Απομόνωση και Tαυτοποίηση Κυττάρων του Ανοσοποιητικού Συστήματος

Slides:



Advertisements
Παρόμοιες παρουσιάσεις
ΑΠΟΜΟΝΩΣΗ ΝΟΥΚΛΕΪΚΩΝ ΟΞΕΩΝ (DNA ΚΑΙ RNA) AΠΟ ΦΥΤΙΚΑ ΚΥΤΤΑΡΑ
Advertisements

Τα μέρη του μικροσκοπίου
ΠΕΙΡΑΜΑΤΙΚΕΣ ΑΣΚΗΣΕΙΣ ΒΙΟΛΟΓΙΑΣ
ΤΟ ΑΙΜΑ Το αίμα είναι υγρός ιστός που αποτελείται από : 1. το πλάσμα
Δομή και Λειτουργία του Αίματος
Ε Κ Φ Ε Σ Ε Ρ Ρ Ω Ν ΕΡΓΑΣΤΗΡΙΑΚΕΣ ΑΣΚΗΣΕΙΣ ΒΙΟΛΟΓΙΑΣ Γ΄ ΛΥΚΕΙΟΥ
ΕΚΦΕ ΣΕΡΡΩΝ Εργαστηριακές Ασκήσεις Β΄ Γυμνασίου
Επιμέλεια: Σαμαράς Πασχάλης
Βιολογία Α’ Λυκείου 3. Κυκλοφορικό σύστημα.
Τα συστατικά του αίματος Ομάδες Αίματος - Παράγοντας Ρέζους
ΠΕΙΡΑΜΑΤΙΚΕΣ ΑΣΚΗΣΕΙΣ ΒΙΟΛΟΓΙΑΣ
Επιμέλεια: Ελευθερία Φανουράκη
Κύτταρα αίματος Ερυθρά αιμοσφαίρια Αιμοφόρο αγγείο Λευκό αιμοσφαίριο
ΠΕΙΡΑΜΑΤΙΚΕΣ ΑΣΚΗΣΕΙΣ ΒΙΟΛΟΓΙΑΣ
Επιμέλεια: Ελευθερία Φανουράκη
ΕΡΓΑΣΤΗΡΙΑΚΕΣ ΑΣΚΗΣΕΙΣ ΒΙΟΛΟΓΙΚΩΝ ΕΠΙΣΤΗΜΩΝ
ΠΕΙΡΑΜΑΤΙΚΕΣ ΑΣΚΗΣΕΙΣ ΒΙΟΛΟΓΙΑΣ
Αιμοπετάλια ή Θρομβοκύτταρα Platelets
Πρόβλημα φυγοκέντρησης
Προσδιορισμός αριθμού σπερματοζωαρίων (1 από 6)
ΤΜΗΜΑ ΤΕΧΝΟΛΟΓΙΑΣ ΤΡΟΦΙΜΩΝ ΕΡΓΑΣΤΗΡΙΟ ΒΙΟΜΗΧΑΝΙΚΗΣ ΜΙΚΡΟΒΙΟΛΟΓΙΑΣ
Χρώση Μπλέ του μεθυλενίου- Κινητική
Πρόβλημα φυγοκέντρησης
Aπομόνωση DNA από φυτικά κύτταρα Επιμέλεια: Καπασά Μαρία Βιολόγος, MSc, PhD.
Αγγελική Φωτεινοπούλου
ΕΥΡΙΔΙΚΗ ΗΛΙΑ 8ο ΕΞΑΜΗΝΟ Α.Μ : Z15880 ΑΦΠ ΚΑΙ ΓΜ ΠΡΑΚΤΙΚΗ ΣΤΟ ΕΡΓΑΣΤΗΡΙΟ ΕΔΑΦΟΛΟΓΙΑΣ ΚΑΙ ΓΕΩΡΓΙΚΗΣ ΧΗΜΕΙΑΣ- Γ.Π.Α 9 ΙΟΥΛΙΟΥ-31 ΑΥΓΟΥΣΤΟΥ 2012.
Συγκριτική Αιματολογία Σκοπός : η μελέτη και η σύγκριση αιματολογικών παραμέτρων σε διάφορα είδη ζώων Ράνια Τσιτσιλώνη Σύλβια Παπαβασιλείου.
Ασκήσεις Ανοσολογίας Π.Παπαζαφείρη Α. Μαρμάρη ΔΟΚΙΜΑΣΙΑ ΚΥΤΤΑΡΟΤΟΞΙΚΟΤΗΤΑΣ Εισαγωγή MTT TNFα Πειραματική διαδικασία Υπολογισμοί.
ΕΡΓΑΣΤΗΡΙΟ ΦΥΣΙΟΛΟΓΙΑΣ ΛΕΥΚΑ ΑΙΜΟΣΦΑΙΡΙΑ. ΛΕΥΚΑ ΑΙΜΟΣΦΑΙΡΙΑ Ανήκουν στο ανοσοποιητικό σύστημα, το οποίο έχει ως σκοπό να προστατεύει τον οργανισμό από.
ΙΣΤΟΧΗΜΙΚΗ ΧΡΩΣΗ ΗΩΣΙΝΗΣ-ΑΙΜΑΤΟΞΥΛΙΝΗΣ Θεοδώρου Χάρις – Β15943 Επιβλέπων: Μπαλάσκας Χρήστος, Επίκουρος Καθηγητής Εργαστήριο Ανατομίας και Φυσιολογίας Αγροτικών.
΄Ασκηση 10  Έμμορφα συστατικά του αίματος Ερυθρά αιμοσφαίρια Λευκά αιμοσφαίρια Λευκοκυτταρικός τύπος  Αιμόλυση των ερυθροκυττάρων  Αιματολογικές παράμετροι.
