Δοκιμασίες ελέγχου της ευαισθησίας: Μέθοδος διάχυσης δίσκων αντιβιοτικών σε άγαρ

Bauer A.W., Kirby W.M.M., Sherris J.C. and Turck M. 1966. Antibiotic susceptibility testing by a standardized single disk method. Am. J. Clin. Pathol. 45:493-496

Αρχή μεθόδου διάχυσης αντιβιοτικού στο άγαρ Αρχή μεθόδου διάχυσης αντιβιοτικού στο άγαρ. Η συγκέντρωση του αντιβιοτικού μειώνεται όσο η απόσταση από το δισκίο αυξάνεται

Ερμηνεία βάσει πινάκων CLSI MIC Διάμετρος Ζώνης ευαίσθητο Μετρίως ευαίσθητο ανθεκτικό

Από τη θεωρία στην πράξη Μέθοδος Kirby-Bauer Από τη θεωρία στην πράξη

Καθοριστικός παράγων το πάχος του υλικού 4 mm Μεγάλες ζώνες Ζώνη αναστολής επιφάνεια 4 mm βάση Μεγάλες ζώνες <4 mm Μικρές ζώνες >4 mm

Προσοχή πάντα στην ημερομηνία λήξεως. Δίσκοι αντιβιοτικών διατηρούνται σε θερμοκρασία -14 έως 8 ΟC τα β-λακταμικά καταψύχονται 1-2 ώρες πριν χρησιμοποιηθούν φέρονται απαραίτητα σε θερμοκρασία δωματίου Προσοχή πάντα στην ημερομηνία λήξεως. αφυγραντικό

Διαδικασία Kirby-Bauer Παρασκευή μικροβιακού εναιωρήματος (inoculum) Ενοφθαλμισμός θρεπτικού υλικού Τοποθέτηση αντιβιοτικών Επώαση Ανάγνωση αποτελεσμάτων

Άμεσο εναιώρημα αποικίας Εναιώρημα λογαριθμικής φάσης ανάπτυξης Παρασκευή μικροβιακού εναιωρήματος (inoculum) 4-5 αποικίες, μεμονωμένες, παρόμοιας μορφολογίας Άμεσο εναιώρημα αποικίας 24ώρο καλλιέργημα από μη εκλεκτικό υλικό Εναιώρημα λογαριθμικής φάσης ανάπτυξης 1-2 ημερών από εκλεκτικό ή μη υλικό

Παρασκευή μικροβιακού εναιωρήματος (inoculum) Θολερότητα 0.5 κλίμακας McFarland ( 1-2 Χ 108 CFU/ml E.coli ATCC® 25922 ) ή με φωτόμετρο 0.5McF E.coli ATCC 25922

Inoculum size effect Inoculum 0.5 McF Αραιό inoculum

Ενοφθαλμισμός υλικού

Τοποθέτηση αντιβιοτικών Λαβίδα ή διανεμητής Απόσταση=24 mm (ή κατά περίπτωση) 16 δίσκοι/τρυβλία 120Χ120 mm 12 δίσκοι/τρυβλία 150 mm 5 δίσκοι/τρυβλία 100 mm Δεν μετακινούμε δισκίο που έχει τοποθετηθεί

Επιλογή αντιβιοτικών Προτεινόμενα από την επιτροπή CLSI Ανάλογα με το είδος του μικροβίου Ανάλογα με τη θέση της λοίμωξης

Διαδικασία Kirby-Bauer Επίστρωση 0.5 McF 30 min < 15 min 4°C 1-2ώρες 5-15min 15 min 35°Ο2 35°C CO2

Ανάγνωση αποτελεσμάτων Μέτρηση διαμέτρων •Χάρακας ή παχύμετρο βανκομυκίνη) ή κάμερα

Ανάγνωση αποτελεσμάτων •Προσπίπτων φωτισμός Πίσω πλευρά τρυβλίου Επιφάνεια αιματούχου υλικού

Οξακιλλίνη (σταφυλόκοκκος) Βανκομυκίνη (σταφυλόκοκκος, Ανάγνωση αποτελεσμάτων •Διελαύνων φωτισμός Οξακιλλίνη (σταφυλόκοκκος) Βανκομυκίνη (σταφυλόκοκκος, εντερόκοκκος)

Πλεονεκτήματα Kirby-Bauer Είναι τεχνικά απλή. Έχει μεγάλη επαναληψιμότητα. Είναι σχετικά φθηνή. Δεν απαιτεί ειδικό εξοπλισμό. Προσφέρει μεγάλη ευελιξία στην επιλογή αντιβιοτικών. Τα αποτελέσματά της (ευαίσθητο, μετρίως ευαίσθητο, ανθεκτικό) είναι ευρέως κατανοητά από τους γιατρούς όλων των ειδικοτήτων. Δύναται να αναδείξει μηχανισμούς αντοχής.

Περιορισμοί Kirby-Bauer Απαιτείται αυστηρή εφαρμογή του πρωτοκόλλου Είναι προτυποποιημένη μόνο για ορισμένα βακτήρια Enterobacteriaceae Pseudomonas aeruginosa Acinetobacter spp. Burkholderia cepacia Stenotrophomonas maltophilia Staphylococcus spp. Enterococcus spp. H.influenzae and H. parainfluenzae N. gonorrhoeae Streptococcus spp. - S. pneumoniae N. meningitidis Ενίοτε απαιτείται MIC

Αξιολόγηση Kirby-Bauer Ωφέλιμος στόχος Θεραπεία ασθενούς Επιδημιολογική επιτήρηση

Ρόλος Βιοπαθολόγου