Ε Κ Φ Ε Σ Ε Ρ Ρ Ω Ν ΕΡΓΑΣΤΗΡΙΑΚΕΣ ΑΣΚΗΣΕΙΣ ΒΙΟΛΟΓΙΑΣ Γ΄ ΛΥΚΕΙΟΥ Ε Κ Φ Ε Σ Ε Ρ Ρ Ω Ν Απομόνωση νουκλεϊκών οξέων Πρόταση εργαστηριακού οδηγού 2. Πρόταση ΕΚΦΕ κλικ 2008 -09 Επιμέλεια: Σαμαράς Πασχάλης

Απομόνωση νουκλεϊκών οξέων Όργανα-Συσκευές Μπλέντερ κουζίνας Μαχαίρι λαχανικών Μεγάλο πλαστικό χωνί Δύο ποτήρια ζέσεως 250ml Φίλτρο καφετιέρας Πιπέτα ή σύριγγα των 10ml Γυάλινη ράβδος ανάδευσης Αντιδραστήρια Υλικά Τριμμένος πάγος Ένα κρεμμύδι 10ml υγρό πιάτων 3 gr αλάτι 100ml απεσταγμένο νερό 2-3 σταγόνες διαλύματος 0,1g/100ml πρωτεϊνάση ή πεψίνη 6ml παγωμένη αιθανόλη ΕΚΦΕ ΣΕΡΡΩΝ 2008-09

Απομόνωση νουκλεϊκών οξέων Προσθέτουμε το αλάτι στο υγρό πιάτων και συμπληρώνουμε μέχρι100ml με απεσταγμένο νερό. Κόβουμε το κρεμμύδι σε μικρά κομμάτια και το προσθέτουμε στο παραπάνω διάλυμα Τοποθετούμε στο υδατόλουτρο για 10 λεπτά στους 50-55 οC. ΕΚΦΕ ΣΕΡΡΩΝ 2008-09 3

Απομόνωση νουκλεϊκών οξέων Ψυχουμε το δοχείο σε τριμμένο πάγο για 5 λεπτά αναδεύοντας κάθε μισό λεπτό. Ομογενοποιούμε στο μπλέντερ για ακριβώς 5 sec. Φιλτράρουμε το υγρό και συλλέγουμε το διαυγές διάλυμα. ΕΚΦΕ ΣΕΡΡΩΝ 2008-09 4

Απομόνωση νουκλεϊκών οξέων Μεταφέρουμε σε δοκιμαστικό σωλήνα 10ml υγρού. Προσθέτουμε 2-3 σταγόνες διαλύματος πεψίνης και αναδεύουμε ήπια. Προσθέτουμε την παγωμένη αιθανόλη ώστε να σχηματιστεί ίσο στρώμα πάνω από το υγρό. ΕΚΦΕ ΣΕΡΡΩΝ 2008-09 5

Απομόνωση νουκλεϊκών οξέων Περιμένουμε λίγα λεπτά και <ψαρεύουμε> τα νουκλεϊκά οξέα με γυάλινη ή ξύλινη ράβδο. ΕΚΦΕ ΣΕΡΡΩΝ 2008-09 6

Απομόνωση νουκλεϊκών οξέων Όργανα-Συσκευές Σακουλάκι τροφίμων. Πλαστικό χωνί. Ποτήρι ζέσεως. Τούλι. Μεγάλος δοκιμαστικός σωλήνας. Γυάλινη ή ξύλινη ράβδος ανάδευσης. Αντιδραστήρια Υλικά Δυο – τρείς φράουλες. ½ κουταλάκι γλυκού απορρυπαντικό. Αλάτι στη μύτη του κουταλιού. 100ml νερό. Λίγη παγωμένη αιθανόλη (κατάψυξη). ΕΚΦΕ ΣΕΡΡΩΝ 2008-09

Απομόνωση νουκλεϊκών οξέων Πολτοποιούμε 2-3 φράουλες σε κλειστό σακουλάκι τροφίμων με λίγο νερό (50ml). Στραγγίζουμε σε μικρό ποτήρι ζέσης. ΕΚΦΕ ΣΕΡΡΩΝ 2008-09

Απομόνωση νουκλεϊκών οξέων Προσθέτου με ½ κουταλάκι γλυκού υγρό πιάτων, πολύ λίγο αλάτι (στη μύτη του κουταλιού) και αναδεύουμε. ΕΚΦΕ ΣΕΡΡΩΝ 2008-09

Απομόνωση νουκλεϊκών οξέων Μεταφέρουμε μια ποσότητα στο δοκιμαστικό σωλήνα. Προσθέτουμε προσεκτικά την παγωμένη αιθανόλη ώστε να σχηματίσει στρώμα 2-3 cm πάνω από το υλικό. ΕΚΦΕ ΣΕΡΡΩΝ 2008-09

Απομόνωση νουκλεϊκών οξέων Παρατηρούμε την άνοδο των νουκλεϊκών οξέων στην αιθανόλη Ψαρεύουμε τα νουκλεϊκά οξέα περιστρέφοντας ήπια ένα ξύλινο καλαμάκι ΕΚΦΕ ΣΕΡΡΩΝ 2008-09

Απομόνωση νουκλεϊκών οξέων Καλή επιτυχία ΕΚΦΕ ΣΕΡΡΩΝ 2008-09 Επιμέλεια: Σαμαράς Πασχάλης