Εθνικό και Καποδιστριακό Πανεπιστήμιο Αθηνών Τμήμα Φαρμακευτικής Τομέας Φαρμακευτικής Χημείας Διερεύνηση του ρόλου της GSK3β στην βλάβη ισχαιμίας και επαναιμάτωσης και της συσχέτισής της με τον mPTP in vivo με τη χρήση νέων εκλεκτικών αναστολέων παραγώγων ινδιρουμπίνης. Π.Ε.Νικολάου1, Π. Εφεντάκης1, N. Gaboriaud-Kolar1, ΣΙ. Μπιμπλή1, Β. Μυριανθόπουλος, ΑΛ. Σκαλτσούνης1, Α. Παπαπετρόπουλος1, ΕΚ. Ηλιοδρομίτης2,Ι. Ανδρεάδου1-(1)Πανεπιστήμιο Αθηνών,Τμήμα Φαρμακευτικής, Αθήνα, Ελλάδα (2)Β’ Καρδιολογική Κλινική Πανεπιστημιακό Γενικό Νοσοκομείο «Αττικό» , Αθήνα, Ελλάδα Παρασκευή 20/10/2017 Νικολάου Π. Ε.

Η μυοκαρδιακή βλάβη Ισχαιμίας /Επαναιμάτωσης (I/R) Cardioprotective strategies Pre conditioning Post Remote conditioning Pharmacological conditioning Hausenloy, D. J. & Yellon, D. M. ,2013 J. Clin. Invest. 123, 92–100 Παρασκευή 20/10/2017 Νικολάου Π. Ε.

Μηχανισμοί μείωσης της βλάβης επαναιμάτωσης: Η συμμετοχή GSK3β και του mPTP στον καταρράκτη RISK Heusch et al.,2015. Circ. Res. 116, 674–699 Παρασκευή 20/10/2017 Νικολάου Π. Ε.

Ο ρόλος της GSK3β στην βλάβη της επαναιμάτωσης δεν είναι πλήρως διευκρινισμένος Gomez, et al., Inhibition of GSK3β by Postconditioning Is Required to Prevent Opening of the Mitochondrial Permeability Transition Pore During Reperfusion. Circulation 117, 2761–2768 (2008). Nishino, Y. et al. Glycogen synthase kinase-3 inactivation is not required for ischemic preconditioning or postconditioning in the mouse. Circ. Res. 103, 307–314 (2008). Yadav,et al., Modulation of the cardioprotective effect of ischemic preconditioning in hyperlipidaemic rat heart. Eur. J. Pharmacol. 643, 78–83 (2010). Yadav,et al., Involvement of GSK-3β in attenuation of the cardioprotective effect of ischemic preconditioning in diabetic rat heart. Mol. Cell. Biochem. 343, 75–81 (2010). Παρασκευή 20/10/2017 Νικολάου Π. Ε.

Οι 3’,6 υποκατεστημένες ινδιρουμπίνες ως αναστολείς της GSK3β Compound IC50 (μΜ) R Substitute BIO 0.005 R: H MLS2776 0.0033 MLS2777 0.0070 MLS2778 0.060 MLS2779 0.0050 Βασικός δομικός σκελετός των ινδιρουμπινών Μεγαλύτερη εκλεκτικότητα Βελτιωμένη υδατοδιαλυτότητα Vougogianopoulou et al., J Med Chem, 2008, 51, 6421-6431 Παρασκευή 20/10/2017 Νικολάου Π. Ε.

1: Μελέτη της καρδιοπροστατευτικής δράσης των μορίων σε in vivo μοντέλο I/R κονίκλων Παρασκευή 20/10/2017 Νικολάου Π. Ε.

Οι αναστολείς της GSK3β μειώνουν την έκταση του εμφράγματος Το % ποσοστό της μείωσης του μεγέθους του εμφράγματος υπολογίστηκε ως: 80.98% για την ομάδα MLS2776, 44.00% για την ομάδα MLS2777, 78.69% για την ομάδα MLS2778, 40.45% για την ομάδα MLS2779 και 30.34% για την ομάδα BIO . ††† ††† ANOVA and Tykey as post hoc p< .05 , ** p< .01, *** p< .001, σε σύγκριση με το Control ††† p< .001, σε σύγκριση με την BIO Παρασκευή 20/10/2017 Νικολάου Π. Ε.

