Απομόνωση και ταυτοποίηση Ανοσοσφαιρινών

Slides:



Advertisements
Παρόμοιες παρουσιάσεις
ΑΝΟΣΟΒΙΟΛΟΓΙΚΗ ΑΠΟΚΡΙΣΗ
Advertisements

ΕΠΙΔΡΑΣΗ ΘΕΡΜΟΚΡΑΣΙΑΣ ΣΤΗ ΣΤΑΘΕΡΑ ΤΑΧΥΤΗΤΑΣ ΑΝΤΙΔΡΑΣΗΣ
ΧΗΜΙΚΗ ΙΣΟΡΡΟΠΙΑ, ΟΞΕΑ, ΒΑΣΕΙΣ, pH. ΟΓΚΟΜΕΤΡΙΚΗ ΑΝΑΛΥΣΗ ΟΞΙΚΟΥ ΟΞΕΟΣ
Περί ρυθμιστικών διαλυμάτων
Ιονική ισχύς Η ιονική ισχύς, Ι, ενός διαλύματος δίνεται σαν το ημιάθροισμα του γινομένου της συγκέντρωσης καθενός συστατικού του διαλύματος πολλαπλασιασμένης.
ΤΥΠΟΙ ΑΝΟΣΙΑΣ – ΕΝΕΡΓΗΤΙΚΗ & ΠΑΘΗΤΙΚΗ
μέθοδοι προσδιορισμού
ΜΗΧΑΝΙΣΜΟΙ ΕΙΔΙΚΗΣ ΑΜΥΝΑΣ - ΑΝΟΣΙΑ
Ηλεκτροφόρηση.
ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΕΜΒΟΛΙΩΝ Τι είναι; Τρόπος πρόληψης Τρόπος πρόληψης μιας ασθένειας Τι περιέχει Νεκρούς Νεκρούς μικροοργανισμούς Ανενεργούς Ανενεργούς μικροοργανισμούς.
Μηχανισμοί ειδικής άμυνας Ανοσία
Απομόνωση νουκλεϊκών οξέων
Χρώση Μπλέ του μεθυλενίου- Κινητική
Μελέτη των λειτουργιών του πεπτικού συστήματος
Αγγελική Φωτεινοπούλου
ΠΡΑΚΤΙΚΗ ΑΣΚΗΣΗ ΕΡΓΑΣΤΗΡΙΟ : ΧΗΜΕΙΑΣ ΚΑΙ ΑΝΑΛΥΣΗΣ ΤΡΟΦΙΜΩΝ ΦΟΙΤΗΤΡΙΑ : ΣΑΛΙΑΡΗ ΔΗΜΗΤΡΑ, A.M :16677 ΥΠΕΥΘΥΝΗ ΚΑΘΗΓΗΤΡΙΑ : ΕΥΑΓΓΕΛΙΟΥ ΒΑΣΙΛΙΚΗ ΘΕΜΑ : ΣΥΓΚΡΑΤΗΣΗ.
ΑΝΟΣΟΑΙΜΑΤΟΛΟΓΙΑ ΚΑΙ ΟΜΑΔΕΣ ΑΙΜΑΤΟΣ
ΕΥΡΙΔΙΚΗ ΗΛΙΑ 8ο ΕΞΑΜΗΝΟ Α.Μ : Z15880 ΑΦΠ ΚΑΙ ΓΜ ΠΡΑΚΤΙΚΗ ΣΤΟ ΕΡΓΑΣΤΗΡΙΟ ΕΔΑΦΟΛΟΓΙΑΣ ΚΑΙ ΓΕΩΡΓΙΚΗΣ ΧΗΜΕΙΑΣ- Γ.Π.Α 9 ΙΟΥΛΙΟΥ-31 ΑΥΓΟΥΣΤΟΥ 2012.
Συγκριτική Αιματολογία Σκοπός : η μελέτη και η σύγκριση αιματολογικών παραμέτρων σε διάφορα είδη ζώων Ράνια Τσιτσιλώνη Σύλβια Παπαβασιλείου.
Παρουσίαση Πρακτικής Άσκησης για το πρόγραμμα του ΕΣΠΑ Εργαστήριο: Μοριακής Βιολογίας Υπέυθυνος: Ρήγας Σταμάτης Ασκούμενοι: Πατριανάκος Στέφανος, AM:
Ασκήσεις Ανοσολογίας Π.Παπαζαφείρη Α. Μαρμάρη ΔΟΚΙΜΑΣΙΑ ΚΥΤΤΑΡΟΤΟΞΙΚΟΤΗΤΑΣ Εισαγωγή MTT TNFα Πειραματική διαδικασία Υπολογισμοί.
Μελέτη Πρωτεινών Τρούγκος Κ. Αν. Καθ. Βιοχημείας Εργ. Βιολογικής Χημείας Ιατρικής ΕΚΠΑ.
΄Ασκηση 10  Έμμορφα συστατικά του αίματος Ερυθρά αιμοσφαίρια Λευκά αιμοσφαίρια Λευκοκυτταρικός τύπος  Αιμόλυση των ερυθροκυττάρων  Αιματολογικές παράμετροι.
ΕΙΔΙΚΗ ΑΝΟΣΙΑ. Ειδική ή επίκτητη ανοσία είναι ένα σύνολο μηχανισμών με τους οποίους επιτυγχάνεται σημαντική ελάττωση της ευαισθησίας του οργανισμού σε.
Στοιχεία από τη θεωρία απαραίτητα για την επίλυση ασκήσεων
∆είκτες Πρωτολυτικοί ή ηλεκτρολυτικοί δείκτες είναι ουσίες των οποίων το χρώμα αλλάζει ανάλογα με το pH του διαλύματος στο οποίο προστίθενται. Οι δείκτες.
