Καλλιέργια επιλεγμένων βακτηρίων Κρητικός Ιωάννης Νταβράζου Βασιλική Ντελή Πολυξένη

Καλλιέργεια – Θρεπτικό υπόστρωμα Καλλιέργεια : η ανάπτυξη ενός μικροοργανισμού υπό ελεγχόμενες συνθήκες. Θρεπτικό υπόστρωμα : παρέχει θρεπτικά στοιχεία και μέρος συνθηκών ανάπτυξης

Σύσταση θρεπτικών υποστρωμάτων Πηγή ενέργειας και απαραίτητων στοιχείων σάκχαρα, λιπίδια, πρωτείνες Παράγοντες ανάπτυξης που δεν μπορουν να συνθέσουν νερό, μέταλλα, αμέταλλα, βιταμίνες Συστατικα αναλογα με την λειτουργεια τους παράγοντες σταθεροποίησης, ανασταλτικούς παράγοντες, χρωμογόνα και φθορίζοντα συστατικά, δείκτες

Η επιλογή του κατάλληλου θρεπτικού υλικού γίνεται βάση των μεταβολικών και βιοχημικών ιδιοτήτων του μικροοργανισμού.

Γένος Streptococcus Gram-θετικά βακτήρια Η καλλιέργεια γίνεται σε αιμοτούχο άγαρ με 5% αίμα προβάτου Με βάση την ζώνη αιμόλυσης, κατηγοριοποιούμε τους στρεπτοκόκκους σε: Α-αιμολυτικούς (οξείδωση αιμογλοβίνης-πράσινη ζώνη αιμόλυσης) Β-αιμολυτικοί (πλήρης λύση ερυθρών-διαυγής ζώνη) Γ-αιμολυτικοί-μη αιμολυτικοί (καμία αιμόλυση)

Γένος Staphylococcus Gram-θετικοί κόκκοι. Όλα τα είδη αναπτύσονται παρουσία χοληδόχων αλάτων. Μερικά διασπάνε την μανιτόλη. Ανθεκτικά στην αλατότητα. Αναπτύσσονται σε Baird-Parker άγαρ. Chapman (περιέχει και μανιτόλη και NaCl 7,5%) ο S. epidermidis δεν διασπά την μανιτόλη άρα φέρει λευκές αποικίες στο Chapman. Staphylococcus aureus

Γένος Corynebacterium Gram-θετικοί βάκιλλοι. C.diphtheriae προκαλει την διφθερίτιδα. Χρειάζονται βιοτίνη για να αναπτυχθουν. Αναπτύσσονται αργά. Καλλιεργούνται σε αιματούχο άγαρ και trypticase soy agar. Ιδιαίτερα το Loeffler άγαρ χρησιμοποιείτε για την καλλιέργια του C.diphtheriae, σχηματίζει χαρακτηριστικές μεταχρωματικές αποικίες.

Γένος Neisseria Gram-αρνητικοί διπλόκοκκοι. Σε 35ο-36ο C σε ατμόσφαιρα 3-10% CO2 Αναγνωρίζονται με βάση τα σάκχαρα από τα οποία παράγουν οξέα. Κύρια παθογόνα N. gonorrhoeae, N. meningitidis Κύριό θρεπτικό υλικό το Thayer-Martin άγαρ (αίμα-αντιβιοτικά)

Γένος Mycobacterium Gram-θετικά. To M. Leprae δεν καλλιεργείται. Το θρεπτικό υλικό Lowenstein-Jensen είναι κατάληλο για το M. Tuberculosis, καθώς περιέχει μικρες ποσότητες πενικιλίνης και ναλιδιξικό οξύ. Η παρουσία γλυκερόλης ενισχύει την ανάπτυξη του.

