Mικτή Λεμφοκυτταρική Αντίδραση (Mixed Lymphocyte Reaction; MLR)

Slides:



Advertisements
Παρόμοιες παρουσιάσεις
ΠΕ Μακρής, ΜΠ Μακρής ΑΠΘ Η μελέτη της λειτουργίας των αιμοπεταλίων μέχρι σήμερα από την εποχή του Born (1962) στηρίχθηκε σε καταγραφή φωτομετρικής μεταβολής.
Advertisements

Τ Κύτταρα και Ρύθμιση της Διάρκειας Ζωής τους
ΚΙΝΗΤΙΚΗ ΑΝΑΠΤΥΞΗΣ ΜΙΚΡΟΒΙΩΝ ΚΑΙ ΠΑΡΑΓΩΓΗΣ ΜΕΤΑΒΟΛΙΚΩΝ ΠΡΟΪΟΝΤΩΝ
Ταχύτητα αντίδρασης Ως ταχύτητα αντίδρασης ορίζεται η μεταβολή της συγκέντρωσης ενός από τα αντιδρώντα ή τα προϊόντα στη μονάδα του χρόνου: ΔC C2.
A B ΤΥΠΟΙ ELISA Αμεση ELISA (direct ELISA)
Επιμέλεια: Ελευθερία Φανουράκη
ΠΕΙΡΑΜΑΤΙΚΕΣ ΑΣΚΗΣΕΙΣ ΒΙΟΛΟΓΙΑΣ
Πρόβλημα φυγοκέντρησης
Υπεύθυνη καθηγήτρια: Κα. Φράγκου Μαρία Ον/μο φοιτητή: Ιωάννης Κωτούλας.
ΤΜΗΜΑ ΤΕΧΝΟΛΟΓΙΑΣ ΤΡΟΦΙΜΩΝ ΕΡΓΑΣΤΗΡΙΟ ΒΙΟΜΗΧΑΝΙΚΗΣ ΜΙΚΡΟΒΙΟΛΟΓΙΑΣ
ΑΥΞΟΡΡΥΘΜΙΣΗ ΤΟΥ microRNA-34a ΚΑΤΑ ΤΗ ΔΙΑΡΚΕΙΑ ΤΩΝ ΕΠΙΛΗΠΤΙΚΩΝ ΚΡΙΣΕΩΝ ΠΟΥ ΠΡΟΚΑΛΟΥΝ ΤΟ ΘΑΝΑΤΟ ΝΕΥΡΩΝΩΝ.
Χρώση Μπλέ του μεθυλενίου- Κινητική
Αρχή μεθόδου Αποτελεί ευαίσθητη, αξιόπιστη και ταχεία μέθοδο προσδιορισμού αντιγόνων των ερυθρών αιμοσφαιρίων. Κάθε κάρτα περιέχει πέντε ή έξι (ανάλογα.
Πρόβλημα φυγοκέντρησης
Μελέτη των λειτουργιών του πεπτικού συστήματος
Αγγελική Φωτεινοπούλου
ΑΝΟΣΟΑΙΜΑΤΟΛΟΓΙΑ ΚΑΙ ΟΜΑΔΕΣ ΑΙΜΑΤΟΣ
ΕΥΡΙΔΙΚΗ ΗΛΙΑ 8ο ΕΞΑΜΗΝΟ Α.Μ : Z15880 ΑΦΠ ΚΑΙ ΓΜ ΠΡΑΚΤΙΚΗ ΣΤΟ ΕΡΓΑΣΤΗΡΙΟ ΕΔΑΦΟΛΟΓΙΑΣ ΚΑΙ ΓΕΩΡΓΙΚΗΣ ΧΗΜΕΙΑΣ- Γ.Π.Α 9 ΙΟΥΛΙΟΥ-31 ΑΥΓΟΥΣΤΟΥ 2012.
ΚΥΤΤΑΡΟΚΙΝΕΣ ή ΚΥΤΤΟΚΙΝΕΣ. Είδαμε ότι οι ΜΗΧΑΝΙΣΜΟΙ ΜΗ ΕΙΔΙΚΗΣ ΑΝΟΣΙΑΣ είναι… 1.Ανατομικοί φραγμοί - Δέρμα - Βλεννώδεις μεμβράνες 2. Φυσιολογικοί φραγμοί.
Συγκριτική Αιματολογία Σκοπός : η μελέτη και η σύγκριση αιματολογικών παραμέτρων σε διάφορα είδη ζώων Ράνια Τσιτσιλώνη Σύλβια Παπαβασιλείου.
Παρουσίαση Πρακτικής Άσκησης για το πρόγραμμα του ΕΣΠΑ Εργαστήριο: Μοριακής Βιολογίας Υπέυθυνος: Ρήγας Σταμάτης Ασκούμενοι: Πατριανάκος Στέφανος, AM:
Ασκήσεις Ανοσολογίας Π.Παπαζαφείρη Α. Μαρμάρη ΔΟΚΙΜΑΣΙΑ ΚΥΤΤΑΡΟΤΟΞΙΚΟΤΗΤΑΣ Εισαγωγή MTT TNFα Πειραματική διαδικασία Υπολογισμοί.
΄Ασκηση 10  Έμμορφα συστατικά του αίματος Ερυθρά αιμοσφαίρια Λευκά αιμοσφαίρια Λευκοκυτταρικός τύπος  Αιμόλυση των ερυθροκυττάρων  Αιματολογικές παράμετροι.
ΑΝΟΣΟΛΟΓΙΑ 5 / Ι.Κ.ΑΓΓΕΛΗ ΑΝΟΣΟΛΟΓΙΚΕΣ ΤΕΧΝΙΚΕΣ ΑΝΤΙΓΟΝΑ: αναγνώριση από υποδοχέα Β ή από υποδοχέα Τ + ΜΗC μόρια Β-κύτταρο + αντιγόνο Τ-κύτταρο.
