ΑΔΕΝΟΪΟΙ-Ιστορική αναδρομή

Παρουσίαση με θέμα: "ΑΔΕΝΟΪΟΙ-Ιστορική αναδρομή"— Μεταγράφημα παρουσίασης:

1 ΑΔΕΝΟΪΟΙ-Ιστορική αναδρομή
1953 Rowe - καλλιέργειες κυττάρων αδενοειδών εκβλαστήσεων Μέσα σε 12 περίπου χρόνια - 31 ορότυποι (οφθαλμική και αναπνευστική νόσος) Σήμερα : 53 ορότυποι-ταξινομούνται σε 7 υποείδη (Α, Β1, Β2, C, D, E, F) 1962 – ανακάλυψη ογκογόνου δράσης σε τρωκτικά Ορότυποι 2,5,7 και 12 – χαρτογράφηση DNΑ, καθορισμός λειτουργιών.

2 ΓΟΝΙΔΙΩΜΑ

3 Δομή Διάμετρος 70-75 nm Γενετικό υλικό ds DNA
Kαψίδιο:252 υπομονάδες (καψομερίδια) Δομή εικοσαέδρου: 20 πλευρές και 12 κορυφές Χωρίς έλυτρο Ινίδια : από τις κορυφές του εικοσαέδρου

4 Καψιδικές υπομονάδες Εξαμερίδια Πενταμερίδια Είναι 240
Γειτονεύουν με 6 το καθένα Πενταμερίδια Είναι 12 Γειτονεύουν με 5 το καθένα

5 Δομή

6 ΑΝΤΙΓΡΑΦΗ

7 Θανατηφόρος διάχυτη λοίμωξη 3, 7, 21, 30 Βρέφη - νήπια
ΗΛΙΚΙΑΚΗ ΟΜΑΔΑ ΣΥΝΔΡΟΜΟ ΣΥΧΝΟΤΕΡΟΙ ΟΡΟΤΥΠΟΙ Νεογνά Θανατηφόρος διάχυτη λοίμωξη 3, 7, 21, 30 Βρέφη - νήπια Καταρροή, φαρυγγίτιδα (ασυμπτωματική λοίμωξη) 1, 2, 5 Παιδιά Λοίμωξη ανώτερου αν/κού 1, 2, 4-6 Φαρυγγοεπιπεφυκοκός πυρετός 3, 7 Αιμορραγική κυστίτιδα 7, 11, 21 Διάρροια 2, 3, 5, 40, 41 Εγκολεασμός 1, 2, 4, 5 Μηνιγγοεγκεφαλίτιδα 2, 6, 7, 12 Νεαροί ενήλικες Οξεία αν/κή νόσος - Πνευμονία 3, 4, 7 Ενήλικες Επιδημική κερατοεπιπεφυκίτιδα 8, 19, 37 Ανοσοκατεσταλμένοι Πνευμονία – λοίμωξη ουροποιητικού 5, 31, 34, 35, 39 Εντερική λοίμωξη 42-51 Λοιμώξεις ΚΝΣ (εγκεφαλίτιδα) 12, 32

8

9 Κυτταροκαλλιέργεια Κυτταρική μονοστιβάδα
κύτταρα εμβρύου ανθρώπου (πνεύμονα ή νεφρού) HeLa KB Hep-2 Α549: συνεχής κυτταρική σειρά από ανθρώπινο αδενοκαρκίνωμα (ενδεδειγμένη).

10 Κυτταροπαθογόνος δράση
Σε 4-7 ημέρες (συλλογή δείγματος εντός 3 ημερών από την έναρξη της νόσου) 1-3 εβδομάδες (συλλογή δείγματος > 3 ημέρες από την έναρξη της νόσου Μεγάλη ευαισθησία αλλά αργεί (καθυστέρηση θεραπείας)

11 Κυτταροπαθογόνος δράση
Διόγκωση και στρογγυλοποίηση κυττάρων Συνάθροισή του σε ομάδες

12 Κυτταροπαθογόνος δράση 10x
5 ημέρες 7 ημέρες Giemsa Giemsa-stained HeLa cells (from a human cervical carcinoma) 5 days postinfection with human adenovirus showing cell rounding and clustering.  Cells were observed with a 10X objective. (Erica Suchman and Carol Blair, Colorado State University—Fort Collins) FIG. 12.  Giemsa-stained HeLa cells (from a human cervical carcinoma) 7 days postinfection with human adenovirus showing pronounced cell enlargement, rounding, and distinctive “grape-like" clusters.  Cells were observed with a 10X objective. (Erica Suchman and Carol Blair, Colorado State University—Fort Collins)

