实验十一 人类 X 染色质的观察  一、实验目的  初步掌握观察与鉴别 X 染色质的简易方法  识别其形态特征及所在部位。

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1 实验十一 人类 X 染色质的观察  一、实验目的  初步掌握观察与鉴别 X 染色质的简易方法  识别其形态特征及所在部位。

2 二、实验原理  剂量补偿效应  人类正常男性体细胞中只有 1 条 X 染色体，不失活， 故见不到 X 染色质；  女性的 2 条 X 染色体中，在间期时有一条不表现活 性而保持浓缩状态，因此易于用适当的染料加以 显示，成为便于观察的性染色质体 ( 或称 X- 小体、 Barr 小体 ) 。

3 三、实验材料  1 、材料  正常女性口腔颊部黏膜、毛发根部细胞  2 、实验器具  显微镜、洁净的载玻片和盖玻片、刮片、吸水纸  3 、实验药品和试剂  95 ％酒精、 50 ％醋酸、 2 ％乳酸醋酸地衣红

4 四、实验步骤  1 、口腔颊部黏膜细胞的观察  （ 1 ）用清洁灭菌的刮片，从女性口腔两侧颊部 刮取上皮黏膜细胞，在原位刮取 2 ～ 3 次  （ 2 ）分别涂抹在干净载玻片上，每次可涂 1 ～ 3 片，涂抹范围为 1 ～ 2 张盖玻片大小。

5  （ 3 ）待稍干后，滴加 1 ～ 2 滴 2 ％乳酸醋酸地衣红， 在室温下染色 20 ～ 30 min ，勿使干燥，  （ 4 ）加盖玻片，并覆以吸水纸，用手指轻度加 压后进行镜检。  涂片后如不即检查，应在稍干时立即放入 95 ％酒精中固定 30 min 以上 ( 也可 固定 l ～ 2 d) ，取出，晾干后号，放置冰箱内保存。

6 2 、毛发根部细胞的观察  （ 1 ）拔取一根带有毛根的头发，自基部截取 2 cm 左右置载玻片上，  （ 2 ）在毛根部加 1 滴 2 ％乳酸醋酸地衣红染液， 片刻后再加 1 滴 50 ％醋酸 ( 或只加 50 ％醋酸 ) ， 低倍镜下观察。

7  （ 3 ）待毛根鞘软化后拨去毛干，重新加 1 滴 染液，覆以盖玻片，  （ 4 ）在酒精灯上轻微加热后静置 5 min ，隔 一片吸水纸用手指轻度加压后镜检。

8 3 、 X- 染色质的辨认  （ 1 ）低倍镜下：  检出典型的可数细胞，其标准为：  ①核质呈网状或细颗状分布；  ②核膜清晰，核无缺损；  ③染色适度；  ④周围无杂质。

9 （ 2 ）高倍镜或油镜下观察  选定细胞后，  在高倍镜或油镜进一步观察。  X- 染色质的形态表现为一结构致密的浓染小体， 轮廓清楚，大小约 1μm ，常附着于核膜缘或靠近 内侧，其形状有微凸形、三角形、卵形、短棒形 及双球形等。  正常女性口腔黏膜细中 30 ％～ 50 ％有 1 个 Barr 小 体，在不同实验室中计数的差别较大，在男性中 偶尔可见不典型者。

10 五、作业  (1) 观察 50 个女性可数细胞，同时观察 50 个男 性可数细胞为对照，分别计算显示 X- 染色质 细胞所占的百分比。  (2) 观察中选绘 4 ～ 5 个典型细胞，示明 X- 染色 质的形态部位。