ΑΠΟΜΟΝΩΣΗ ΝΟΥΚΛΕΪΚΩΝ ΟΞΕΩΝ

Παρουσίαση με θέμα: "ΑΠΟΜΟΝΩΣΗ ΝΟΥΚΛΕΪΚΩΝ ΟΞΕΩΝ"— Μεταγράφημα παρουσίασης:

1 ΑΠΟΜΟΝΩΣΗ ΝΟΥΚΛΕΪΚΩΝ ΟΞΕΩΝ

2 Λήψη ιστού-κυττάρων

3 Λήψη ιστού-κυττάρων

4 Ομογενοποίηση ιστού-κυττάρων
Ομογενοποίηση ιστού-κυττάρων Μηχανική Ομογενοποίηση Ομογενοποίηση με Υπέρηχους

5 Ομογενοποίηση ιστού-κυττάρων
Ομογενοποίηση ιστού-κυττάρων Μηχανική Ομογενοποίηση

6 Ομογενοποίηση ιστού-κυττάρων
Ομογενοποίηση ιστού-κυττάρων Ομογενοποίηση με Υπέρηχους

7 Διάλυμα Ομογενοποίησης
SDS – απορρυπαντικό EDTA – χυλική ένωση NaCl – σταθεροποίηση DNA Ρυθμιστικό Διάλυμα pH7.5-8

8 Διάλυμα Ομογενοποίησης
SDS – απορρυπαντικό

9 Διάλυμα Ομογενοποίησης
EDTA χυλική ένωση δεσμεύει δισθενή ιόντα Δέσμευση Mg2+  Αναστολή DNAσών Δέσμευση Ca2+  Παρεμπόδιση πήξης αίματος

10 Διάλυμα Ομογενοποίησης
NaCl – σταθεροποίηση DNA Ρυθμιστικό Διάλυμα pH7.5-8

11 Απομάκρυνση Πρωτεϊνών
Πρωτεϊνάση Κ 37oC, 2h

12 Εκχύλιση υδρόφοβων ενώσεων
Οργανικοί Διαλύτες π.χ. Φαινόλη & Χλωροφόρμιο

13 Φυγοκέντρηση

14 Αποτέλεσμα Φυγοκέντρησης
Υδατική Φάση με DNA, RNA, σάκχαρα Μεσόφαση με αμφιπαθείς πρωτεΐνες Οργανική Φάση με Λιπίδια, υδρόφοβες πρωτεΐνες

15 Κατακρήμνιση Νουκλεϊκών Οξέων
Ισοπροπανόλη ή Αιθανόλη Αφυδάτωση μορίων DNA Συσσωμάτωση DNA

16 Κατακρήμνιση Νουκλεϊκών Οξέων

17 Διαφορική Φυγοκέντρηση

18 Διαφορική Φυγοκέντρηση

19 Φυγοκέντρηση σε Κλινές Συγκέντρωσης

20 Τι είναι η ομογενοποίηση ενός ιστού; Τι είναι η εκχύλιση; Τι είναι η φυγοκέντρηση; Γιατί κατά την απομόνωση νουκλεϊκών οξέων χρησιμοποιείται Α. SDS, Β. EDTA, Γ. NaCl, Δ. Ρυθμιστικό Διάλυμα pH7.5-8, Ε. Φαινόλη-Χλωροφόρμιο, ΣΤ. Ισοπροπανόλη Κατά την απομόνωση νουκλεϊκών οξέων μετά την εκχύλιση και τη φυγοκέντρηση σχηματίζονται φάσεις στο διάλυμα. Ποιες είναι αυτές και τι περιέχει καθεμία;