R-Biopharm AG ფერმენტაციული ბიოანალიზი 2011

 შაქრები მჟავები სპირტები და სხვა... ფერმენტული ანალიზი ეს არის შუალედური კატაბოლური პროდუქტების ანალიზი ფერმენტების საშუალებით.  შაქრები მჟავები სპირტები და სხვა... 2011

1954წ. - დაიწყო ფერმენტების გამოყენება კლინიკო-ქიმიურ ლაბორატორიებში. 1954წ. - დაიწყო ფერმენტების გამოყენება კლინიკო-ქიმიურ ლაბორატორიებში. 1970წ. - დაიწყო ფერმენტების გამოყენება კვებით დიაგნოსტიკაში. 1975წ. - პირველად გამოჩნდა Boehringer Mannheim-ის ტესტ კომპლექტები საკვები პროდუქტებისა და ცხოველთა საკვების ანალიზისათვის. 2011

ფერმენტული მეთოდები კანონმდებლებობით: 2011

ნორმირებული ეტალონ-მეთოდები 2011

საერთაშორისო ორგანიზაციების რეკომენდაციები 2011

Roche-ს ტესტები დღეისთვის ითვლება ეტალონურ ტესტებად ტესტები გადის დეტალურ შემოწმებას ლაბორატორიათაშორის კვლევებში. შედეგები გამოქვეყნებულია. ეტალონ მეთოდებად აღიარებულია არამარტო სახელმწიფო, არამედ საერთაშორისო ორგანიზაციების მიერ. ხელმისაწვდომია 31 სახის ტესტი. 2011

ძირითადი პრინციპები ფერმენტები წარმოადგენენ ადამიანის ყველაზე მნიშვნელოვან ცილებს 108-1011-ჯერ აკატალიზებს რეაქციებს ხარჯის გარეშე აკატალიზებს რეაქციებს. მკაცრად სპეციფიურებია 2011

ტესტირების პრინციპი ფერმენტები აკატალიზებს გარკვეული სუბსტრატის გარდაქმნის სპეციფიურ რეაქციას კოფერმენტი ძირითადად NAD (P) და მოქმედებს როგორც H+ აქცეპტორი წარმოქმნილი NADH რაოდენობა სინჯში სუბსტრატის რაოდენობისტ ექვივალენტურია დეჰიდროგენაზა სუბსტრატი კოფერმენტი+ პროდუქტი კოფერმენტი 2011

ფერმენტი და კოფერმენტი 2011

ოთახის ტემპერატურის 100-ით მატება ზრდის რეაქციის სიჩქარეს ორჯერ ოთახის ტემპერატურის 100-ით კლება ამცირებს რეაქციის სიჩქარეს ორჯერ რეაქციის სიჩქარის ტემპერატურული ოპტიმუმი -370C (ამის ზევით სიჩქარე კვლავ მცირდება) 2011

კოფერმენტი NAD ან NADP - ნიკოტინამიდ-ადენინ-დინუკლეოტიდი (ფოსფატი) 2011

NADH და NAD+-ის შთანთქმა 2011

გაზომვის პრინციპი 2011

სარეაქციო მრუდი NAD NADH 2011

სარეაქციო მრუდი NADH NAD 2011

აურიეთ, გაზომეთ A 1, იწყება რეაქცია სტარტულიფერმენტი 0.020ml დატანის სქემა უჯრედი ბლანკი სტანდარტი სინჯი ბუფერი, მარილები 1.000ml - 0.100ml წყალი 2.000ml 1.900ml აურიეთ, გაზომეთ A 1, იწყება რეაქცია სტარტულიფერმენტი 0.020ml რეაქციის დასასრული, აიღეთ A2 ანათვალი 2011