Διαδικασία απομόνωσης γενωμικού DNA από βιολογικό υλικό
Aπομόνωση DNA από επιθηλιακά κύτταρα παρειάς
Άσκηση 4 Πηγή ενέργειας για τη μυϊκή σύσπαση.
Απομόνωση και Tαυτοποίηση Κυττάρων του Ανοσοποιητικού Συστήματος
ΟΙΝΟΛΟΓΙΑ ΕΡΓΑΣΤΗΡΙΟ 3ο.
Μελέτη του πεπτικού συστήματος
Ασκήσεις Ανοσολογίας Π. Παπαζαφείρη. Α. Φωτενοπούλου. Ουρ
Μετουσίωση Πρωτεϊνών Επιμέλεια: Ηλίας Μαυροματίδης, ΕΚΦΕ Νέας Σμύρνης
Ασκήσεις Έμμορφα συστατικά του αίματος
Απομόνωση και ταυτοποίηση
Απομόνωση και ταυτοποίηση
Επίδραση ορμονών στο γλυκογόνο του ήπατος και τη γλυκόζη του αίματος
Μελέτη των λειτουργιών του πεπτικού συστήματος
Mικτή Λεμφοκυτταρική Αντίδραση (Mixed Lymphocyte Reaction; MLR)
Μελέτη των λειτουργιών του πεπτικού συστήματος
Επίδραση της στέρησης τροφής στο μεταβολισμό του ήπατος
Απομόνωση και ταυτοποίηση
Συγκριτική Φυσιολογία Ζώων
Απομόνωση και ταυτοποίηση A. Φωτεινοπούλου, Α. Μαρμάρη
Εργαστήριο Συγκριτική Ανοσολογία ΜΕΛΕΤΗ ΤΩΝ ΔΡΑΣΤΙΚΩΝ ΛΕΙΤΟΥΡΓΙΩΝ
Αγγελική Φωτεινοπούλου
Άσκηση 11 Κυτταρομετρία Ροής
Απομόνωση και Tαυτοποίηση Ανοσοποιητικού Συστήματος
Mικτή Λεμφοκυτταρική Αντίδραση (Mixed Lymphocyte Reaction; MLR)
Παραγωγή γαλακτικού οξέος από Lactobacillus delbrueckii
ΑΣΚΗΣΗ 9 ΑΙΜΟΣΥΓΚΟΛΛΗΣΗ Πατήστε Esc να κλείσει η προβολή.
Απομόνωση και ταυτοποίηση Ρ. Τσιτσιλώνη, Π. Παπαζαφείρη
Απομόνωση και Tαυτοποίηση Ανοσοποιητικού Συστήματος
Απομόνωση και Tαυτοποίηση Κυττάρων του Ανοσοποιητικού Συστήματος
Άσκηση 4 Πηγή ενέργειας για τη μυϊκή σύσπαση.
Απομόνωση και ταυτοποίηση Ανοσοσφαιρινών
Αντιδράσεις κατακρήμνισης Ανοσοδιάχυση (άσκηση 5) Ag: ορός ανθρώπου
Mικτή Λεμφοκυτταρική Αντίδραση (Mixed Lymphocyte Reaction; MLR)
ΠΑΡΑΣΚΕΥΗ ΠΟΥΛΟΥ, βιολόγοε
Aσκηση 2 Απομόνωση DNA.
Ασκήσεις Έμμορφα συστατικά του αίματος
4. Πολαρογραφία-2 ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΙΩΑΝΝΙΝΩΝ ΤΜΗΜΑ ΧΗΜΕΙΑΣ ΕΡΓΑΣΤΗΡΙΟ ΑΝΑΛΥΤΙΚΗΣ ΧΗΜΕΙΑΣ ΑΝΑΛΥΤΙΚΗ ΧΗΜΕΙΑ ΙΙΙ 4. Πολαρογραφία-2.
Μελέτη των οργάνων και κυττάρων του Α.Σ.
Mικτή Λεμφοκυτταρική Αντίδραση (Mixed Lymphocyte Reaction; MLR)
Κούρτη Μαρία Βιολόγος, Msc, PhD 18 Ιανουαρίου 2018
Π.Παπαζαφείρη , Α. Φωτεινοπούλου
Ασκήσεις Έμμορφα συστατικά του αίματος
Άσκηση 4 Πηγή ενέργειας για τη μυϊκή σύσπαση.
Επίδραση ορμονών στο γλυκογόνο του ήπατος και τη γλυκόζη του αίματος
Μεταγράφημα παρουσίασης:

Απομόνωση και ταυτοποίηση Ανοσοσφαιρινών Άσκηση 2 Απομόνωση και ταυτοποίηση Ανοσοσφαιρινών Ρ. Τσιτσιλώνη Π. Παπαζαφείρη Α. Φωτεινοπούλου Σ. Παπαβασιλείου

Απομόνωση ανοσοσφαιρινών Σκοπός άσκησης: απομόνωση των αντισωμάτων τάξης G από το σύνολο των πρωτεϊνών ορού ή πλάσματος με μεθόδους υγρής χρωματογραφίας μαζική απομόνωση χρωματογραφία σε στήλη

Ανοσοσφαιρίνες/αντισώματα Παράγονται σε απόκριση εισβολής ανοσογόνου μεμβρανοσυνδεόμενες (επιφάνεια των Β λεμφοκυττάρων) εκκριτικά προϊόντα των πλασματοκυττάρων: δραστικά μόρια χυμικής ανοσίας κυκλοφορούν στο πλάσμα και είναι υπεύθυνα για τη δέσμευση και την εξουδετέρωση του αντιγόνου έναντι του οποίου έχουν παραχθεί Εκτελεστικό Β-κύτταρο (πλασματοκύτταρο) Β-κύτταρο μνήμης Β κύτταρο+ανοσογόνο

Πρωτεΐνες πλάσματος αντισώματα

Δομή ανοσοσφαιρινών Fab κ, λ γ,μ,α,δ,ε

Πρωτογενής και δευτερογενής απάντηση χρόνος εμφάνισης διάρκεια τίτλος τάξη Ig συγγένεια

Παραγωγή και καθαρισμός αντισωμάτων

Πρωτεϊνικά φορτία και pH pH <pI ---> + φορτίο pH >pI ---> - φορτίο

Ιοντοανταλλάκτες Ανιονικός ανταλλάκτης Κατιονικός ανταλλάκτης

Ιοντοανταλλάκτες Έκλουση με: -Αλλαγή pH -Aλλαγή ιονικής ισχύος

Διαχωρισμός σε κολώνα DEAE κυτταρίνης Δείγμα Διαχωρισμός πρωτεϊνών και συλλογή κλασμάτων Φωτομέτρηση κλασμάτων

