Απομόνωση και ταυτοποίηση Ρ. Τσιτσιλώνη, Π. Παπαζαφείρη

Slides:



Advertisements
Παρόμοιες παρουσιάσεις
Ογκομέτρηση.
Advertisements

ΕΚΦΕ ΣΕΡΡΩΝ Εργαστηριακές Ασκήσεις Εργαστηριακές ΑσκήσειςΧημείας B΄Λυκείου Γενικής Παιδείας Επιμέλεια: Θανασούλιας Αλέξης Χημικός Σχολ.Έτος:
ΧΗΜΙΚΗ ΙΣΟΡΡΟΠΙΑ, ΟΞΕΑ, ΒΑΣΕΙΣ, pH. ΟΓΚΟΜΕΤΡΙΚΗ ΑΝΑΛΥΣΗ ΟΞΙΚΟΥ ΟΞΕΟΣ
ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟΣ ΕΙΔΙΚΩΝ ΒΑΡΩΝ ΚΑΙ YΔΡΟΑΠΟΡΡΟΦΗΤΙΚΟΤΗΤΑΣ ΑΔΡΑΝΩΝ ΥΛΙΚΩΝ
ΕΚΦΕ ΑΓΙΩΝ ΑΝΑΡΓΥΡΩΝ Εισηγητές Στέφανος Κ. Ντούλας Χημικός MSc-Med Αντώνιος Ε. Χρονάκης Χημικός Χημεία Β΄ Λυκείου Επίδραση θερμοκρασίας και συγκέντρωσης.
Ιονική ισχύς Η ιονική ισχύς, Ι, ενός διαλύματος δίνεται σαν το ημιάθροισμα του γινομένου της συγκέντρωσης καθενός συστατικού του διαλύματος πολλαπλασιασμένης.
μέθοδοι προσδιορισμού
ΕΡΓΑΣΤΗΡΙΑΚΕΣ ΑΣΚΗΣΕΙΣ Γ΄ ΛΥΚΕΙΟΥ
Ηλεκτροφόρηση.
Γ.Ζ.Καπελώνης ΕΚΦΕ Ν.ΣΜΥΡΝΗΣ Το «σενάριο» Αφού ολοκληρώσουμε τη διδασκαλία στο κεφάλαιο 3 οι μαθητές θα πραγματοποιήσουν την εργαστηριακή άσκηση «Προσδιορισμός.
ΤΜΗΜΑ ΤΕΧΝΟΛΟΓΙΑΣ ΤΡΟΦΙΜΩΝ ΕΡΓΑΣΤΗΡΙΟ ΒΙΟΜΗΧΑΝΙΚΗΣ ΜΙΚΡΟΒΙΟΛΟΓΙΑΣ
Χρώση Μπλέ του μεθυλενίου- Κινητική
Ανοσολογία Ενότητα 12: Aιμολυτικό συμπλήρωμα Πέτρος Καρκαλούσος Τμήμα Ιατρικών Εργαστηρίων Ανοικτά Ακαδημαϊκά Μαθήματα στο ΤΕΙ Αθήνας Το περιεχόμενο του.
Μελέτη των λειτουργιών του πεπτικού συστήματος
Αγγελική Φωτεινοπούλου
ΠΡΑΚΤΙΚΗ ΑΣΚΗΣΗ ΕΡΓΑΣΤΗΡΙΟ : ΧΗΜΕΙΑΣ ΚΑΙ ΑΝΑΛΥΣΗΣ ΤΡΟΦΙΜΩΝ ΦΟΙΤΗΤΡΙΑ : ΣΑΛΙΑΡΗ ΔΗΜΗΤΡΑ, A.M :16677 ΥΠΕΥΘΥΝΗ ΚΑΘΗΓΗΤΡΙΑ : ΕΥΑΓΓΕΛΙΟΥ ΒΑΣΙΛΙΚΗ ΘΕΜΑ : ΣΥΓΚΡΑΤΗΣΗ.
ΕΥΡΙΔΙΚΗ ΗΛΙΑ 8ο ΕΞΑΜΗΝΟ Α.Μ : Z15880 ΑΦΠ ΚΑΙ ΓΜ ΠΡΑΚΤΙΚΗ ΣΤΟ ΕΡΓΑΣΤΗΡΙΟ ΕΔΑΦΟΛΟΓΙΑΣ ΚΑΙ ΓΕΩΡΓΙΚΗΣ ΧΗΜΕΙΑΣ- Γ.Π.Α 9 ΙΟΥΛΙΟΥ-31 ΑΥΓΟΥΣΤΟΥ 2012.
Συγκριτική Αιματολογία Σκοπός : η μελέτη και η σύγκριση αιματολογικών παραμέτρων σε διάφορα είδη ζώων Ράνια Τσιτσιλώνη Σύλβια Παπαβασιλείου.
Παρουσίαση Πρακτικής Άσκησης για το πρόγραμμα του ΕΣΠΑ Εργαστήριο: Μοριακής Βιολογίας Υπέυθυνος: Ρήγας Σταμάτης Ασκούμενοι: Πατριανάκος Στέφανος, AM:
Ασκήσεις Ανοσολογίας Π.Παπαζαφείρη Α. Μαρμάρη ΔΟΚΙΜΑΣΙΑ ΚΥΤΤΑΡΟΤΟΞΙΚΟΤΗΤΑΣ Εισαγωγή MTT TNFα Πειραματική διαδικασία Υπολογισμοί.
΄Ασκηση 10  Έμμορφα συστατικά του αίματος Ερυθρά αιμοσφαίρια Λευκά αιμοσφαίρια Λευκοκυτταρικός τύπος  Αιμόλυση των ερυθροκυττάρων  Αιματολογικές παράμετροι.
Ωσμωρύθμιση Τα ωσμωρυθμιστικά και απεκκριτικά συστήματα ελέγχουν και ρυθμίζουν την ωσμωτική πίεση, την ιονική σύσταση και τον όγκο των υγρών του σώματος.
Στοιχεία από τη θεωρία απαραίτητα για την επίλυση ασκήσεων
∆είκτες Πρωτολυτικοί ή ηλεκτρολυτικοί δείκτες είναι ουσίες των οποίων το χρώμα αλλάζει ανάλογα με το pH του διαλύματος στο οποίο προστίθενται. Οι δείκτες.