13 Καλλιέργεια με το σύστημα Shell vial
Επώαση και χρώση με φθορίζοντα αντιορό την 3η ημέρα Παρατήρηση σε μικροσκόπιο φθορισμού. Συλλογή δείγματος εντός 7 ημερών από την έναρξη των συμπτωμάτων (καλή συσχέτιση με κοινή κυτταροκαλλιέργεια)

14 Ανίχνευση αντιγόνων ΕΙΑ
Αποτελέσματα σε 75 λεπτά Μειονέκτημα : χαμηλή ευαισθησία Απαιτείται υψηλό ιϊκό φορτίο (ως 3 ημέρες από την έναρξη νόσου)

15 Ανίχνευση αντιγόνων Ανοσοφθορισμός

16 Ιστολογική εικόνα Πνευμονίας από αδενοϊό σε ανοσοκατεσταλμένο παιδί, με απόφραξη βρογχιολίων. Παρατηρούμε την έντονη διάμεση διήθηση από μονοπύρηνα και υαλοειδείς μεμβράνες. Οι αδενοϊοί που εμπλέκονται είναι κυρίως τύπου 3 και 7 και προκαλούν νεκρωτική βρογχίτιδα και βρογχιολίτιδα

17 Ορολογική διάγνωση (ανίχνευση αντισωμάτων)
Αντισώματα κοινά της ομάδας (σύνδεση συμπληρώματος) Διατηρούνται μήνες – χρόνια Εξουδετερωτικά αντισώματα ειδικά του τύπου Διατηρούνται ισοβίως. Αναστολή αιμοσυγκόλλησης

18 PCR Μεγάλη ευαισθησία και ειδικότητα Πολύ γρήγορα αποτελέσματα
Υψηλό κόστος Εξειδικευμένο προσωπικό Μεγάλη προσοχή για την αποφυγή επιμολύνσεων

19 Ανίχνευση αδενοϊών

20 Τυποποίηση αδενοϊών PCR PCR-RFLP Real-time PCR
Ανίχνευση με ηλεκτροφόρηση Ανίχνευση με υβριδισμό σε strips ή σε πλακίδια τύπου ELISA PCR-RFLP Real-time PCR

21 Τυποποίηση αδενοϊών (PCR) (από Akerblom et. al. J Med Virol 1999
Subgenus-Specific Primers for the Amplification of Adenoviruses Subgenus Primer length (bp) A HsgA1 5-AAGGTGTCAATYATGTTTG-3 A HsgA2 5-ACGGTTACTTKTTT-3 HsgA1/A2 299 B HsgB1 5-TCTATTCCCTACCTGGAT-3 B HsgB2 5-ACTCTTAACGGCAGTAG-3 HsgB1/B2 465 C HsgC1 5-ACCTTTGACTCTTCTGT-3 C HsgC2 5-TCCTTGTATTTAGTATC-3 HsgC1/C2 269 D HsgD1 5-CCATCATGTTCGACTCCT-3 D HsgD2 5-AGGTAGCCGGTGAAGCC-3 HsgD1/D2 331 E HsgE1 5-GACTCTTCCGTCAGCTGG-3 E HsgE2 5-GCTGGTAACGGCGCTCT-3 HsgE1/E2 399 F HsgF1 5-ATTTCTATTCCTTCGCG-3 F HsgF2 5-TCAGGCTTGGTACGGCC-3 HsgF1/F2 586

22 Τυποποίηση αδενοϊών (PCR (από Akerblom et. al. J Med Virol 1999

23 Τυποποίηση αδενοϊών (PCR-RFLP) (από Saitoh-Inagawa et al
Τυποποίηση αδενοϊών (PCR-RFLP) (από Saitoh-Inagawa et al. J Clin Microbiol 1996) ΧΡΗΣΗ ΚΟΙΝΩΝ ΕΚΚΙΝΗΤΩΝ (consensus primers) – nested pcr

24 Τυποποίηση αδενοϊών (PCR-RFLP) (από Saitoh-Inagawa et al
Τυποποίηση αδενοϊών (PCR-RFLP) (από Saitoh-Inagawa et al. J Clin Microbiol 1996)

25 Τυποποίηση αδενοϊών (PCR)
ADENOVIRUS DETECTION AND TYPING (ARGENE, FRANCE)

26 Τυποποίηση αδενοϊών (Real Time PCR) από Gu et al. J Clin Microbiol 2003

27 Τυποποίηση αδενοϊών (Real Time PCR) από Gu et al. J Clin Microbiol 2003

28 PARVOVIRUS

29

30

31

32

33

34

35

36

37

38

39

40

41

42 HPV dsDNA ιός χωρίς φάκελο Προσβάλλει τα ανώτερα σπονδυλωτά
Κυκλικό γονιδίωμα περίπου 8kb Σφαιρικό καψίδιο Προσβάλλει τα ανώτερα σπονδυλωτά Ειδικότητα προσβολής Τροπισμό ως προς το πλακώδες επιθήλιο Δημιουργία θηλωμάτων (κονδυλωμάτων) και μυρμηγκιών

