3. ΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΑ ΘΡΕΠΤΙΚΑ ΥΛΙΚΑ ΤΑΥΤΟΠΟΙΗΣΗ ΜΙΚΡΟΒΙΩΝ

Παρουσίαση με θέμα: "3. ΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΑ ΘΡΕΠΤΙΚΑ ΥΛΙΚΑ ΤΑΥΤΟΠΟΙΗΣΗ ΜΙΚΡΟΒΙΩΝ"— Μεταγράφημα παρουσίασης:

1 3. ΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΑ ΘΡΕΠΤΙΚΑ ΥΛΙΚΑ ΤΑΥΤΟΠΟΙΗΣΗ ΜΙΚΡΟΒΙΩΝ
3. ΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΑ ΘΡΕΠΤΙΚΑ ΥΛΙΚΑ ΤΑΥΤΟΠΟΙΗΣΗ ΜΙΚΡΟΒΙΩΝ ΘΕΟΔΩΡΟΣ Η. ΠΙΤΤΑΡΑΣ MD PhD Ιατρός Βιοπαθολόγος Λέκτορας Μικροβιολογίας ΕΚΠΑ

2 Έμεινε παράλυτη από χάμπουργκερ
Κυριακή, 11 Οκτωβρίου 2009 Έμεινε παράλυτη από χάμπουργκερ Η Στέφανι Σμιθ έκανε κάτι που το κάνουν εκατομμύρια άνθρωποι σε όλον τον κόσμο. Έφαγε ένα χάμπουργκερ. Σήμερα, δυο χρόνια μετά, είναι παράλυτη έχοντας πέσει θύμα μιας βιομηχανίας η οποία δεν ελέγχεται σχεδόν καθόλου Το μπιφτέκι το είχε αγοράσει η οικογένεια της από σούπερ μάρκετ αλλά δεν ήταν και τόσο «άριστης ποιότητας» όπως ανέφερε η εταιρεία. Περιείχε ένα μείγμα γεμάτο λίπος από υπολείμματα σφαγμένων ζώων αλλά και συστατικά που προέρχονταν από την Νεμπράσκα, το Τέξας, τη Νότια Ντακότα αλλά και την Ουρουγουάη. Η Στέφανι στην αρχή αισθάνθηκε πόνους στο στομάχι και κράμπες. Νόμιζε ότι ήταν κάποιος ιός αλλά μετά από πέντε μέρες εισήχθη στο νοσοκομείο όπου οι γιατροί αναγκάστηκαν να της προκαλέσουν κώμα για εννέα εβδομάδες. Όταν ξύπνησε δεν μπορούσε να περπατήσει. Η Στέφανι είχε προσβληθεί από το πιο επικίνδυνο ιό της σαλμονέλας το εσχερίχια κόλι. Μετά την Στέφανι ασθένησαν άλλοι 940 καταναλωτές με αποτέλεσμα επιτέλους η εταιρεία να αποσύρει από την αγορά 40 τόνους συσκευασιών. Ο.Ν. Share on Facebook

3 Ποιοί μικροοργανισμοί καλλιεργούνται σε τεχνητά θρεπτικά υλικά;
Ποιοί μικροοργανισμοί καλλιεργούνται σε τεχνητά θρεπτικά υλικά; Ο όρος αναφέρεται σε ανεξάρτητους μικροοργανισμούς με κυτταρική δομή Τα βακτήρια Οι μύκητες Ορισμένα παράσιτα Entamoeba Plasmodium Leishmania Trypanosoma Trichomonas

4 ΘΡΕΠΤΙΚΑ ΥΛΙΚΑ Τεχνητά υλικά που περιέχουν θρεπτικές ουσίες και παράγοντες κατάλληλους για την ανάπτυξη και τον πολλαπλασιασμό των μικροβίων Καλλιέργεια μικροβίων για απομόνωση και διαχωρισμό (ταυτοποίηση) των μικροβίων που έχουν παθογόνο δράση