Αυτοματοποιημένη συλλογή κλασμάτων Ρυθμιστικό δμα Κολώνα ανταλλάκτη Φωτόμετρο & καταγραφικό Συλλέκτης κλασμάτων

Μαζική απομόνωση ανοσοσφαιρινών Σε κωνική που περιέχει DEAE κυτταρίνη προσθέτουμε 200 μl ορό και αναδεύουμε ΗΠΙΑ Επώαση: 45 min, θερμοκρασία δωματίου / ανάδευση ανά 15 λεπτά Αδειάζουμε στο Τ Φυγοκέντρηση: 1000 στροφές, 5 λεπτά Συλλέγουμε το υπερκείμενο = ΥΠΕΡΚΕΙΜΕΝΟ Α (ανοσοσφαιρίνες) Στο ίζημα προσθέτουμε: 5 ml φωσφορικό ρυθμιστικό διάλυμα/1 Μ KCl Επώαση: 15 min, θερμοκρασία δωματίου Συλλέγουμε το υπερκείμενο = ΥΠΕΡΚΕΙΜΕΝΟ Β (υπόλοιπες πρωτεΐνες) Φωτομέτρηση Α και Β: στα 280 nm στα 260 nm

Χρωματογραφία σε στήλη Αφήνουμε να περάσει ρυθμιστικό διάλυμα μέχρι να σχηματιστεί μηνίσκος. Κλείνουμε τη στρόφιγγα ροής και επιστιβάζουμε ΠΡΟΣΕΚΤΙΚΑ 200 μl ορό Ανοίγουμε τη στρόφιγγα ροής Προσθέτουμε συνεχώς ρυθμιστικό διάλυμα και συλλέγουμε 6 κλάσματα των 3 ml ανά σωληνάριο (μέχρι τη μαύρη γραμμή) Αφήνουμε να περάσουν άλλα 10 ml ρυθμιστικό (τα πετάμε στο δοχείο) Αρχίζουμε να προσθέτουμε φωσφορικό ρυθμιστικό διάλυμα/1 Μ KCl Συλλέγουμε 6 κλάσματα των 3 ml (Νο 7 - 12) Ξεπλένουμε με τουλάχιστον 10 ml από το αρχικό ρυθμιστικό (στο δοχείο) Φωτομέτρηση όλων των κλασμάτων: στα 280 nm και στα 260 nm

Ποσοτικός προσδιορισμός πρωτεϊνών Προσθέτουμε 4ml διουρίας Αναδεύουμε Επώαση για 30’, RT Φωτομέτρηση στα 550nm Αριθμός σωληναρίου Πρότυπο διάλυμα αλβουμίνης (ml) Ορός (ml) Νερό 1 (τυφλό) - 1,0 2 0,1 0,9 3 0,2 0,8 4 0,5 5 6 7 (άγνωστο) 0,05 0,95 8 (άγνωστο) 0,10 Φυσιολογία Ζώων

Αποτελέσματα-Υπολογισμοί Συγκέντρωση πρωτεϊνών (mg/ml) C (mg/ml) = 1.55 x OD280nm – 0.77 x OD260 nm

Αποτελέσματα-Υπολογισμοί Μαζική απομόνωση : C πρωτεΐνης mg/ml για το τμήμα και την ομάδα σας mg/κλάσμα για Α και Β για το τμήμα και την ομάδα σας Χρωματογραφία σε στήλη : Πίνακας (mg/ml και mg/κλάσμα) Γραφική παράσταση (όπου άξονας χ: αριθμός κλάσματος, άξονας ψ: mg/ml ή mg/κλάσμα) Ποσοτικός προσδιορισμός (αναλυτικά): συνολική πρωτεΐνη ορού (mg/ml) % ανάκτηση ανοσοσφαιρινών (IgG) και % ανάκτηση ολικών πρωτεϊνών - μαζική (τμήμα και ομάδα) - στήλη (ομάδα)