Καλλιέργεια βακτηρίων Άσκηση 1η (α) εργαστηριακού οδηγού Γ ΤΑΞΗ ΛΥΚΕΙΟΥ Βιολογία Γ. Παιδείας

Όργανα και υλικά Λύχνος Bunsen ή γκαζάκι Τρίποδο με πλέγμα 6 αχρησιμοποίητα τρυβλία Petri Γυάλινη ράβδος Ποτήρι ζέσεως των 500 ml Σύρμα εμβολιασμού ή βελόνα ανατομίας 170 ml νερό απεσταγμένο ή απιονισμένο ή εμφιαλωμένο (μη χλωριωμένο ) 2,5g Agar 1g πεπτόνη Μισό κύβο ζωμού Χώμα Ζυγός ακριβείας

Παρασκευή θρεπτικού Υλικού Στο ζυγό ακριβείας ζυγίζουμε 2,5g Agar και 1g πεπτόνη

Στο ποτήρι ζέσεως των 500 ml ζεσταίνουμε 170ml νερό (κοντά στο σημείο βρασμού) και προσθέτουμε 2,5 g agar Ανακατεύουμε και στην συνέχεια προσθέτουμε την πεπτόνη, 1g και τον μισό κύβο ζωμού ανακατεύοντας συνεχώς

Αφήνουμε το διάλυμα να βράσει για μερικά λεπτά (ανακατεύοντας) προκειμένου να αποστειρωθεί, αλλά προσέχουμε να μην χυθεί

Όταν κρυώσει το υλικό μας (να μπορούμε να πιάσουμε το ποτήρι με γυμνά χέρια), μεταφέρουμε το θρεπτικό υλικό στα πλαστικά τρυβλία Petri. Αφήνουμε το υλικό μας να στερεοποιηθεί Ο Λύχνος Bunsen παραμένει αναμμένος για αποστείρωση

Όταν το θρεπτικό υλικό στερεοποιηθεί αριθμούμε τα τρυβλία από το 1 ως το 6. Αριθμούμε τα τρυβλια αφού τα αναποδογυρίσουμε στην κάτω πλευρά τους και όχι στα καπάκια

ΕΜΒΟΛΙΑΣΜΟΣ το τρυβλίο 2 μένει ανοικτό το τρυβλίο 1 μένει ανοικτό για 5 min έξω από την τάξη το τρυβλίο 1 μένει ανοικτό για 5 min μέσα στην τάξη Ένας μαθητής πλένει τα χέρια του με σαπούνι και χωρίς να τα στεγνώσει ανοίγει το τρυβλίο 4 και το αγγίζει με το δάκτυλό του Ένας μαθητής ανοίγει το τρυβλίο 3 και το αγγίζει με το δάκτυλό του

Αποστειρώνουμε στην φλόγα το σύρμα εμβολιασμού Παίρνουμε λίγο χώμα… Το τρυβλίο 6 το αφήνουμε κλειστό ώστε να χρησιμοποιηθεί ως «μάρτυρας» για σύγκριση με τα άλλα τρυβλία και μολύνουμε το τρυβλίο 5

Τοποθετούμε τα τρυβλία ανάποδα, σε θερμοκρασία δωματίου και μακριά από το ηλιακό φως. Μετά από δύο - τρεις ημέρες ανάλογα με την θερμοκρασία, παρατηρούμε σε ποια από τα αριθμημένα τρυβλία έχουν εμφανιστεί αποικίες (διακρίνονται σα στρογγυλοί κύκλοι) Αν οι αποικίες μας έχουν αναπτυχθεί αρκετά μπορούμε να επιβραδύνουμε τον ρυθμό ανάπτυξής τους αν βάλουμε τα τρυβλία στο ψυγείο

Αποικίες που δημιουργήθηκαν μετά από μια εβδομάδα μάρτυρας

Παρατηρήσεις Για να μην υπάρξουν μολύνσεις καθαρίζουμε και απολυμαίνουμε με οινόπνευμα τον πάγκο εργασίας και μετά το τέλος του πειράματος απολυμαίνουμε τα χρησιμοποιημένα σκεύη με βρασμό για μερικά λεπτά.