5 ΤΟ ΘΡΕΠΤΙΚΟ ΥΛΙΚΟ ΠΡΕΠΕΙ ΝΑ ΠΕΡΙΕΧΕΙ
ΝΕΡΟ (70%) ΠΗΓΗ ΑΝΘΡΑΚΑ ΚΑΙ ΕΝΕΡΓΕΙΑΣ (ΥΔΑΤΑΝΘΡΑΚΕΣ, ΠΡΩΤΕΙΝΕΣ κλπ.) ΠΗΓΗ ΑΛΑΤΩΝ (ΑΝΟΡΓΑΝΩΝ ΚΑΙ ΟΡΓΑΝΙΚΩΝ) ΠΗΓΗ ΑΖΩΤΟΥ [ΑΝΟΡΓΑΝΑ ΑΖΩΤΟΥΧΑ ΑΛΑΤΑ (ΝΗ+4, ΝΟ-3), ΠΡΩΤΕΙΝΕΣ κλπ.] ΔΙΑΦΟΡΑ ΙΧΝΟΣΤΟΙΧΕΙΑ

6 ΚΥΡΙΑ ΣΥΣΤΑΤΙΚΑ Πεπτόνες Εκχυλίσματα κρέατος και άλλων ιστών
Βιομηχανικά προϊόντα διάσπασης λευκωματούχων ουσιών ζωικής ή φυτικής προέλευσης Εκχυλίσματα κρέατος και άλλων ιστών Προϊόντα βρασμού του κρέατος (απομάκρυνση του λίπους και του λευκώματος)  συμπύκνωση

7 ΚΥΡΙΑ ΣΥΣΤΑΤΙΚΑ Εκχυλίσματα μυκήτων Σάκχαρα
Προστίθενται είτε σαν τροφή είτε για τη μελέτη των βιοχημικών ιδιοτήτων των μικροβίων Μονοσακχαρίτες (Γλυκόζη, Μανόζη) Δισακχαρίτες (Λακτόζη) Τρισακχαρίτες Πολυσακχαρίτες (Άμυλο, Γλυκογόνο) Γλυκοσίδες Αλκοόλες (Μαννιτόλη, Σορβιτόλη) Πεντόζες (Ξυλόζη) Άγαρ και άλλες στερεωτικές ουσίες Ροδόφυκος - φυτική ουσία Δεν αποτελεί τροφή για τα μικρόβια Λειώνει στους 80C και πήζει στους 30C

8 ΚΥΡΙΑ ΣΥΣΤΑΤΙΚΑ Αναγωγικές ουσίες Εκλεκτικές ουσίες ή μίγματα
Προστίθενται σαν βοηθητικό στοιχείο για τη δημιουργία αναερόβιου περιβάλλοντος Εκλεκτικές ουσίες ή μίγματα Χρωστικές( κρυσταλλικό ,ιώδες) Άλατα (NaCl, σεληνίτης, ιώδιο) pH (5,6 στο Sabouraud – 8,0 για δονάκια χολέρας) Αντιβιοτικά (το ζητούμενο μικρόβιο είναι ανθεκτικό και αναπτύσσεται) Χρωματομετρικοί δείκτες Ουσίες που αλλάζουν χρώμα όταν μεταβληθεί το pH. Χρησιμοποιούνται τόσο για τη ρύθμιση του pH των θρεπτικών υλικών κατά την παρασκευή τους όσο και ως δείκτες μεταβολής του pH όταν τα μικρόβια αναπτύσσονται μέσα σε αυτά

9 CHROMAGAR

10 ΔΙΑΚΡΙΣΗ ΘΡΕΠΤΙΚΩΝ ΟΥΣΙΩΝ

11 ΥΓΡΑ ΘΡΕΠΤΙΚΑ ΥΛΙΚΑ Διαλυμένα σε αποσταγμένο νερό
Αλκαλικό πεπτονούχο νερό Θρεπτικός ζωμός Ζωμός με σεληνιώδες Νάτριο Ζωμός Thioglycolate (θειογλυκολικός) Ζωμός Mueller-Hinton

