάλης με το θρεπτικό υπόστρωμα σε κλίβανο στους 121 °C για 15’. Με την έξοδο απ’ τον κλίβανο το θρεπτικό υλικό τοποθετείται σε τρυβλία τα οποία, αφού απομακρυνθεί η υγρασία, διατηρούνται στο ψυγείο. NAG Για 1L NAG χρησιμοποιούμε: - 8g Nutrient Broth - 20g Glycerol - 20g Άγαρ Σε μια κωνική φιάλη προσθέτουμε το απιονισμένο νερό κι στη συνέχεια τα συστατικά αναδεύοντας μέχρι πλήρους διάλυσης και πωματίζουμε την κωνική φιάλη με το θρεπτικό υπόστρωμα. Ακολουθεί υγρή αποστείρωση της κωνικής φιάλης με το θρεπτικό υπόστρωμα σε κλίβανο στους 121 °C για 15’. Με την έξοδο απ’ τον κλίβανο το θρεπτικό υλικό τοποθετείται σε τρυβλία τα οποία, αφού απομακρυνθεί η υγρασία, διατηρούνται στο ψυγείο.

Διαδικασία απομονώσεων (βακτηρίων ή/ και μυκήτων σε τεχνητό θρεπτικό υλικό) Διαδικασία απομόνωσης του φυτοπαθογόνου βακτηρίου Pseudomonas savastanoi pv. savastanoi από φυμάτια ελιάς

του φυτοπαθογόνου βακτηρίου Διαδικασία απομόνωσης του φυτοπαθογόνου βακτηρίου Pseudomonas savastanoi pv. savastanoi από φυμάτια ελιάς…. συνέχεια

Μικροσκοπική παρατήρηση μυκήτων από σε τρυβλία Μικροσκοπική παρατήρηση φυτοπαθογόνων μυκήτων από καλλιέργιες σε τεχνητά θρεπτικά υποστρώματα σε τρυβλία

Προσδιορισμός σκληρωτίων στο έδαφος Για το συγκεκριμένο πείραμα χρησιμοποιήθηκαν δείγματα χώματος από πειραματικό αγρό στον Ν.Ηλείας. συνολικά 17 δείγματα χώματος. τοποθετήθηκε σε 17 γυάλινα τρυβλία που τοποθετήθηκαν μπροστά από για να η υγρασία. Για το συγκεκριμένο πείραμα χρησιμοποιήθηκαν δείγματα χώματος από πειραματικό αγρό στον Ν.Ηλείας. Εξετάστηκαν συνολικά 17 δείγματα χώματος. Απο τα αρχικά δείγματα ικανή ποσότητα χώματος απο κάθε πειραματικό τεμάχιο τοποθετήθηκε σε 17 γυάλινα τρυβλία που τοποθετήθηκαν μπροστά από συσκευή παροχής αέρα για να απομακρυνθεί η υγρασία.

Αφού απομακρύνθηκε η από τα δείγματα, ελήφθησαν 5g χώματος από το κάθε τρυβλίο. (5g χώματος) τοποθετήθηκε ξεχωριστά σε κόσκινο με διάμετρο 80mesh. έως ότου να παραμείνουν στο κόσκινο σωματίδια μεγέθους κόκκ άμμου. Τέλος αυτά τα σωματίδια μεταφέρθηκαν σε τρυβλία με θρεπτικό υλικό τύπου WA (water agar 1%) και τοποθετήθηκαν σε επωαστικό θάλαμο σε θερμοκρασία 28°C. Μετά από 3-4 ημερών ακλούθησε των τρυβλία στο στερεοσκόπιο για εξακρίβωση ύπαρξης σκληρώτιων. Αφού απομακρύνθηκε η υγρασία από τα δείγματα χώματος, ελήφθησαν 5g χώματος από το κάθε τρυβλίο. Στην συνέχεια κάθε δείγμα (5g χώματος) τοποθετήθηκε ξεχωριστά σε κόσκινο με διάμετρο 80mesh.Ακολούθησε έκπλυση με τρεχούμενο νερό βρύσης έως ότου να παραμείνουν στο κόσκινο σωματίδια μεγέθους κόκκων άμμου. Τέλος αυτά τα σωματίδια μεταφέρθηκαν σε τρυβλία με θρεπτικό υλικό τύπου WA (water agar 1%) και τοποθετήθηκαν σε επωαστικό θάλαμο σε θερμοκρασία 28°C. Μετά από επώαση 3-4 ημερών ακλούθησε παρατήρηση των τρυβλία στο στερεοσκόπιο για εξακρίβωση ύπαρξης σκληρώτιων.

Παρατήρηση τρυβλίων με σκληρώτια στο στερεοσκόπιο