ΤΟ ΑΙΜΑ Το αίμα είναι υγρός ιστός που αποτελείται από : 1. το πλάσμα
Διαδικασία απομόνωσης γενωμικού DNA από βιολογικό υλικό
Aπομόνωση DNA από επιθηλιακά κύτταρα παρειάς
ΟΡΓΑΝΑ ΤΟΥ ΑΝΟΣΟΠΟΙΗΤΙΚΟΥ ΣΥΣΤΗΜΑΤΟΣ
3.4 Η μεταφορά και η αποβολή ουσιών στον άνθρωπο
Απομόνωση DNA από φυτικούς οργανισμούς!.
1ο ΕΚΦΕ Ηρακλείου Ε. Φανουράκη
Ασκήσεις Ανοσολογίας Π. Παπαζαφείρη. Α. Φωτενοπούλου. Ουρ
Ασκήσεις Έμμορφα συστατικά του αίματος
Απομόνωση και ταυτοποίηση
Παρατήρηση φυτικών και ζωικών ιστών
Mικτή Λεμφοκυτταρική Αντίδραση (Mixed Lymphocyte Reaction; MLR)
Βασικές αιματολογικές αναλύσεις
Απομόνωση και Tαυτοποίηση Ανοσοποιητικού Συστήματος
Απομόνωση και ταυτοποίηση
Απομόνωση και ταυτοποίηση A. Φωτεινοπούλου, Α. Μαρμάρη
Μικροσκοπική παρατήρηση στομάτων φύλλων, καταφρακτικών κυττάρων και χλωροπλαστών Άσκηση 4 εργαστηριακού οδηγού Β ΤΑΞΗ ΛΥΚΕΙΟΥ Βιολογία Γ.Παιδείας.
Εργαστήριο Συγκριτική Ανοσολογία ΜΕΛΕΤΗ ΤΩΝ ΔΡΑΣΤΙΚΩΝ ΛΕΙΤΟΥΡΓΙΩΝ
Αγγελική Φωτεινοπούλου
Απομόνωση και Tαυτοποίηση Ανοσοποιητικού Συστήματος
Mικτή Λεμφοκυτταρική Αντίδραση (Mixed Lymphocyte Reaction; MLR)
ΑΣΚΗΣΗ 9 ΑΙΜΟΣΥΓΚΟΛΛΗΣΗ Πατήστε Esc να κλείσει η προβολή.
Απομόνωση και ταυτοποίηση Ρ. Τσιτσιλώνη, Π. Παπαζαφείρη
Απομόνωση και Tαυτοποίηση Ανοσοποιητικού Συστήματος
Απομόνωση και Tαυτοποίηση Κυττάρων του Ανοσοποιητικού Συστήματος
Απομόνωση και ταυτοποίηση Ανοσοσφαιρινών
Αντιδράσεις κατακρήμνισης Ανοσοδιάχυση (άσκηση 5) Ag: ορός ανθρώπου
Mικτή Λεμφοκυτταρική Αντίδραση (Mixed Lymphocyte Reaction; MLR)
ΠΑΡΑΣΚΕΥΗ ΠΟΥΛΟΥ, βιολόγοε
Απομόνωση και Tαυτοποίηση Κυττάρων του Ανοσοποιητικού Συστήματος
Κλινική βιοχημεία Αίμα Ανδρέα Παόλα Ρόχας Χιλ
Ασκήσεις Έμμορφα συστατικά του αίματος
Μελέτη των οργάνων και κυττάρων του Α.Σ.
Mικτή Λεμφοκυτταρική Αντίδραση (Mixed Lymphocyte Reaction; MLR)
Απομόνωση και ταυτοποίηση Ανοσοσφαιρινών
Απομόνωση και Tαυτοποίηση Κυττάρων του Ανοσοποιητικού Συστήματος
Π.Παπαζαφείρη , Α. Φωτεινοπούλου
ΜΙΚΡΟΣΚΟΠΙΑ & ΜΙΚΡΟΣΚΟΠΙΑ
Ασκήσεις Έμμορφα συστατικά του αίματος
Μεταγράφημα παρουσίασης:

Απομόνωση και Tαυτοποίηση Κυττάρων του Ανοσοποιητικού Συστήματος Άσκηση 3 Απομόνωση και Tαυτοποίηση Κυττάρων του Ανοσοποιητικού Συστήματος Ρ. Τσιτσιλώνη, Λ. Φωτεινοπούλου, Σ. Παπαβασιλείου

κοινό αρχέγονο πολυδύναμο κύτταρο (μυελός των οστών) Έμμορφα στοιχεία του αίματος μυελική σειρά κοινό αρχέγονο πολυδύναμο κύτταρο (μυελός των οστών) μονοβλαστική σειρά λεμφική σειρά

Προέλευση εμμόρφων στοιχείων του αίματος Θύμος ?

Απομόνωση μονοπύρηνων αίματος Επιστίβαση πλάσμα PBMC Ficoll-Paque

Μέτρηση μονοπύρηνων αίματος Ανάμειξη PBMC με Trypan blue

Αιμοκυτταρομέτρο (πλάκα Neubauer) (1/5x1/5x1/10) 1x1x1/10

Προέλευση εμμόρφων στοιχείων του αίματος ?

Mορφολογία μακροφάγων

Φαγοκυτταρική ικανότητα μακροφάγων Σινική μελάνη

Δ1: Απομόνωση λεμφοκυττάρων Σε γυάλινο σωληνάριο βάζουμε: 3 ml Ficoll-Paque Επιστιβάζουμε προσεκτικά 4 ml αίματος αραιωμένου 1:1 με διάλυμα αλάτων Φυγοκέντρηση: 1800 στροφές, 20 λεπτά Αφαιρούμε προσεκτικά το πλάσμα με πιπέττα Pasteur (πετάμε) Συλλέγουμε τη στιβάδα των λεμφοκυττάρων/PBMC με την ίδια Pasteur Μεταφέρουμε τα λεμφοκύτταρα/PBMC σε πλαστικό σωληνάριο (λεμφ.) Προσθέτουμε 5 ml διάλυμα αλάτων Φυγοκέντρηση: 1400 στροφές, 10 λεπτά (ξέπλυμα Ficoll) Διαλυτοποιούμε προσεκτικά το ίζημα των λεμφοκυττάρων/PBMC Επαναιωρούμε σε 1 ml διαλύματος αλάτων