სარეაქციო ბლანკი (სუფთა) 2011

ლამბერტ-ბერის კანონი სადაც: 2011 c - კონცენტრაციაა g/l V - საბოლოო მოცულობა ml v - სინჯის მოცულობა ml M - საკვლევი ნიმუშის მოლეკულური მასა g/mol d - ოპტიკური გზა cm ε - NADH-ის შთანთქმის კოეფიციენტი, 6.3 (l x mmol -1 x cm -1) 340nm-ზე სინჯის დიდი მოცულობის შემთხვევაში შეცვალეთ ფორმულა! 2011

გაანგარიშება ნიმუში: გლუკოზა c = F x ΔA ხაზოვანი გრაფიკი F ფაქტორით C = 0.863 x ΔA (340nm) 2011

სინჯის განზავება ან მოცულობის გაზრდა უნდა შესრულდეს ლამბერტ-ბერის კანონი Δ A<1.0 (A) სიგნალი უნდა იყოს ძლიერი, რომ გამოირიცხოს შეცდომები გაზომვისას ΔA>0.1 (A) ΔA>1 ganazaveT sinji ΔA<0.1 gazrdeT sinjis moculoba 2011

ქრომოგენური ტესტები შემდეგ ტესტებში კოფერმენტის NAD(P) ნაცვლად გამოყენებულია ქრომოგენი ყურდღება! ქრომოგენი ძალიან მგრძნობიარეა, ამიტომ რეაქცია უნდა მიმდინარეობდეს სიბნელეში! 2011

ტესტ კომპლექტის შემადგენლობა კომპლექტის შეიცავს ყველა საჭირო რეაგენტებს ფერმენტებს და კოფერმენტებს (გაწმენდილი) ბუფერულ ხსნარებს მარილებს (ხანდახან საჭიროა როგორც აქტივატორები) უმეტესობა შეიცავს საკონტროლო ნიმუშს არ არის აუცილებელი ხსნარის მომზადებისას ძლიერი შენჯღრევა, საკმარისია ფრთხილად არევა და ცოტა ხნით დაყოვნება! 2011

ხარისხის კონტროლი ყოველი ცდის გაშვებისას უნდა ტესტირდეს მინიმუმ ერთი კონტროლი ძირითადად კონტროლები თან ახლავს კომპლექტს, მხოლოდ აცეტალდეჰიდისა და ასკორბინის მჟავას და სულფიტის შემთხევევაში მათი არასტაბილურობის გამო კონტროლები ცალკეა შესაკვეთი. კონტროლის აღდგენა - 100±5% თუ აღნიშნული შედეგი არ მიიღწევა შეამოწმეთ ტესტირების პროცედურა. იკრძალება შედეგების გადათვლა კონტროლის მაჩვენებლის მაგ. 14%-იანი გადახვევისას. 2011

მოწყობილობა ფერმენტული ტესტების კომპლექტი ფოტომეტრი განცალკევებადი უჯრედები და ჩარჩო ჩასამაგრებლად შპატელები პიპეტები დისტ. წყალი მნიშვნელოვანია რეგულარულად შეამოწმოთ თქვენი პარატურის გამართული მუშაობა. 2011

სინჯების მომზადება ზოგადი მითითებანი: დაქუცმაცება და ჰომოგენიზაცია წყლით ან სხვა რამით ექსტრაქცია განზავება (შეიძლება გამორიცხოს სხვა საფეხურები) ფილტრაცია ან ცენტრიფუგირება დეპროტეინიზაცია (მაგ. HClO4) Carrez რეაქცია (რძე) ცხიმების მოცილება ნეიტრალიზაცია გაუფერულება (ინტენსიური შეფერვისთვის E1>0.5) არსებობს სხვა მეთოდებიც, მაგრამ გამოიყენეთ მხოლოდ შესაფერი ! რაც შეიძლება ნაკლები საფეხურები! 2011