12 ΗΜΙΡΡΕΥΣΤΑ ΘΡΕΠΤΙΚΑ ΥΛΙΚΑ
Θρεπτικά συστατικά διαλυμένα σε αποσταγμένο νερό και άγαρ σε αναλογία 0.5% Motility άγαρ (για έλεγχο κινητικότητας)

13 ΣΤΕΡΕΑ ΘΡΕΠΤΙΚΑ ΥΛΙΚΑ Θρεπτικά συστατικά διαλυμένα σε αποσταγμένο νερό και άγαρ σε αναλογία 1.5-2% Αιματούχο άγαρ Σοκολατόχρωμο άγαρ Thayer-Martin άγαρ Mac Conkey άγαρ Muller-Hinton άγαρ Salmonella-Shigella άγαρ

14

15

16 ΔΙΑΚΡΙΣΗ ΘΡΕΠΤΙΚΩΝ ΟΥΣΙΩΝ

17 ΕΚΛΕΚΤΙΚΑ ΘΡΕΠΤΙΚΑ ΥΛΙΚΑ
Περιέχουν ουσίες που επιτρέπουν την ανάπτυξη ενός είδους βακτηρίου, ενώ ταυτόχρονα οι ίδιες ουσίες αναστέλλουν την ανάπτυξη άλλων ειδών βακτηρίων Διευκολύνουν την απομόνωση συγκεκριμένου βακτηρίου Mac Conkey άγαρ (περιέχει χολικά άλατα  ανάπτυξη μόνο Gram- βακτηρίων) Thayer-Martin άγαρ Columbia άγαρ

18 S.aureus Enterobacter Mc Conkey

19 ΕΜΠΛΟΥΤΙΣΜΕΝΑ ΘΡΕΠΤΙΚΑ ΥΛΙΚΑ
Περιέχουν τα συστατικά των κοινών θρεπτικών υλικών εμπλουτισμένα με αίμα, ορό αίματος, πρωτεΐνες, αμινοξέα ή σάκχαρα Αιματούχο άγαρ Σακχαρούχοι θρεπτικοί ζωμοί Υλικό Loeffler

20 ΔΙΑΧΩΡΙΣΤΙΚΑ ΘΡΕΠΤΙΚΑ ΥΛΙΚΑ
Περιέχουν συστατικά (κυρίως σάκχαρα) που επιτρέπουν το μακροσκοπικό διαχωρισμό των αποικιών ομάδων βακτηρίων Mac Conkey άγαρ (περιέχει λακτόζη) Lac(+) Gram (-) κόκκινες αποικίες Lac(-) Gram (-) άχρωμες αποικίες

21 Lac (+)ΕΝΤΕΡΟΒΑΚΤΗΡΙΑΚΑ Lac (-)
Mc Conkey

22 E coli (Mac Conkey Άγαρ-ζωηρά ερυθρές αποικίες από τη ζύμωση της λακτόζης)

23 Άγαρ BD TCBS Άγαρ θειοθειικών/κιτρικών/χολικών αλάτων και σακχαρόζης, είναι ένα επιλεκτικό διαφορικό υλικό για την απομόνωση και την καλλιέργεια του Vibrio cholerae και άλλων ειδών Vibrio από κλινικά δείγματα και άλλα υλικά. TCBS

24 ΣΥΝΤΗΡΗΤΙΚΑ ΘΡΕΠΤΙΚΑ ΥΛΙΚΑ
Περιέχουν ουσίες που επιτρέπουν την επιβίωση των μικροβιακών κυττάρων για μεγάλο χρονικό διάστημα Υλικό μεταφοράς Stuart

