BACILII ACIDO – ALCOOLO – REZISTENTI (BAAR) Genul Mycobacterium LP 4

GENERALITATI au tendinta de a forma ramificatii in cursul multiplicarii nu produc micelii adevarate formele ramificate se fragmenteaza foarte usor in elemente bacilare si cocoide nu formeaza endospori aerobi sau microaerofili ataca zaharurile prin oxidare

GENERALITATI peretele celular: continut bogat in lipide (acizi micolici) si ceruri, conferind anumite proprietati particulare: acido – alcoolo – rezistenta rezistenta la tratamentul cu alcaline rezistenta la o serie de antibiotice si chimioterapice rezistenta intrafagocitara capacitatea de a determina aparitia inflamatiilor granulomatoase

GENERALITATI larg raspandite in mediul extern 90 specii si subspecii ~ ½ din ele prezinta interes medical: fie prin contaminarea unor produse patologice fie prin diferitele infectii produse fie prin infectiile aparute pe fondul imunodeficientei dobandite

GENERALITATI 1/3 din populatia globului este infectata cu M. tuberculosis in fiecare an apar 8 – 10 milioane cazuri noi de TBC 2 – 3 milioane de decese/an – in principal, in categoria de varsta 15 – 59 ani.

Localizari ale infectiei TBC: Infectii pulmonare Boala diseminata Limfadenite Meningite Pericardite Bursite Artrite Osteomielite Nefrite Infectii intestinale

Localizari ale infectiei TBC: Endometrite Epididimite Leziuni cutanate Infectii ale plagilor Abcese in tesuturi moi Keratite Endoftalmite Endocardite pe valve protezate

CLASIFICARE Micobacterii patogene: M. leprae – afecteaza exclusiv omul Micobacterii parazite agenti ai tuberculozei: M. tuberculosis M. africanum infecteaza omul si numai ocazional mamifere din ambientul sau (primate, caini, pisici)

CLASIFICARE Micobacterii conditionat – patogene: unele, gazduite natural de pasari si mamifere – complexul M. avium (M. avium, M. intracellulare), M. simiae, M. asiaticum, M. xenopi altele – la animale cu sange rece (M. marinum) altele – fara habitat bine precizat (M. kansasii) Infectiile umane sunt favorizate de: contaminari intempestive sau de deficiente ale apararii antiinfectioase.

CLASIFICARE Micobacterii saprofite din: sol, apa, microbiota genitala sau fecala, isi manifesta doar accidental potentialul redus de patogenitate (ex.: M. smegmatis). uzual, simpli contaminanti ai unor prelevate patologice (secretii respiratorii, spalatura oro – faringiana, gastrica, secretii vaginale, urina, fecale). Ex.: M. gordonae, M. gastri, complexul M. terrae.

Dg. infectiei TBC Programul National de Control al Tuberculozei ierarhizeaza laboratoarele implicate in Dg. TBC pe 3 nivele: Nivelul I: laboratoarele dispensarelor teritoriale de pneumoftiziologie – efectueaza microscopia pentru depistarea BAAR si trimit prelevatele patologice laboratoarelor de nivel II pentru efectuarea culturilor.

Dg. infectiei TBC Nivelul II: laboratoarele dispensarelor / stationarelor judetene de pneumoftiziologie si ale marilor unitati cu paturi pentru pacientii cu TBC: identificarea primara a micobacteriilor cu sau fara testarea sensibilitatii la antibiotice Nivelul III: laboratoare de referinta: identificari definitive, monitorizeaza activitatea laboratoarelor de nivel I si II, supravegheaza dinamica chimiorezistentei, organizeaza colectia nationala de tulpini micobacteriene.

Dg. infectiei TBC Algoritmul de identificare 1. Examenul microscopic direct din produsul patologic: Coloratia Ziehl – Neelsen Coloratia cu auramina – rhodamina (coloratie fluorescenta) Bacili fini, 0,2 – 0,6 μm., de culoare rosie, uneori ramificati, cu aspect de litere unghiulare (M, N, V, W) In culturile tulpinilor virulente ale bacililor TBC (M. tuberculosis, M. africanum, M. bovis) se pot dispune in paralel, formand corzi flexuoase – se datoreza unui sulfolipid de perete – cord factor – asociat virulentei

Dg. infectiei TBC Algoritmul de identificare Se examineaza minimum 100 de campuri microscopice: Intensitatea pozitivitatii frotiului se interpreteaza astfel: 1 – 10 BAAR/100 campuri microscopice – se raporteaza numarul de BAAR 10 – 50 BAAR/100 campuri microscopice – (+) 50 – 100 BAAR/100 campuri microscopice – (++) > 100 BAAR/100 campuri microscopice – (+++)

