Μπούρου Αγγελική Πασχαλίδου Γιώτα

Ας θυμηθούμε.. Η ΔΟΜΗ ΤΟΥ DNA 1Η ΔΟΜΗ ΤΟΥ DNA 1 Η ΔΟΜΗ ΤΟΥ DNA 2Η ΔΟΜΗ ΤΟΥ DNA 2

Όργανα & Συσκευές Ηθμός ή γάζα Σακουλάκι ή Γουδί Χωνί Δοκιμαστικός σωλήνας Ποτήρι ζέσεως (250 mL) Ογκομετρικός κύλινδρος (100 mL) Ξύλινος ή γυάλινος αναδευτήρας Πιπέτα Pasteur ή σύριγγα

Υλικά Πάγος Φράουλα Υγρό πιάτων (όχι συμπυκνωμένο) 10 mL Μαγειρικό αλάτι ¼ κουταλιού Απιονισμένο νερό 90 mL Αιθανόλη 10 ml παγωμένη (-20 0C) Σταγόνες διαλύματος πεψίνης 1%w/v ή 5-6 σταγόνες από υγρό φακών Για το δ/μα εκχύλισης του DNA Για την απομόνωση του DNA

Πειραματική διαδικασία Βήμα 1 ο Πολτοποιούμε τη φράουλα μας μέσα στο σακουλάκι ή στο γουδί.

Πειραματική διαδικασία Βήμα 2 ο Προσθέτουμε περίπου 100mL διαλύματος εκχύλισης και πιέζουμε ελαφρά ώστε να αναμιχθούν.

Πειραματική διαδικασία Βήμα 3 ο Τοποθετούμε ένα χωνί σε ένα δοκιμαστικό σωλήνα και βάζουμε μία γάζα ή ηθμό μέσα στο χωνί. Ρίχνουμε το μίγμα του διαλύματος εκχύλισης με το πολτοποιημένο υλικό μας, στον ηθμό και φιλτράρουμε το μίγμα μέσα στο σωλήνα.

Πειραματική διαδικασία Βήμα 4 ο Με τη βοήθεια της πιπέτας προσθέτουμε 2-3 σταγόνες διαλύματος του ενζύμου (πεψίνης), ή 5-6 σταγόνες από υγρό καθαρισμού φακών, ανακατεύουμε ελαφρά και περιμένουμε λίγα λεπτά.

Πειραματική διαδικασία Βήμα 5 ο Έπειτα προσθέτουμε σιγά σιγά την παγωμένη αλκοόλη στο διήθημα μέχρι να σχηματιστούν δύο διακριτές φάσεις.

Πειραματική διαδικασία Κρατάμε το δοκιμαστικό σωλήνα ακίνητο και παρατηρούμε τις δύο φάσεις. Τα λιπίδια και οι πρωτεΐνες κινούνται στον πυθμένα της κάτω στοιβάδας, ενώ τα νουκλεϊκά οξέα ανέρχονται στη στοιβάδα της αλκοόλης (πάνω).

Πειραματική διαδικασία Βήμα 6 ο Με τη βοήθεια της ράβδου “ψαρεύουμε” το DNA και το απομακρύνουμε από το δοκιμαστικό σωλήνα.

Ας πειραματιστούμε..

Γιατί πολτοποιούμε τη φράουλα ; Ποιος ο ρόλος του απορυπαντικού στο διάλυμα εκχύλισης ; Μόρια Απορρυπαντικού Κυτταρικές μεμβράνες

Τα απορρυπαντικά αλληλεπιδρούν με τα λιπίδια και με τις πρωτεΐνες των μεμβρανών σχηματίζοντας συσσωματώματα. Με την προσθήκη του απορρυπαντικού απελευθερώνονται τα νουκλεϊκά οξέα από τις πρωτεΐνες και τα λιπίδια από τα οποία περιβάλλονται.

Γιατί προσθέτουμε μαγειρικό αλάτι στο δ/μα εκχύλισης; Το χλωριούχο νάτριο (NaCl) ή μαγειρικό αλάτι όταν διαλυθεί σε νερό διίσταται σε ιόντα NaCl Na+ + Cl- Τα νουκλεϊκά οξέα DNA και RNA διαθέτουν αρνητικά φορτισμένες φωσφορικές ομάδες

Η δημιουργία ισχυρών ιοντικών δεσμών ανάμεσα στις αρνητικά φορτισμένες φωσφορικές ομάδες και τα θετικά φορτισμένα ιόντα νατρίου φέρνουν πιο κοντά τα μόρια των νουκλεϊκών οξέων. Τα συσσωματώματα μπορούν να διαχωριστούν πολύ πιο εύκολα.

Πυρήνας Κύτταρο Ινίδια Χρωματίνης Χρωμόσωμα Γιατί προσθέτουμε πρωτεïνάση στο διήθημα; Οκταμερές Ιστονών Νουκλεοσώματα

Η πρωτεϊνάση ή πεψίνη ή το υγρό των φακών επαφής απομακρύνει τις πρωτεΐνες ( ιστόνες ) γύρω από τις οποίες είναι περιελιγμένο το DNA ώστε να μπορέσουμε να το παραλάβουμε καθαρό.

Γιατί προσθέτουμε αιθυλική αλκοόλη ή αιθανόλη (οινόπνευμα ) ; Το DNA δε διαλύεται στην αιθανόλη. Η αιθανόλη απομακρύνει το νερό γύρω από τα μόρια των νουκλεϊκών οξέων. Ισχυροποιεί τους ιοντικούς δεσμούς που δημιουργούνται με την προσθήκη του άλατος και έτσι διευκολύνει των διαχωρισμό των νουκλεϊκών οξέων. DNA Το DNA αναδύεται μέσα στην αλκοολική φάση

Καλά αποτελέσματα..