Γένος Bordetella Bordetella pertussis (κοκκύτης) Bordet-gengou agar with 15% sheep blood Bordetella agar with C 7% horse blood Περιέχουν άμυλο που απορροφά τα λιπαρά οξέα της Φ.Μ.Χ., γλυκερόλη ως πηγή άνθρακα, αίμα για παράγοντες πήξης και κεφαλεξίνη.

Γένος Haemophilus Haemophilus influenzae BD Chocolate agar with Isovitalex and Bacitracin Περιέχει αίμη(παράγοντας Χ), NAD(νικοτιναμιδο-αδενινο-δινουκλεοτίδιο), εμφανίζεται το φαινόμενο του δορυφορισμού από Staphylococcus aureus που παράγει μεταβολικά προιόντα(παράγοντας V), βακιτρασίνη για Φ.Μ.Χ.

Enterobacteriaceae (οικογένεια) Ανάλογα με το αν διασπούν τη λακτοζη στο Mac Concey χωρίζονται σε: Λακτόζη+ (κόκκινες αποικίες) Esherichia Klebsiella Enterobacter Λακτόζη- (άχροες αποικίες) Salmonella Shigella Serratia Proteus

Kligler Iron Agar Με αυτό το υλικό ελέγχουμε τη διάσπαση της γλυκόζης, λακτόζης, την παραγωγή Η2S με ή χωρίς την παραγωγή αερίου. Αν το βακτήριο διασπά τη γλυκόζη με παραγωγή αερίου παρατηρείται κίτρινο χρώμα στην ευθεία στήλη και σχηματισμό φυσσαλίδων ή ανασήκωση του υλικού. Αν παράγει H2S μαύρο χρώμα στην ευθεία στήλη. Αν διασπά τη λακτόζη κίτρινο χρώμα σε όλο το υλικό.

SS agar Λόγω της περιεκτικότητας σε χολικά άλατα αναστέλλει την ανάπτυξη όλων των εντεροβακτηριακων εκτός της Samonella και Shigella. ----------------------------------------------------------------------------------------------------- A. Klebsiella pneumoniae B. Escherichia coli C: Salmonella sp. D: Proteus mirabilis E: Pseudomona aeruginosa

Mycoplasma - Vibrio (γένη) Θρεπτικά υλικά με ορό ίππου εκχύλισμα μυκητών και αντιβιοτικά για την M. pneumoniae (άτυπη πνευμονία Φ.Μ.Χ. Μ. Hominis (φλεγμονή ουρογεννητικού) Σε ειδικο θρεπτικό ζωμό που περιέχει αργινίνη και ερυθρομικίνη. Είναι το μοναδικό είδος από τα Mycoplasma spp που υδρολύει την αργινίνη και έχει αντοχή στην ερυθρομικίνη. Vibrio Clolerae (χολέρα) Χρησιμοποιούμε σε ανακαλλιέργεια το TCBS agar (Triosulfate Citrate Bile Salt Agar) το οποίο καλύπτει τις ανάγκες του V. Cholerae για ανάπτυξη σε αλκαλικό pH (8-9) λόγω των χολικών αλάτων που περιέχει.

Γένος Brucella Gram – αερόβιος βάκιλλος, ακίνητο, μη σπορογόνο Βρουκέλλωση – ζωοανθρωπονόσος Ειδικά : B.melitensis, B.abortus, B.suis. Καλλιέργεια μόνο σε θρεπτικά υλικά πλούσια σε τρυπτικάση. Τρυπτικάση-σόγια άγαρ (TSA) Ζωμό με τρυπτικάση-σόγια (TSB) Brucella Blood Agar (αποικίες άχρωμες, λείες, γυαλιστερές)

Γένος Clostridium Gram +, αναερόβιο, σπορογόνο C.tetani Εγωτοξίνη – τέτανος Αιματούχο : αιμόλυση, φαινόμενο ερπυσμού C.perfringens Αεριογόνος γάγγραινα Αιματούχο : β ζώνη αιμόλυσης Αιματούχο προβάτου : διπλή ζώνη αιμόλυσης