Metode electrokinetice: electroforeza, electrofocalizarea, imunoelectroforeza

I. Electroforeza şi aplicaţiile sale pentru diagnostic 11/23/2018

I.1.Principiul fizic al electroforezei Metoda de separare prin migrarea particulelor încărcate electric în câmp electric + - Electrozi - + + - + + - - + + + - - - 11/23/2018

Forţe care acţionează asupra particulei în câmp electric: pH Ze + Fe Ff _ Fe = Ff ZeE= 6rv

Fe = ZeE Ff = 6rv Explicarea termenilor: Fe = forţa electrică Fη = forţa de frecare Ze = sarcina electrică a particulei E = intensitea câmpului electric η = viscositea mediului r = raza particulei v = viteza particulei Fe = ZeE Ff = 6rv

FACTORI DE DEPENDENŢĂ AI VITEZEI PARTICULEI : sarcina electrică (pH-ul mediului) raza particulei (deci dimensiunile) viscozitatea mediului intensitatea câmpului electric

11/23/2018

I.2.Dispozitivul 11/23/2018

Schema electroforezei pipetă deplasare tampon l Electro-fore-grama: Schema electroforezei

11/23/2018

II.3. Electroforeza proteinelor serice 11/23/2018

Electroforeza = migrare diferenţială în câmp electric, deci posibilitate de separare a: AMINOACIZILOR PEPTIDELOR PROTEINELOR ACIZILOR NUCLEICI

Electroforeza proteinelor serice separarea proteinelor în cinci fracţiuni. 11/23/2018

Electroforegrama normală 11/23/2018

Benzile proteice separate pot fi cuantificate prin densitometrie sau fotocolorimetrie

Electrophoregrama normală - valori: Albumine 54-66% Alfa-1 globuline 2-4% Alfa-2 globuline 6-12% Beta- globuline 8-14% Gamma globuline 13-22% 11/23/2018

Aplicaţie: electroforegrama patologică (exemple): 11/23/2018

11/23/2018

Normal Boala hepatică: pacient în vârstă de 46 ani, diagnosticat cu ciroză hepatică, secundară abuzului cronic de alcool. Decedează 5 luni după acest rezultat.

Normal Pattern inflamator acut: gamma diminuate, alfa2 mare

Electroforegramă urinară Electroforeza de urină este tehnica de electie pentru identificarea de proteinei Bence-Jones, la pacienţii cu mielom multiplu. Acesta trebuie să fie întotdeauna efectuata în lcomparatie cu electroforeza serica, astfel încât rezultatele sa poata fi comparate direct.

II. Alte tehnici electrokinetice: Focalizarea izoelectrică Imunoelectroforeza 11/23/2018

Normal Gammapatie policlonală Secundar unor boli cronice. Ex.: secundar sarcoidozei

Focalizarea izoelectrică: electroforeză în gradient de pH, migrarea şi separarea depinde doar de pI (punctul izoelelctric) Principiul fizic: Dacă un amestec de proteine este supus unei electroforeze în gradient de pH fiecare proteină va migra până în locul unde pH-ul mediului corespunde pH-ului său izoelectric (când proteina va avea sarcină globală nulă). 11/23/2018

11/23/2018

Imunoelectroforeza Principiul fizic: 2 etape: 1. electroforeza 2. imunodifuzia. 11/23/2018

= ELECTROFOREZA + IMUNODIFUZIE = separarea unui amestec de antigeni elctroforeza în gel + amestec de anticorpi : Reacţie Ag –Ac +imunodifuzie

Imunoelectroforeza (rezultate) Grosimea şi poziţia arcurilor de precipitare. Aplicaţie frecventă: gamapatie monoclonală. 11/23/2018