Διαδικασία απομόνωσης γενωμικού DNA από βιολογικό υλικό
Απομόνωση και Tαυτοποίηση Κυττάρων του Ανοσοποιητικού Συστήματος
Μικροβιολογία Τροφίμων I
Ασκήσεις Ανοσολογίας Π. Παπαζαφείρη. Α. Φωτενοπούλου. Ουρ
Ασκήσεις Έμμορφα συστατικά του αίματος
ΑΝΟΣΟΛΟΓΙΚΕΣ ΤΕΧΝΙΚΕΣ
Απομόνωση και ταυτοποίηση
Μελέτη των λειτουργιών του πεπτικού συστήματος
ΚΥΤΤΑΡΟΜΕΣΟΛΑΒΗΤΙΚΗ ΑΝΟΣΙΑ
Mικτή Λεμφοκυτταρική Αντίδραση (Mixed Lymphocyte Reaction; MLR)
ΜΕΙΖΟΝ ΣΥΜΠΛΕΓΜΑ ΙΣΤΟΣΥΜΒΑΤΟΤΗΤΑΣ
ΑΝΤΙΓΟΝA ΑΝΟΣΟΛΟΓΙΑ Aντιγόνα-Ανοσογόνα-Ανοχογόνα
Μελέτη των λειτουργιών του πεπτικού συστήματος
ΚΥΤΤΑΡΟΚΙΝΕΣ ΑΝΟΣΟΛΟΓΙΑ Εισαγωγικά στοιχεία Ιδιότητες των κυτταροκινών
Απομόνωση και Tαυτοποίηση Ανοσοποιητικού Συστήματος
Κλωνοποιηςη και χαρακτηριςμος του γονιδιου της περφορινης ςτην ιριδιζουςα πεςτροφα Εισαγωγή Η περφορίνη ανήκει στην τάξη των Pore Forming Toxins(PFTs),οι.
Ανασκόπηση ανοσολογικών τεχνικών
Απομόνωση και ταυτοποίηση
Απομόνωση και ταυτοποίηση A. Φωτεινοπούλου, Α. Μαρμάρη
Εργαστήριο Συγκριτική Ανοσολογία ΜΕΛΕΤΗ ΤΩΝ ΔΡΑΣΤΙΚΩΝ ΛΕΙΤΟΥΡΓΙΩΝ
Αγγελική Φωτεινοπούλου
Mικτή Λεμφοκυτταρική Αντίδραση (Mixed Lymphocyte Reaction; MLR)
Απομόνωση και Tαυτοποίηση Ανοσοποιητικού Συστήματος
ΚΥΚΛΟΦΟΡΙΚΟ ΣΥΣΤΗΜΑ.
Mικτή Λεμφοκυτταρική Αντίδραση (Mixed Lymphocyte Reaction; MLR)
ΑΣΚΗΣΗ 9 ΑΙΜΟΣΥΓΚΟΛΛΗΣΗ Πατήστε Esc να κλείσει η προβολή.
Απομόνωση και ταυτοποίηση Ρ. Τσιτσιλώνη, Π. Παπαζαφείρη
Απομόνωση και Tαυτοποίηση Ανοσοποιητικού Συστήματος
Απομόνωση και Tαυτοποίηση Κυττάρων του Ανοσοποιητικού Συστήματος
ΩΡΙΜΑΝΣΗ ΤΩΝ Τ ΚΥΤΤΑΡΩΝ
Απομόνωση και ταυτοποίηση Ανοσοσφαιρινών
Αντιδράσεις κατακρήμνισης Ανοσοδιάχυση (άσκηση 5) Ag: ορός ανθρώπου
ΥΠΟΔΟΧΕΑΣ ΤΩΝ Τ ΛΕΜΦΟΚΥΤΤΑΡΩΝ
Ανοσολογία 33/ Π.Παπαζαφείρη Ανοσολογία των Μεταμοσχεύσεων
Mικτή Λεμφοκυτταρική Αντίδραση (Mixed Lymphocyte Reaction; MLR)
Απομόνωση και Tαυτοποίηση Κυττάρων του Ανοσοποιητικού Συστήματος
ΙΣΧΥΣ ΚΑΙ ΕΝΕΡΓΕΙΑ ΣΤΟ ΕΝΑΛΛΑΣΣΟΜΕΝΟ ΡΕΥΜΑ
Ασκήσεις Έμμορφα συστατικά του αίματος
Απομόνωση και ταυτοποίηση Ανοσοσφαιρινών
Απομόνωση και Tαυτοποίηση Κυττάρων του Ανοσοποιητικού Συστήματος
Π.Παπαζαφείρη , Α. Φωτεινοπούλου
Диффуз токсик букок 710-ГУРУХ ТАЛАБАСИ КАРИМОВА МУНИСА.
ΩΡΙΜΑΝΣΗ ΤΩΝ Τ ΚΥΤΤΑΡΩΝ
Ασκήσεις Έμμορφα συστατικά του αίματος
ΕΝΕΡΓΟΠΟΙΗΣΗ ΤΩΝ Τ ΚΥΤΤΑΡΩΝ
Μεταγράφημα παρουσίασης:

Mικτή Λεμφοκυτταρική Αντίδραση (Mixed Lymphocyte Reaction; MLR) Άσκηση 13 Mικτή Λεμφοκυτταρική Αντίδραση (Mixed Lymphocyte Reaction; MLR) Ράνια Τσιτσιλώνη Λίλα Φωτεινοπούλου, Γιώτα Παπαζαφείρη

Μέθοδοι προσδιορισμού HLA αντιγόνων Προϋποθέσεις: Τ λεμφοκύτταρα (τυποποίηση για τα τάξης Ι) και Β λεμφοκύτταρα (τυποποίηση για τα τάξης ΙΙ) πολυκλωνικοί ή μονοκλωνικοί αντι-HLA αντιοροί Μέθοδοι που χρησιμοποιούνται: μικρολεμφοκυτταρική δοκιμασία (ορολογική τυποποίηση) μοριακές μέθοδοι (PCR) μικτή λεμφοκυτταρική αντίδραση (MLR)

Μικρολεμφοκυτταρική δοκιμασία

Μοριακή τυποποίηση με χρήση PCR PCR-SSP PCR-SSO

Tα επίπεδα της HLA τυποποίησης Χαμηλής ακρίβειας: σε επίπεδο ορολογικής ειδικότητας (πιο αλληλόμορφο εκφράζεται) Ενδιάμεσης ακρίβειας: σε επίπεδο ομάδας αλληλομόρφων Υψηλής ακρίβειας: σε επίπεδο αλληλομόρφου (νουκλεοτιδική αλληλουχία) όνομα αλληλομόρφου διαχωριστικό μεταξύ γονιδίου και του ονόματος του αλληλομόρφου γονίδιο διαχωριστικό κατάληξη που υποδεικνύει διαφορές στην έκφραση διαχωριστικά Πεδίο 1: ομάδα αλληλομόρφου Πεδίο 2: ειδική HLA πρωτεΐνη Πεδίο 4: χρησιμοποιείται για να δείξει διαφορές στη μη κωδική περιοχή Πεδίο 3: χρησιμοποιείται για να δείξει μία συνώνυμη αντικατάσταση μέσα στην κωδική περιοχή