გადატვირთვა და შიდა კონტროლი რეაქციის დამთავრებისას სინჯარაში ემატება კონტროლი და რეაქცია ხელახლა გაიშვება იზომება A3 და A2, ხოლო კონტროლი უნდა აღდგეს (g/l±5%). შიდა კონტროლი საკონტროლი სინჯი ტესტირდება იგივე სინჯარაში, რომელშიც საკვლევი. გამოიყვანება და გადამოწმდება OD-ს აღდგენა. ეს ორი მეთოდი განსხვავდება არსებული ტრადიციული კონტროლის მეთოდისგან კონტროლი ერევა იმ ცალკეულ სინჯებს, რომელიც საეჭვოა ან სადაც არსებობს ჯვარედინი რეაქცია. ეს იძლევა ინჰიბიტორების არსებობის დადგენის საშუალებას ცალკეულ სინჯებში. 2011

მოცულობის ნახევარში შიდა კონტროლი აღდგენა მოცულობის ნახევარში შიდა კონტროლი აღდგენა უჯრაში ბლანკი სტანდარტი სინჯი სინჯი +IC ბუფერი, მარილები 1.000ml 1,000ml - 0,100ml 0.050ml 0.100ml წყალი 2.000ml 1.900ml არევა, A1-ის განსაზღვრა, შემდეგ იწყება რეაქცია სასტარტო ფერმენტი 0.020ml რეაქცია სრულდება, A2-ის განსაზღვრა გაანგარიშება ვარგისიანია g/l-ის შემთხვევაშიც! 2011

ლიმონ მჟავა 2011

დატანის სქემა 2011 უჯრაში ბლანკი სტანდარტი სინჯი სინჯი (მგრძნობიარე) სინჯი (მგრძნობიარე) ხსნარი 1 (ბუფერი) 1.000ml 1,000ml - 0,200ml 2.000ml კონტროლი 0.200ml წყალი 1.800ml არევა, A1-ის განსაზღვრა 5წთ-ის შემდეგ, იწყება რეაქცია ხსნარი 2, (ფერმენტი) 0.020ml არევა, A2-ის განსაზღვრა 5წთ-ის შემდეგ 2011

განზავების სქემა < 0.4g/l - 1 0.4-4.0g/l 1+9 10 4.0-40g/l 1+99 100 მაგ. ლიმონ მჟავას კონც. განზავება წყლით განზავების ფაქტორი F < 0.4g/l - 1 0.4-4.0g/l 1+9 10 4.0-40g/l 1+99 100 > 40g/l 1+999 1000 გაზომვის დიაპაზონი 0.1– 1.0 შორის = Factor 10 განზავების ბიჯი 10 2011

გლუკოზა/ფრუქტოზა 2011

დატანის სქემა 2011 უჯრაში ბლანკი სინჯი ხსნარი 1 ბიდისტ. წყალი 1.000ml - 2.000ml 1,000ml 0.100ml 1.900ml აურიეთ, 3წთ-ში გაზომეთ A1, დაიწყეთ რეაქცია სუსპენზია 2 0.020ml აურიეთ, 10-15წთ-ში გაზომეთ A2, თუ რეაქცია ამ დროში არ შეწყდა, მონაცემების აღება გააგრძელეთ 2-2წთ-იანი ინტერვალებით მანამ, სანამ მაჩვენებლები არ გაიზრდება. სუსპენზია 3 აურიეთ, 10-15წთ-ში გაზომეთ A3. 2011

გლუკოზა/ფრუქტოზას რეაქციის გრაფიკი 2011

განზავების სქემა წინა ნიმუშის მსგავსია პირველი სუსპენზიის ხსნარის დამატება განაპირობებს სინჯში არსებული გლუკოზისა და ფრუქტოზის ფოსფორილირებას (აიღება A1 მაჩვენებელი) მეორე სუსპენზიის ხსნარის (ჰექსოკინაზა) დამატების შემდეგ ისაზღვრება გლუკოზის რაოდენობა - (აიღება A2 მაჩვენებელი) მესამე სუსპენზიის ხსნარის (ფოსფოგლუკოზ იზომერაზა) დამატების შემდეგ Fructose-6-P გარდაიქმნება Glucose-6-P-ად და ამ სახით ისაზღვრება ფრუქტოზის რაოდენობა სინჯში (აიღება A3 მაჩვენებელი) 2011