Διαδικασία απομόνωσης γενωμικού DNA από βιολογικό υλικό
Aπομόνωση DNA από επιθηλιακά κύτταρα παρειάς
Άσκηση 4 Πηγή ενέργειας για τη μυϊκή σύσπαση.
Απομόνωση και Tαυτοποίηση Κυττάρων του Ανοσοποιητικού Συστήματος
ΟΓΚΟΜΕΤΡΗΣΕΙΣ ΚΑΘΙΖΗΣΕΩΣ
ΟΙΝΟΛΟΓΙΑ ΕΡΓΑΣΤΗΡΙΟ 3ο.
Μελέτη του πεπτικού συστήματος
Ασκήσεις Ανοσολογίας Π. Παπαζαφείρη. Α. Φωτενοπούλου. Ουρ
Μετουσίωση Πρωτεϊνών Επιμέλεια: Ηλίας Μαυροματίδης, ΕΚΦΕ Νέας Σμύρνης
Ασκήσεις Έμμορφα συστατικά του αίματος
ΧΡΩΜΑΤΟΓΡΑΦΙΑ ΑΠΟΚΛΕΙΣΜΟΥ ΜΕΓΕΘΩΝ
Απομόνωση και ταυτοποίηση
Απομόνωση και ταυτοποίηση
Επίδραση ορμονών στο γλυκογόνο του ήπατος και τη γλυκόζη του αίματος
Μελέτη των λειτουργιών του πεπτικού συστήματος
Mικτή Λεμφοκυτταρική Αντίδραση (Mixed Lymphocyte Reaction; MLR)
ΑΝΤΙΓΟΝA ΑΝΟΣΟΛΟΓΙΑ Aντιγόνα-Ανοσογόνα-Ανοχογόνα
Μελέτη των λειτουργιών του πεπτικού συστήματος
Επίδραση της στέρησης τροφής στο μεταβολισμό του ήπατος
Απομόνωση και ταυτοποίηση
Συγκριτική Φυσιολογία Ζώων
Απομόνωση και ταυτοποίηση A. Φωτεινοπούλου, Α. Μαρμάρη
Εργαστήριο Συγκριτική Ανοσολογία ΜΕΛΕΤΗ ΤΩΝ ΔΡΑΣΤΙΚΩΝ ΛΕΙΤΟΥΡΓΙΩΝ
Αγγελική Φωτεινοπούλου
Απομόνωση και Tαυτοποίηση Ανοσοποιητικού Συστήματος
Mικτή Λεμφοκυτταρική Αντίδραση (Mixed Lymphocyte Reaction; MLR)
Παραγωγή γαλακτικού οξέος από Lactobacillus delbrueckii
ΑΣΚΗΣΗ 9 ΑΙΜΟΣΥΓΚΟΛΛΗΣΗ Πατήστε Esc να κλείσει η προβολή.
Απομόνωση και Tαυτοποίηση Ανοσοποιητικού Συστήματος
Απομόνωση και Tαυτοποίηση Κυττάρων του Ανοσοποιητικού Συστήματος
Άσκηση 4 Πηγή ενέργειας για τη μυϊκή σύσπαση.
ΑΝΤΙΓΟΝA ΑΝΟΣΟΛΟΓΙΑ Aντιγόνα-Ανοσογόνα-Ανοχογόνα
Απομόνωση και ταυτοποίηση Ανοσοσφαιρινών
Αντιδράσεις κατακρήμνισης Ανοσοδιάχυση (άσκηση 5) Ag: ορός ανθρώπου
Mικτή Λεμφοκυτταρική Αντίδραση (Mixed Lymphocyte Reaction; MLR)
Aσκηση 2 Απομόνωση DNA.
Ασκήσεις Έμμορφα συστατικά του αίματος
4. Πολαρογραφία-2 ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΙΩΑΝΝΙΝΩΝ ΤΜΗΜΑ ΧΗΜΕΙΑΣ ΕΡΓΑΣΤΗΡΙΟ ΑΝΑΛΥΤΙΚΗΣ ΧΗΜΕΙΑΣ ΑΝΑΛΥΤΙΚΗ ΧΗΜΕΙΑ ΙΙΙ 4. Πολαρογραφία-2.
Mικτή Λεμφοκυτταρική Αντίδραση (Mixed Lymphocyte Reaction; MLR)
Κούρτη Μαρία Βιολόγος, Msc, PhD 18 Ιανουαρίου 2018
Απομόνωση και ταυτοποίηση Ανοσοσφαιρινών
Π.Παπαζαφείρη , Α. Φωτεινοπούλου
Ωσμωρύθμιση Τα ωσμωρυθμιστικά και απεκκριτικά συστήματα ελέγχουν και ρυθμίζουν την ωσμωτική πίεση, την ιονική σύσταση και τον όγκο των υγρών του σώματος.
Ασκήσεις Έμμορφα συστατικά του αίματος
Άσκηση 4 Πηγή ενέργειας για τη μυϊκή σύσπαση.
Επίδραση ορμονών στο γλυκογόνο του ήπατος και τη γλυκόζη του αίματος
Μεταγράφημα παρουσίασης:

Απομόνωση και ταυτοποίηση Ρ. Τσιτσιλώνη, Π. Παπαζαφείρη Άσκηση 2 Απομόνωση και ταυτοποίηση Ανοσοσφαιρινών Α. Φωτεινοπούλου Ρ. Τσιτσιλώνη, Π. Παπαζαφείρη

Ανοσολογική απάντηση Ι. Ανοσογονικότητα: ικανότητα να επάγουν χυμική ή/και κυτταρική ανοσιακή απάντηση Εκτελεστικό Β-κύτταρο Β-κύτταρο μνήμης πλασματοκύτταρο Β-κύτταρο + αντιγόνο Εκτελεστικό Τ-κύτταρο Τ-κύτταρο μνήμης CTL, Th Τ-κύτταρο + αντιγόνο ΙΙ. Αντιγονικότητα: ικανότητα να συνδέονται με τα τελικά προϊόντα της ανοσιακής απάντησης

Δομή Ανοσοσφαιρινών Fab κ, λ γ, μ, α, δ, ε

Πρωτογενής και δευτερογενής απάντηση Χρόνος εμφάνισης Διάρκεια Τίτλος Τάξη Ιg Συγγένεια

Παραγωγή και καθαρισμός αντισωμάτων

Πρωτεϊνικά φορτία και pH

Ιοντοανταλλάκτες Ανιονικός ανταλλάκτης Κατιονικός ανταλλάκτης

Διαχωρισμός σε κολώνα DEAE-κυτταρίνης Δείγμα Διαχωρισμός πρωτεϊνών και συλλογή κλασμάτων ΄Εκλουση με: αύξηση ιονικής ισχύος μεταβολή pH Φωτομέτρηση κλασμάτων

Αυτοματοποιημένη συλλογή κλασμάτων Ρυθμιστικό διάλυμα Κολώνα ανταλλάκτη Φωτόμετρο & Καταγραφικό Συλλέκτης κλασμάτων