Οι υπο-ομάδες των αλληλομόρφων DR3 DR17 DRB1*0301 DRB1*0302 DR18 DRB1*0303

Η αρχή της MLR δότης δέκτης

Τι είναι η MLR Τι μας δείχνει η MLR In vitro μέθοδος με την οποία εξετάζουμε τη λειτουργική κατάσταση του ανοσοποιητικού συστήματος ελέγχοντας τη δυνατότητά του να απαντά σε αυτόλογα ή ετερόλογα αντιγόνα Μέθοδος ποσοτικοποίησης της συμβατότητας HLA τάξης ΙΙ Τι μας δείχνει η MLR την ικανότητα ενεργοποίησης των Τ κυττάρων και των μονοκυττάρων την ικανότητα δημιουργίας Τc και Ts λεμφοκυττάρων την ικανότητα ρύθμισης ανοσολογικών λειτουργιών (πχ. παραγωγή Ab) την ικανότητα απάντησης των Τ λεμφοκυττάρων σε μιτογόνα ή αλλοαντιγόνα την ικανότητα παραγωγής σημαντικών κυτταροκινών (πχ IL-2, IL-1, IFNs, TNFs)

Διαφορά με την in vivo κατάσταση Τύποι MLR Μονόδρομη Αμφίδρομη Αυτόλογη Ετερόλογη Διαφορά με την in vivo κατάσταση μεταβάλλουμε την αριθμητική σχέση των κυττάρων μεταξύ τους (Τ λεμφοκύτταρα : μονοκύτταρα = 1:1)

Μικτή λεμφοκυτταρική αντίδραση

Δ. Πειραματική διαδικασία Βάζουμε από 2 ml εναιώρημα σπληνοκυττάρων Balb/c και 2 ml C57BL/6 στα πλαστικά σωληνάρια (από το R1 στο S1 και από το R2 στο S2) Προσθέτουμε 50 μl μιτομυκίνης C, επωάσουμε για 45 min σε κλίβανο 37οC με ανακίνηση ανά 15 min. Γεμίζουμε τα σωληνάρια με PBS Φυγοκέντρηση : 1200 rpm για 5 min (2 φορές) Επαναιωρούμε σε 1,5 ml θρεπτικού υλικού Μετράμε τα κύτταρα-απαντητές (R1) (50 μl κύτταρα + 50 μl Trypan blue στο γυάλινο σωληνάκι) στη Neubauer. Αραιώνουμε με θρεπτικό υλικό ώστε η συγκέντρωση να είναι 2 x 106 κύτταρα/ml. Σε πλάκα 96 φρεατίων τοποθετούμε: 100 μl από τα κύτταρα-απαντητές (R1) σύμφωνα με τον πίνακα 13.1 100, 50 ή 20 μl από τα κύτταρα-διεγέρτες (S1 και S2) συμπληρώνουμε με θρεπτικό υλικό μέχρι τελικού όγκου 200 μl/φρεάτιο ΠΡΟΣΟΧΗ: βάζουμε πάντα θετικούς (σειρά Β) και αρνητικούς (σειρά Α) μάρτυρες Βάζουμε την πλάκα για επώαση σε κλίβανο 37οC, 5% CO2 για 5 ημέρες

Πίνακας 13.1 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A B C D E F G H R1 100 μl S1 100 μl S2 100 μl + IL-2 S1 20 μl S1 50 μl S2 20 μl S2 50 μl υπόβαθρο max απάντηση αυτόλογη MLR ετερόλογη MLR 5:1 2:1 1:1

Αποτελέσματα – Υπολογισμοί Για το φυλλάδιό σας Υπολογίζουμε μέσο όρο cpm θετικών και αρνητικών μαρτύρων και των υπό εξέταση δειγμάτων (αφαιρούμε από όλα τους αντίστοιχους αρνητικούς μάρτυρες) Γραφική παράσταση αναλογίας κυττάρων-απαντητών προς διεγέρτες συναρτήσει των cpm για τις ομάδες R1-S1 (αυτόλογη MLR) και R1-S2 (ετερόλογη MLR) Πού παρατηρείτε μεγαλύτερη ικανότητα πολλαπλασιασμού και γιατί; Τι παρατηρείται στα φρεάτια όταν προσθέσατε IL-2;