25

26 Μορφολογία αποικιων(σχημα)
ΣΤΙΚΤΗ ΚΥΚΛΙΚΗ ΝΗΜΑΤΟΕΙΔΗΣ ΡΙΖΟΕΙΔΗΣ ΑΚΑΝΟΝΙΣΤΗ

27 ΠΟΛΥ ΛΕΠΤΗ ΔΙΑΧΥΤΗ ΕΠΙΠΕΔΗ ΥΠΕΡΥΨΩΜΕΝΗ ΚΥΡΤΗ ΚΕΝΤΡΟ ΥΠΕΡΥΨΩΜΕΝΟ
ΠΟΛΥ ΛΕΠΤΗ ΔΙΑΧΥΤΗ ΕΠΙΠΕΔΗ ΥΠΕΡΥΨΩΜΕΝΗ ΚΥΡΤΗ ΚΕΝΤΡΟ ΥΠΕΡΥΨΩΜΕΝΟ Υ Ψ Ο Σ

28

29 Π Ε Ρ Ι Θ Ω ΚΥΚΛΙΚΟ ΚΡΟΣΣΩΤΟ ΣΓΟΥΡΟ ΝΗΜΑΤΩΔΕΣ ΚΥΜΑΤΟΕΙΔΕΣ

30

31 Χρώμα

32

33

34 κίνηση ερπυσμος Proteus mirabilis

35

36 ΜΕΤΑΒΟΛΕΣ ΣΤΟ ΘΡΕΠΤΙΚΟ ΥΛΙΚΟ
ΑΙΜΟΛΥΣΗ β – αιμόλυση η πλήρης α – αιμόλυση η ατελής γ - αιμόλυση ΠΑΡΑΓΩΓΗ ΧΡΩΣΤΙΚΗΣ ΠΑΡΑΓΩΓΗ ΒΛΕΝΝΗΣ ΠΑΡΑΓΩΓΗ ΜΥΡΩΔΙΑΣ

37 Αιμόλυση (αιμολυτικος στρεπτοκοκκος-αιματουχο αγαρ)

38 β (αιματουχο αγαρ) πληρης αιμολυση γυρω απο τις μικρες αποικιες

39 α (χαρακτηριστικη πρασινη χροια γυρω απο τις
μικρες αποικιες) ατελης αιμολυση των ερυθρων αιμοσφαιριων

40 ΜΕΤΑΒΟΛΕΣ ΣΤΟ ΘΡΕΠΤΙΚΟ ΥΛΙΚΟ
ΑΙΜΟΛΥΣΗ β – αιμόλυση η πλήρης α – αιμόλυση η ατελής γ - αιμόλυση ΠΑΡΑΓΩΓΗ ΧΡΩΣΤΙΚΗΣ ΠΑΡΑΓΩΓΗ ΒΛΕΝΝΗΣ ΠΑΡΑΓΩΓΗ ΜΥΡΩΔΙΑΣ

41 Pseudomonas aeruginosa (Παραγωγή πράσινης πυοκυανίνης)

42 (Pseudomonas aeruginosa)
παραγωγή βλέννης (Pseudomonas aeruginosa)