ΠΑΡΑΤΗΡΗΣΗ ΒΑΚΤΗΡΙΩΝ ΣΕ ΝΩΠΟ ΠΑΡΑΣΚΕΥΑΣΜΑΤΑ Βάζουμε σε ποτήρι ζέσεως εμφιαλωμένο νερό, λίγα φύλλα από μαρούλι και ψαροτροφή Το σκεπάζουμε με χαρτί και το αφήνουμε σε ζεστό και φωτεινό μέρος

Παρατήρηση μικροοργανισμών (μετά από 3-4 μέρες) Παρατήρηση μικροοργανισμών (μετά από 3-4 μέρες) Την ημέρα του πειράματος, με το σταγονόμετρο, παίρνουμε λίγο νερό από τον λεπτό υμένα που έχει σχηματιστεί στο ποτήρι με την ψαροτροφή και ακολουθεί παρατήρηση στο μικροσκόπιο

Βακτήρια και αντιβιοτικά Άσκηση 1η (β) εργαστηριακού οδηγού Γ ΤΑΞΗ ΛΥΚΕΙΟΥ Βιολογία Γ. Παιδείας

Όργανα και υλικά 6 αποστειρωμένα τρυβλία Petri (εργ. άσκηση 1η(α) Αντιβιοτικό amoxil 10mg/ml Ξύδι Διάλυμα ΝαΟΗ 0,1M Αντισηπτικό 3 σταγονόμετρα Σύρμα εμβολιασμού ή ανατομική βελόνα

Επιλέγουμε ένα τρυβλίο petri από την 1η εργαστηριακή άσκηση όπου έχουν αναπτυχθεί αποικίες βακτηρίων Με την ανατομική βελόνα αφού πρώτα τη αποστειρώσουμε στην φλόγα παίρνουμε υλικό από μία αποικία και μολύνουμε το θρεπτικό υλικό των (5) τρυβλίων Τρόπος εμβολιασμού

Προσθέτουμε στην επιφάνεια του υλικού των (5) τρυβλίων, στα σημεία της μόλυνσης: στο τρυβλίο (1 ) 1ml (10mg) από το αντιβιοτικό. στο τρυβλίο (2 ) 3 σταγόνες από το ξύδι

στο τρυβλίο (3 ) 3 σταγόνες από το διάλυμα ΝαΟΗ . στο τρυβλίο (4 ) 5 ψεκάζουμε με το αντισηπτικό

Στο τρυβλίο (5), που έχει μολυνθεί με βακτήρια δεν προσθέτουμε τίποτε. Θα χρησιμοποιηθεί ως μάρτυρας για να το συγκρίνουμε με τα άλλα τρυβλία Το τρυβλίο (6) παραμένει κλειστό για να χρησιμοποιηθεί ως μάρτυρας σε περίπτωση μόλυνσης του θρεπτικού υλικού Τοποθετούμε τα τρυβλία ανάποδα σε θερμοκρασία δωματίου και μακριά από το ηλιακό φως και μετά από 3 – 4 ημέρες παρατηρούμε αν έχουν αναπτυχθεί αποικίες και καταγράφουμε τις παρατηρήσεις μας για 1-2 εβδομάδες.

12 αποικίες ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ 1 αποικία Καμία αποικία 1 2 3 4 5 αντιβιοτικό ξύδι ΝαΟΗ Αντισηπτικό Καλλιέργεια Καμία αποικία 6 Μόνο θρεπτικό υλικό 1 αποικία Καμία αποικία Το θρεπτικό υλικό δεν έχει μολυνθεί 12 αποικίες

Παρατηρήσεις Για να μην υπάρξουν μολύνσεις καθαρίζουμε και απολυμαίνουμε με οινόπνευμα τον πάγκο εργασίας και μετά το τέλος του πειράματος απολυμαίνουμε τα χρησιμοποιημένα σκεύη με βρασμό για μερικά λεπτά.