Δ2: Προσδιορισμός νεκρών-ζωντανών λεμφοκ. Στο γυάλινο σωληνάριο (χωρίς ένδειξη) αναμειγνύουμε: 0,45 ml εναιωρήματος λεμφοκυττάρων/PBMC 0,05 ml χρωστικής Trypan blue Τοποθετούμε μικρό δείγμα σε πλάκα Neubauer (και στις δύο θέσεις μέτρησης) Στις περιοχές μέτρησης λευκοκυττάρων (τουλάχιστον σε 2/4): μετρούμε τα ζωντανά λεμφοκύτταρα/PBMC (άχρωμα) μετρούμε τα νεκρά λεμφοκύτταρα/PBMC (βαμμένα μπλε)

Δ3: Φαγοκυτταρική ικανότητα μακροφάγων περιτοναϊκής κοιλότητας Θα απομονώσουμε μακροφάγα: Ενίουμε 10 ml φυσιολογικού ορού στην περιτοναϊκή κοιλότητα ποντικού Αναρρόφηση υγρού, συλλογή σε γυάλινο σωληνάκι Φυγοκέντρηση: 1300 rpm για 5 min Επαναδιάλυση σε 0,5-1 ml φυσιολογικό ορό και μέτρηση Θα προσθέσουμε σε αντικειμενοφόρο πλάκα: 1 σταγόνα εναιωρήματος μακροφάγων στο κέντρο 1 σταγόνα διαλύματος σινικής μελάνης, ανάδευση Παρατήρηση στο μικροσκόπιο-εστίαση σε ένα πεδίο-παρατήρηση ανά 15 min Χρόνος χρωματισμού μακροφάγου ~ 1-5 sec Χρόνος αποχρωματισμού μακροφάγου ???

Αποτελέσματα – Υπολογισμοί (Ι) Δ1: αριθμός λεμφοκυττάρων/PBMC ανά mm3 και ανά ml αρχικού αίματος για την ομάδα σας θεωρητικός υπολογισμός αναλυτικά Δ2: αριθμός ζωντανών λεμφοκυττάρων/PBMC αριθμός νεκρών λεμφοκυττάρων/PBMC % αναλογία ζωντανών-νεκρών για την ομάδα σας Δ3: σχεδιασμός μακροφάγου πριν και μετά τη χορήγηση χρωστικής χρόνος αποχρωματισμού για την ομάδα σας

Αποτελέσματα – Υπολογισμοί (ΙΙ) Για το φυλλάδιό σας Άσκηση: Πόσα λεμφοκύτταρα/PBMC θα έπρεπε θεωρητικά να έχετε μετρήσει στο ένα τετράγωνο (0,1 mm3) της πλάκας Neubauer? Λεμφοκύτταρα/PBMC ανά mm3 και ανά ml αρχικού αίματος όπως τα μετρήσατε στο δείγμα σας % αναλογία ζωντανών και νεκρών λεμφοκυττάρων/PBMC στο δείγμα σας Σχεδιασμός μακροφάγου πριν και μετά τη χορήγηση σινικής μελάνης 5. Χρόνος αποχρωματισμού (ή ποσοστό περίπου) του μακροφάγου

Αποτελέσματα – Υπολογισμοί (ΙΙΙ) Θεωρητική άσκηση: Έχω 4 ml αίμα προβάτου αραιωμένου 1:1 με διάλυμα αλάτων Διαχωρίζω επιστοιβάζοντας το αίμα σε 3 ml Ficoll-Paque Ξεπλένω με 5 ml διάλυμα αλάτων Επαναιωρώ σε 1 ml διάλυμα αλάτων Παίρνω 0,45 ml εναιώρημα PBMC + προσθέτω 50 μl χρωστικής Trypan blue Mετρώ σε 1 πλευρικό τετράγωνο (0,1 mm3) της Neubauer Αν δεν έχω πουθενά απώλειες, πόσα PBMC θα μετρήσω ???? Ξέρουμε ότι: το πρόβατο έχει 12.000 WBC / mm3 από τα WBC: το 40 % είναι λεμφοκύτταρα, το 1% βασεόφιλα, το 53% ουδετερόφιλα, το 1% ηωσινόφιλα και το 5% μονοκύτταρα