43

44 Staphylococcus Μεμονωμένες αποικίες

45 Staphylococcus aureus (χρυσίζων-αιματούχο άγαρ)

46 Staphylococcus aureus

47 Bacillus

48 Proteus (κοινό θρεπτικό άγαρ)

49 E coli – Serratia marcescens

50 Salmonella (υλικό XLD μεγάλες ερυθρές αποικίες με μαύρο κέντρο-καλλιέργεια κοπράνων)

51 EMB - E coli (ΑΝΑΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΣ ΣΕ ΕΜΒ ΥΛΙΚΟ)

52 Επιμόλυνση

53 ΤΑΥΤΟΠΟΙΗΣΗ ΒΑΚΤΗΡΙΩΝ
Είναι η εκτέλεση του συνόλου εκείνων των βιοχημικών ,μικροβιολογικών η/και ορολογικών δοκιμασιών που οδηγούν στην αναγνώριση ενός βακτηρίου η μύκητα. Δοκιμασία καταλάσης Σταφυλόκοκκοι  καταλάση (+) Στρεπτόκοκκοι  καταλάση (-) Δοκιμασία κοαγκουλάσης (πηκτάσης) Staphylococcus aureus  κοαγκουλάση (+) Άλλοι σταφυλόκοκκοι  κοαγκουλάση (-) Δοκιμασία οξειδάσης Εμβολιασμός αποικίας σε τυποποιημένο «σετ» βιοχημικών δοκιμασιών Staph Api System Strep Api System

54 Καταλάση Αρνητική Θετική διαλυμα Η2Ο2 (Στρεπτόκοκκος) (Σταφυλόκοκκος)

55 ΤΑΥΤΟΠΟΙΗΣΗ ΒΑΚΤΗΡΙΩΝ
Είναι η εκτέλεση του συνόλου εκείνων των βιοχημικών ,μικροβιολογικών η/και ορολογικών δοκιμασιών που οδηγούν στην αναγνώριση ενός βακτηρίου η μύκητα. Δοκιμασία καταλάσης Σταφυλόκοκκοι  καταλάση (+) Στρεπτόκοκκοι  καταλάση (-) Δοκιμασία κοαγκουλάσης (πηκτάσης) Staphylococcus aureus  κοαγκουλάση (+) Άλλοι σταφυλόκοκκοι  κοαγκουλάση (-) Δοκιμασία οξειδάσης Εμβολιασμός αποικίας σε τυποποιημένο «σετ» βιοχημικών δοκιμασιών Staph Api System Strep Api System

56 Κοαγκουλάση Σε πλάκα (πήξη) Σε σωληνάριο (κροκύδες+S.aureus)

57 Οξειδάση Ινδόλη Θετική: μώβ (ΝΑΙΣΣΕΡΙΕΣ-ΨΕΥΔΟΜΟΝΑΔΕΣ) Θετική: ρόζ (E.COLI)

58 Βιοχημική ταυτοποίηση

59

60 ΠΡΑΚΤΙΚΗ ΑΣΚΗΣΗ: ΕΜΒΟΛΙΑΣΜΟΣ ΣΕ ΘΡΕΠΤΙΚΑ ΥΛΙΚΑ
ΕΜΒΟΛΙΟ ΕΙΝΑΙ Η ΜΙΚΡΗ ΠΟΣΟΤΗΤΑ ΚΥΤΤΑΡΩΝ Ή ΣΠΟΡΙΩΝ ΕΝΟΣ ΜΙΚΡΟΟΡΓΑΝΙΣΜΟΥ Ή ΜΙΚΡΗ ΠΟΣΟΤΗΤΑ ΕΝΑΙΩΡΗΜΑΤΟΣ ΜΙΓΜΑΤΟΣ ΜΙΚΡΟΟΡΓΑΝΙΣΜΩΝ. ΕΜΒΟΛΙΑΣΜΟΣ ΕΙΝΑΙ Η ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ ΑΣΗΠΤΙΚΗΣ ΜΕΤΑΦΟΡΑΣ ΤΟΥ ΕΜΒΟΛΙΟΥ ΣΕ ΚΑΘΑΡΟ, ΑΠΟΣΤΕΙΡΩΜΕΝΟ ΥΓΡΟ Ή ΣΤΕΡΕΟ ΘΡΕΠΤΙΚΟ ΥΛΙΚΟ.

61

62

63

64 How to streak out an inoculum to single colonies
now flame the loop now flame the loop now flame the loop now flame the loop

65 Streak Plate Figure 6.10a, b

66 ΚΑΛΗ ΕΠΙΤΥΧΙΑ !!