ზოგადი პროცედურა რეაქტივების წარმოება R-Biopharm წარმოადგენს Roche-ს ფერმენტული ტესტების დისტრიობუტორს უკვე 10 წელია. მთელი ამ ხნის განმავლობაში არ ყოფილა შემთხვევა, რომ ხარისხის გამო ტესტების პარტია მოხსნილიყო გაყიდვიდან. ამის მიზეზი შესაძლებელია იყოს ბოთლის მექანიკური დაზიანება, რაც ადვილი შესამჩნევია თვალით, ან იშვიათად როცა რეაქტივი მაგ. დაიჟანგა. 2. ტრანსპორტირება და შენახვა ტესტები შესაძლებელია გზაში იყოს 3 კვირა ოთახის ტემპერატურაზე. (თითოეული პარტია გადის ავარიულ შემოწმებას) ინახება 2-80C. განზავებული ბიდისტ. წყლით ინახება 2-80C. 3. ხარისხის კონტროლი კონტროლის აღდგენა უნდა მოხდეს ±5%. წინააღმდეგ შემთხვევაში შეამოწმეთ აპარატურა და ცდის მსვლელობა. 4. სინჯის ტიპი, ცდის მომზადება და სამუშაო 2011

სინჯის მომზადება ტესტების უმრავლესობისთვის ტესტირების პროცედურა ძალიან მარტივია, მაგრამ გარკვეულ სირთულეს წარმოადგენს სინჯების სწორი მომზადება. სინჯთა მომზადების მეთოდები ძალიან სპეციფიურია ინდუსტრიული სექტორისთვის (რძე, ღვინო, ხილის წვენები, ხორცი, კვერცხი და ა.შ.). აღნიშნული მეთოდიკები მუშავდება და გროვდება თვით მწარმოებლებისა და ლაბორატორიების მიერ და შემდეგ პოულობს საერთაშორისო აღიარებას. 2011

ტესტირების პროცედურა 1. ინახება 2-80C 2. მნიშვნელოვანი ფაქტორია წყლის ხარისხი 3. ტესტირების წინ რეაგენტები დააყოვნეთ ოთახის ტემპარეტურაზე. 4. სინჯთა განზავებისას ზუსტად მისდიეთ ინსტრუქციებს. 5. დაიცავით დატანის პრინციპი (ზევიდან ქვევით) 5. გამოიყენეთ საკონტროლო რეაგენტები (სტანდარტები) 6. ზუსტად დაიცავით იnკუბაციის დროითი ინტერვალები. 7. თუ შესაძლებელია გადატვირთეთ ანალიზი. 2011

OD-ს შემოწმება, თუ NAD+ NAD H ნორმალური სინჯი <0.3 >0.1 OK (<2.0) შეფერილი სინჯი >0.3 <1.0 <2.0 2011

OD-ს შემოწმება, თუ NADH NAD+ A11.6, რადგან NADH კონცენტრაცია სტაბილურია კომპლექტისა და სერიის მიუხედავად. A1 ΔA A2 ნორმალური სინჯი 1.6 >0.1 >0.6 <1.6 შეფერილი სინჯი >1.6 <2.2 <1.0 <2.0 2011

ყველაზე ხშირად დაშვებადი შეცდომები: ტესტ კომპლექტთან და მის შენახვასთან დაკავშირებული მანიპულაციები (მაგ. განზავების შეცდომა, წყლის ხარისხი და ა.შ.) საკონტროლო ხსნარის დამზადება (მაგ. თუ ხელით მზადდება ხსნარები მag.- pH, სისუფთავე და ა.შ.) გაანგარიშების შეცდომები სპექტროფოტომეტრის გაუმართაობა პიპეტების სიზუსტე საკონტროლო ხსნარების აღდგენა = 100±5% 2011

გმადლობთ ყურადღებისთვის! 2011