Επιμέλεια: Ελευθερία Φανουράκη Εργαστηριακές Ασκήσεις Βιολογίας Λυκείου 2010 - 2011 1ο ΕΚΦΕ Ηρακλείου Επιμέλεια: Ελευθερία Φανουράκη

Απομόνωση νουκλεϊκών οξέων από μπανάνα Γ' ΤΑΞΗ ΛΥΚΕΙΟΥ Θετικής Κατεύθυνσης ΑΣΚΗΣΗ 1 Απομόνωση νουκλεϊκών οξέων από μπανάνα

Όργανα και υλικά Υδατόλουτρο (ή μεγάλο ποτήρι ζέσεως, νερό και γκαζάκι) Θερμόμετρο ποτήρια ζέσεως 250 ml 1 κουτάλι σούπας ή πιπέτα των 10ml δοκιμαστικός σωλήνας ράβδος ανάδευσης χωνί φίλτρο καφέ πάγος τριμμένος μπανάνα 10 ml υγρό πιάτων (όχι συμπυκνωμένο) Μισό κουτάλι σούπας ή 3 g μαγειρικό αλάτι απεσταγμένο νερό παγωμένη αιθανόλη (-20°C) υγρό φακών επαφής 1ο ΕΚΦΕ Ηρακλείου Ε. Φανουράκη http://1ekfe.ira.sch.gr/ mail@1ekfe.ira.sch.gr

1ο ΕΚΦΕ Ηρακλείου Ε. Φανουράκη http://1ekfe.ira.sch.gr/ mail@1ekfe.ira.sch.gr

Παίρνουμε, μια κουταλιά της σούπας, ή 10 ml υγρό πιάτων (όχι συμπυκνωμένο) (σπάζει τις μεμβράνες και απελευθερώνει το DNA) και περίπου μισή κουταλιά της σούπας ή 3 g μαγειρικό αλάτι (τα Na+ του NaCl εξουδετερώνουν τα ιόντα του φωσφορικού οξέως (PO42-) του DNA και αυτό συμπυκνώνεται για να γίνει ορατό) 1ο ΕΚΦΕ Ηρακλείου Ε. Φανουράκη http://1ekfe.ira.sch.gr/ mail@1ekfe.ira.sch.gr

Αναδεύουμε ώσπου να διαλυθεί το αλάτι Βάζουμε το υγρό πιάτων και το μαγειρικό αλάτι σε ένα ποτήρι ζέσεως και συμπληρώνουμε αποσταγμένο νερό μέχρι τα 100 ml (Διάλυμα 1) Αναδεύουμε ώσπου να διαλυθεί το αλάτι 1ο ΕΚΦΕ Ηρακλείου Ε. Φανουράκη http://1ekfe.ira.sch.gr/ mail@1ekfe.ira.sch.gr

Στη συνέχεια πολτοποιούμε τη μπανάνα στο ποτήρι ζέσεως με γουδί ή σε ένα πλαστικό σακουλάκι με τα χέρια)

Προσθέτουμε στην πολτοποιημένη μπανάνα το διάλυμα 1 και αναδεύουμε καλά ή σε κάποιο μεγάλο ποτήρι ζέσεως στο οποίο έχουμε ζεστάνει νερό στο γκαζάκι και θερμομετρούμε συνεχώς (επιταχύνει τη λύση των κυττάρων και αδρανοποιούνται πολλές νουκλεάσες)

Τοποθετούμε το ποτήρι ζέσεως στον τριμμένο πάγο, για 5 λεπτά, ανακατεύοντας κάθε μισό λεπτό (επιβραδύνει τις ενζυμικές αντιδράσεις που καταστρέφουν το DNA) Τοποθετούμε το φίλτρο του καφέ σε χωνί και φιλτράρουμε το μείγμα συλλέγοντας το διήθημα σε ένα άλλο ποτήρι ζέσεως

Παίρνουμε περίπου 10 ml διήθημα σε ένα δοκιμαστικό σωλήνα (κατά προτίμηση μεγάλο για έχουμε μεγαλύτερη επιφάνεια επαφής διηθήματος-αλκοόλης) Βάζουμε 2-3 σταγόνες υγρού φακών επαφής ή πεψίνη ή χυμό ανανά (περιέχουν ένζυμα που διασπούν τις ιστόνες με τις οποίες πακετάρεται το DNA) Προσθέτουμε στα τοιχώματα του σωλήνα σχεδόν ίση ποσότητα παγωμένης αιθανόλης (-20 °C) δημιουργώντας μια στιβάδα πάνω από το διάλυμά μας.

Τοποθετούμε τον δοκιμαστικό σωλήνα στο στατό για 2-3 λεπτά Τοποθετούμε τον δοκιμαστικό σωλήνα στο στατό για 2-3 λεπτά. Τα νουκλεϊκά οξέα συγκεντρώνονται στην επιφάνεια επαφής διηθήματος-αλκοόλης Οι υδρόφοβες αζωτούχες βάσεις των νουκλεϊκών οξέων έλκονται από την αλκοόλη και συγκεντρώνονται στην επιφάνεια επαφής διηθήματος-αλκοόλης. Επειδή όμως το DNA είναι αδιάλυτο στην αλκοόλη γίνεται ορατό με την μορφή λευκών συσσωματωμάτων DNA

Κάνοντας κλικ πάνω στις παρακάτω διευθύνσεις ιστοσελίδων στο διαδίκτυο θα συνδεθείτε με ένα εικονικό εργαστήριο απομόνωσης ανθρώπινου DNA και με ένα βίντεο απομόνωσης DNA από φράουλα (δυστυχώς δε μπορούμε να βρούμε φράουλα αυτή την εποχή αλλά η μέθοδος ισχύει και για τη μπανάνα) http://learn.genetics.utah.edu/content/labs/extraction/ http://www.youtube.com/watch?v=g3LTeaiVMbI 1ο ΕΚΦΕ Ηρακλείου Ε. Φανουράκη http://1ekfe.ira.sch.gr/ mail@1ekfe.ira.sch.gr

Καλή επιτυχία!!! 1ο ΕΚΦΕ Ηρακλείου Ε. Φανουράκη http://1ekfe.ira.sch.gr/ mail@1ekfe.ira.sch.gr