43 ΓΟΝΙΔΙΩΜΑ

44 ΓΟΝΙΔΙΩΜΑ E1: Viral replication; maintains episome
E2: Transcriptional regulation, co-factor for viral replication E4: Disrupts cytokeratins E5: Interacts with growth factor receptors E6: Transforming protein; p53 degradation E7: Transforming protein; Rb binding

45 ΓΟΝΙΔΙΩΜΑ ΜΟΝΟ ΟΙ Ε6 ΚΑΙ Ε7 ΠΑΡΑΓΟΝΤΑΙ ΟΤΑΝ Ο ΙΟΣ ΕΊΝΑΙ ΕΝΣΩΜΑΤΩΜΕΝΟΣ ΣΤΟ ΓΟΝΙΔΙΩΜΑ ΚΑΙ ΕΙΔΙΚΑ ΣΤΟΝ ΚΑΡΚΙΝΟ ΤΟΥ ΤΡΑΧΗΛΟΥ ΤΗΣ ΜΗΤΡΑΣ

46 ΤΑΞΙΝΟΜΗΣΗ Περισσότεροι από 100 τύποι, >80 έχουν ταυτοποιηθεί πλήρως Η τυποποίηση βασίζεται αποκλειστικά στην νουκλεοτιδική αλληλουχία >10% μεταβλητότητα = νέος τύπος 2-10% = υπότυπος, <2% = ποικιλία Οι τύποι αριθμούνται με αύξοντα αριθμό ανάλογα με την σειρά ανακάλυψης

47 ΤΑΞΙΝΟΜΗΣΗ High Risk = Carcinogenic Low Risk = Non-carcinogenic
16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68 and 69 16 and 18 cause 70 % of cervical cancers Low Risk = Non-carcinogenic 6 and 11 cause 90 % of warts

48 ΔΙΑΓΝΩΣΗ Δεν καλλιεργούνται εύκολα
Η ανίχνευση αντισωμάτων δεν έχει μεγάλη ευαισθησία Η διάγνωση της λοίμωξης απαιτεί ανίχνευση του γενετικού υλικού του ιού Σε δείγμα από την περιοχή της βλάβης Ο ιός πρέπει να είναι ενεργός για να μπορεί να ανιχνευθεί

49 ΟΓΚΟΓΕΝΕΤΙΚΗ ΔΡΑΣΗ

50 ΟΓΚΟΓΕΝΕΣΗ

51 ΔΙΑΓΝΩΣΤΙΚΕΣ ΜΕΘΟΔΟΙ Κυτταρολογία Ιστολογία Ηλεκτρονικό μικροσκόπιο
Ανοσοϊστοχημεία Μοριακές τεχνικές Ορολογία

52 ΜΟΡΙΑΚΕΣ ΤΕΧΝΙΚΕΣ ΧΩΡΙΣ ΕΝΙΣΧΥΣΗ
IN SITU ΥΒΡΙΔΙΣΜΟΣ DOT BLOT SOUTHERN, NORTHERN BLOT

53 ΜΟΡΙΑΚΕΣ ΤΕΧΝΙΚΕΣ ME ΕΝΙΣΧΥΣΗ

54 HYBRID CAPTURE

55 HYBRID CAPTURE

56 HYBRID CAPTURE

57 HYBRID CAPTURE

58 HYBRID CAPTURE

59 HYBRID CAPTURE

60 PCR

61 PCR

62 PCR ΤΥΠΟΠΟΙΗΣΗ

63 PCR ΤΥΠΟΠΟΙΗΣΗ ΑΝΙΧΝΕΥΣΗ ΠΡΟΪΟΝΤΩΝ ΣΕ GEL ΑΓΑΡΟΖΗΣ Ή BLOT
ΣΕ ΜΙΚΡΟΠΛΑΚΕΣ ELISA

64 PCR ΤΥΠΟΠΟΙΗΣΗ ΥΒΡΙΔΙΜΟΣ ΜΕΤΑ ΤΗΝ PCR ΣΕ ΜΙΚΡΟΣΥΣΤΟΙΧΙΑ DNA

65 ΔΙΑΓΝΩΣΤΙΚΕΣ ΜΕΘΟΔΟΙ ROCHE LINE BLOT

66 ΔΙΑΓΝΩΣΤΙΚΕΣ ΜΕΘΟΔΟΙ ROCHE LINE BLOT

67 ΔΙΑΓΝΩΣΤΙΚΕΣ ΜΕΘΟΔΟΙ ROCHE AMPLICOR