Dg. infectiei TBC Algoritmul de identificare 2. Cultura microbiana pentru BK – se efectueaza pe: mediul Löwenstein – Jensen – un mediu pe baza de ou, dupa o prealabila decontaminare a prelevatelor patologice cu sol. NaOH 2 % (este acceptata o frecventa a contaminarii de 2 – 5 %) medii lichide: bulion Middlebrook (bulion 7H9) temperatura de incubare: 37°C

Dg. infectiei TBC Algoritmul de identificare viteza de crestere (ritmul de multiplicare) – 12 – 16 saptamani mycobacterii cu ritm rapid de multiplicare (3 – 7 zile) ex.: M. fortuitum, M. chelonae, M. phlei, M. smegmatis mycobacterii cu ritm lent de multiplicare (2 sau mai multe saptamani) ex: M. tuberculosis – 12 – 28 zile (tulpinile cu rezistenta la Izoniazida: > / = 25 zile) M. africanum: > / = 25 zile M. bovis: 25 – 90 zile complex M. avium: 10 – 21 zile

Dg. infectiei TBC Algoritmul de identificare morfologia coloniilor: colonii de tip R, rugoase, neregulate, conopidiforme, greu de emulsionat, grunjoase – M. tuberculosis, M. africanum – crestere EUGONICA Tulpinile de M. tuberculosis rezistente la Izoniazida pot forma colonii S. colonii de tip S, rotunde, umede, usor de emulsionat – M. bovis alte micobacterii conditionat – patogene, precum si micobacteriile saprofite formeaza frecvent colonii de tip S, uneori R sau cu caractere intermediare.

Dg. infectiei TBC Algoritmul de identificare pigmentarea si fotoreactivitatea clasifica bacteriile in: scotocromogene, cu pigment galben sau portocaliu, dezvoltat spontan in cultura incubata la intuneric ex.: M. gordonae, M. flavescens, M. scrofulaceum, M. szulgai fotocromogene, cu pigment portocaliu care apare dupa expunerea culturii la lumina ex.: M. asiaticum, M. kansasii, M. marinum, M. simiae necromogene, cu colonii albe sau alb – galbui ori crem, care nu dezvolta pigment nici dupa expunere la lumina ex.: M. tuberculosis, M. africanum, M. bovis, complex M. avium, M. ulcerans, M. xenopi etc.

Dg. infectiei TBC Algoritmul de identificare definitiva Specii necromogene: catalaza, semicantitativ si rezistenta enzimei la temperatura (68°C) producerea de niacina reducerea nitratului hidroliza Tween 80 toleranta la NaCl 5% ureaza sensibilitatea la ac. Thiofen – 2 - carboxilic arilsulfataza

Dg. infectiei TBC Algoritmul de identificare

Dg. infectiei TBC Algoritmul de identificare

Dg. infectiei TBC Algoritmul de identificare specii scotocromogene: reducerea nitratului toleranta la NaCl 5% hidroliza Tween 80 specii cu ritm de crestere rapid: arilsulfataza

Dg. infectiei TBC Teste rapide Reactia de amplificare genica – PCR – identificarea in mai putin de 24h.: secventei de insertie IS 6110 altor secvente de insertie genelor care codifica ARN 16S specifice pentru complexul M. tuberculosis Sonde ADN – identifica prin hibridare secvente nucleotidice specifice unor mycobacterii Spoligotiparea – identifica profilul secventelor spacer caracteristice complexului M. tuberculosis Analiza polimorfismului fragmentelor de restrictie (RFLP) Identificarea profilului acizilor micolici – HPLC Detectia respirometrica BACTEC - necesita 7 – 25 zile. MB/BACT – Metoda colorimetrica

ANTIBIOGRAMA se compara cresterea bacteriana de pe tuburile test, continand medicamente cu cea de pe tuburile martor, dupa insamantarea unui esantion reprezentativ din populatia bacilara de testat inoculul bacterian se prepara din cultura mediul de cultura: Löwenstein - Jensen

ANTIBIOGRAMA METODE metoda proportiilor (Canetti) – masoara proportia de bacili rezistenti din totalul bacililor cultivati, la o concentratie data de antibiotic metoda concentratiilor absolute (Meissner) – se ia in considerare cea mai mica de concentratie de substanta antituberculoasa care inhiba cresterea sau permite o crestere a mai putin de 1% inoculul standardizat

ANTIBIOGRAMA METODE metoda raportului rezistentei (Mitchinson) – se compara pentru fiecare tulpina si substanta antituberculoasa CMI cu CMI a tulpinii H37Rv metoda BACTEC - radiometrica

ANTIBIOGRAMA Antibiotice anti – TBC – schema de tratament TSS (tratament strict supravegheat): Hidrazida acidului izonicotinic Rifampicina Streptomicina Pirazinamida Etambutol PAS Kanamicina Amikacina Fluoroquinolone Cicloserina