Δ1: Μαζική απομόνωση ανοσοσφαιρινών Σε κωνική βάζουμε: 5 ml DEAE κυτταρίνη Αφαιρούμε το φωσφορικό ρυθμιστικό διάλυμα (~4-5 ml) Προσθέτουμε 200 μl ορό και αναδεύουμε ΗΠΙΑ Επώαση: 45 min, θερμοκρασία δωματίου / ανάδευση ανά 15 λεπτά / στο Τ Φυγοκέντρηση: 1000 στροφές, 5 λεπτά Συλλέγουμε το υπερκείμενο = ΥΠΕΡΚΕΙΜΕΝΟ Α (ανοσοσφαιρίνες) Στο ίζημα προσθέτουμε: 5 ml φωσφορικό ρυθμιστικό διάλυμα/1 Μ KCl Επώαση: 15 min, θερμοκρασία δωματίου Συλλέγουμε το υπερκείμενο = ΥΠΕΡΚΕΙΜΕΝΟ Β (υπόλοιπες πρωτεΐνες) Φωτομέτρηση Α και Β: στα 280 nm στα 260 nm

Δ2: Χρωματογραφία σε στήλη Αφαιρούμε το υπερκείμενο ρυθμιστικό διάλυμα από το πάνω μέρος της στήλης Κλείνουμε τη στρόφιγγα ροής Επιστιβάζουμε ΠΡΟΣΕΚΤΙΚΑ 200 μl ορό Ανοίγουμε τη στρόφιγγα ροής Μόλις περάσει το δείγμα, προσθέτουμε 3 ml ρυθμιστικό διάλυμα Αρχίζουμε να συλλέγουμε κλάσματα (3 ml ανά σωληνάριο – μαύρη γραμμή) Προσθέτουμε άλλα 5 ml ρυθμιστικό διάλυμα Σταματάμε όταν συλλέξουμε 6 κλάσματα (Νο 1 – 6) Αφήνουμε να περάσουν άλλα 10 ml ρυθμιστικό (τα πετάμε στο δοχείο) Αφαιρούμε το επιπλέον ρυθμιστικό από το πάνω μέρος της στήλης Προσθέτουμε 5 ml φωσφορικό ρυθμιστικό διάλυμα/1 Μ KCl Συνεχίζουμε να συλλέγουμε κλάσματα των 3 ml Σταματάμε όταν συλλέξουμε 6 κλάσματα (Νο 7 - 12) Ξεπλένουμε με τουλάχιστον 10 ml από το αρχικό ρυθμιστικό (στο δοχείο) Φωτομέτρηση όλων των κλασμάτων: στα 280 nm στα 260 nm

Πρότυπο διάλυμα αλβουμίνης (ml) Δ4: Ποσοτικός προσδιορισμός πρωτεϊνών Αριθμός σωληναρίου Πρότυπο διάλυμα αλβουμίνης (ml) Ορός (ml) Νερό 1 (τυφλό) - 1,0 2 0,1 0,9 3 0,2 0,8 4 0,5 5 6 7 (άγνωστο) 0,05 0,95 8 (άγνωστο) 0,10 σωλ. 1 Φυσιολογία Ζώων σωλ. 7 σωλ. 8 Προσθέτουμε 4 ml διουρίας (αντλία) – Αναδεύουμε Επώαση : 30 λεπτά, θερμοκρασία δωματίου Φωτομέτρηση ως προς το τυφλό στα 550 nm (πάγκος)

Αποτελέσματα – Υπολογισμοί (Ι) Δ1: συγκέντρωση πρωτεϊνών στα Α και Β (mg/ml) C (mg/ml) = 1.55 x OD280nm – 0.77 x OD260 nm για το τμήμα και την ομάδα σας Δ2: συγκέντρωση πρωτεϊνών στα 12 κλάσματα C (mg/ml) = 1.55 x OD280nm – 0.77 x OD260 nm για την ομάδα σας πίνακας (mg/κλάσμα) και γραφική παράσταση (mg/ml) Δ4: πρότυπη καμπύλη αλβουμίνης (Φυσιολογία Ζώων) συγκέντρωση ολικών πρωτεϊνών στα δείγματα του ορού για την ομάδα σας (mg/ml)

Αποτελέσματα – Υπολογισμοί (ΙΙ) Για το φυλλάδιό σας Μαζική απομόνωση : C πρωτεΐνης mg/ml και mg/κλάσμα για Α και Β για το τμήμα και την ομάδα σας 2. Χρωματογραφία σε στήλη : Πίνακας (mg/ml και mg/κλάσμα) και γραφική παράσταση (όπου άξονας χ: αριθμός κλάσματος, άξονας ψ: mg/ml ή mg/κλάσμα) Ποσοτικός προσδιορισμός (αναλυτικά) : ολικές πρωτεΐνες ορού (mg/ml) % ανάκτηση ανοσοσφαιρινών (IgG) και % ανάκτηση ολικών πρωτεϊνών για μαζική (τμήμα και ομάδα) και στήλη (ομάδα) 5. Ποια μέθοδος είναι πιο ευαίσθητη και γιατί?