Αποτελέσματα της in vivo αναστολής της GSK3β (S9) Λήψη μυοκαρδιακού ιστού στο 10ο λεπτό της επαναιμάτωσης H in vivo αναστολή της GSK3β (S9) δεν επηρεάζει το μέγεθος του εμφράγματος * * * Παρασκευή 20/10/2017 Νικολάου Π. Ε.

Μελέτη της απευθείας επίδρασης των παραγώγων στη διάνοιξη του mPTP Απομόνωση μιτοχονδρίων από την αριστερή κοιλία κονίκλων (Control) Τεχνική CRC: Ανθεκτικότητα των μιτοχονδρίων στη [Ca 2+] Τα μόρια δεν αναστέλλουν άμεσα τον mPTP Παρασκευή 20/10/2017 Νικολάου Π. Ε.

Η GSK3β εντοπίζεται κυρίως στο κυτοσόλιο κάτω από φυσιολογικές συνθήκες οξυγόνωσης β-tubulin COXIV Mitochondria Cytosol Παρασκευή 20/10/2017 Νικολάου Π. Ε.

Η GSK3β μπορεί να μετατοπιστεί στα μιτοχόνδρια σε συνθήκες οξειδωτικού στρες Σε συνθήκες I/R; Εξαρτώμενη από την ενεργότητα, μετατόπιση της GSK3β στα μιτοχόνδρια κάτω από συνθήκες οξειδωτικού στρές Tanno, et al.,2014, J Biol Chem.,Oct 17; 289(42): 29285–29296. Παρασκευή 20/10/2017 Νικολάου Π. Ε.

2: Μελέτη της φυσιολογίας της κινάσης σε I/R μιτοχόνδρια Η εντόπιση της GSK3β 30 min Ischemia 8 min Reperfusion Παραλαβή μυοκαρδιακού ιστού από την αριστερή κοιλία ΠροσδιορισμόςCRC WB: Προσδιορισμός της εντόπισης της GSK3β pGSK3β (S9) total GSK3β COX IV β- tubulin Mitochondria Cytosol MC MI CC CI Παρασκευή 20/10/2017 Νικολάου Π. Ε.

2: Μελέτη της φυσιολογίας της κινάσης σε I/R μιτοχόνδρια Παραλαβή μυοκαρδιακού ιστού από την αριστερή κοιλία WB: Προσδιορισμός της εντόπισης της GSK3β 30 min Ischemia 8 min Reperfusion Προσδιορισμός CRC Παρασκευή 20/10/2017 Νικολάου Π. Ε.

Συμπεράσματα Η αναστολή της GSK3β δεν συσχετίζεται με την καρδιοπροστασία όπως φάνηκε από την χρήση των φαρμακολογικών παραγόντων με διαφορετική ανασταλτική ικανότητα. Η GSK3β δεν μετατοπίζεται στα μιτοχόνδρια στο 8ο λεπτό της επαναιμάτωσης και δεν συσχετίζεται με τον mPTP Παρασκευή 20/10/2017 Νικολάου Π. Ε.

Ευχαριστίες Η ομάδα μας: Ανδρεάδου Ιωάννα Τσουμάνη Μαρία Την Ελληνική Καρδιολογική Εταιρεία για την ευγενική της πρόσκληση Η ομάδα μας: Ανδρεάδου Ιωάννα Τσουμάνη Μαρία Εφεντάκης Παναγιώτης Κρεμαστιώτης Γιώργος Νικολάου Παναγιώτα Ε. Οι συνεργάτες μας: Ηλιοδρομίτης Ευστάθιος Κ. Παπαπετρόπουλος Αντρέας Σκαλτσούνης Αλέξανδρος Λέανδρος Gaboriaud-Kolar Nicolas Μυριανθόπουλος Βασίλης Μπιμπλή Σοφία ‘Ιριδα . Παρασκευή 20/10/2017 Νικολάου Π. Ε.

Ευχαριστώ πολύ για την προσοχή σας Ερωτήσεις; Νικολάου Παναγιώτα Ευσταθία nayanikolaou@hotmail.com Παρασκευή 20/10/2017 Νικολάου Π. Ε.