Φασματομετρία Μαζών, MS: Μοριακό Βάρος (Μοριακός Τύπος)

Παρουσίαση με θέμα: "Φασματομετρία Μαζών, MS: Μοριακό Βάρος (Μοριακός Τύπος)"— Μεταγράφημα παρουσίασης:

1 Φασματομετρία Μαζών, MS: Μοριακό Βάρος (Μοριακός Τύπος)
Η πιο σημαντική πληροφορία που μας δίνει κάθε μια από τις τεχνικές φασματοσκοπίας είναι: Φασματομετρία Μαζών, MS: Μοριακό Βάρος (Μοριακός Τύπος) Φασματοσκοπία Υπερύθρου, IR: Χαρακτηριστικές ομάδες Φασματοσκοπία Υπεριώδους-Ορατού, UV-Vis: Συζυγιακό π ηλεκτρονικό σύστημα Φασματοσκοπία Πυρηνικού Μαγνητικού Συντονισμού, NMR: Με ποιον τρόπο συνδέονται οι άνθρακες με τα υδρογόνα.

2 ΦΑΣΜΑΤΟΣΚΟΠΙΑ 1Η-ΝΜR Απορρόφηση ηλεκτρομαγνητικής ακτινοβολίας στην περιοχή των βραχέων ραδιοκυμάτων (102 ΜΗz)  μεταβολή πυρηνικού spin. Τι είναι το spin Θεμελιώδης ιδιότητα της ύλης, όπως η μάζα ή το ηλεκτρικό φορτίο. Αναφέρεται στην αυτοπεριστροφή υποατομικών σωματιδίων (ηλεκτρονίων, νετρονίων, πρωτονίων) γύρω από ένα φανταστικό άξονα. Ο πυρήνας του ατόμου του υδρογόνου έχει ένα πρωτόνιο, το οποίο εκδηλώνει την ιδιότητα του σπιν. Δηλαδή το πρωτόνιο συμπεριφέρεται ως ένα μαγνητικό δίπολο ή ως ένας μικροσκοπικός μαγνήτης.

3 Η κβαντομηχανική μας λέει ότι ένας πυρήνας με σπιν Ι θα έχει 2Ι+1 δυνατούς προσανατολισμούς του σπιν. Χωρίς εξωτερικό μαγνητικό πεδίο (a), αυτοί οι προσανατολισμοί είναι ίσης ενέργειας (προσανατολίζονται τυχαία). Εάν όμως εφαρμοστεί ένα μαγνητικό πεδίο (b), τότε τα επίπεδα της ενέργειας διαχωρίζονται και αποκτούν συγκεκριμένο προσανατολισμό. Μερικά είναι διατεταγμένα παράλληλα προς το εξωτερικό πεδίο, ενώ κάποια άλλα είναι αντιπαράλληλα. Η παράλληλη διάταξη του σπιν έχει μικρότερη ενέργεια.

4 Πυρηνικός – Μαγνητικός – Συντονισμός
Πυρηνικός: Ανίχνευση πυρήνων με σπιν Μαγνητικός: Εφαρμογή μαγνητικού πεδίου Συντονισμός: Οι πυρήνες διεγείρονται με απορρόφηση ακτινοβολίας ΔΕ και μεταβαίνουν από την κατάσταση σπιν χαμηλής ενέργειας σε κατάσταση σπιν υψηλότερης ενέργειας. Κατά την αποδιέγερση (μετάβαση στην αρχική κατάσταση χαμηλής ενέργειας) λαμβάνεται το σήμα. Η διαφορά ενέργειας ΔΕ είναι συνάρτηση της ισχύος του εφαρμοζόμενου πεδίου.

5 Το πρωτόνιο έχει σπιν 1/2 και όταν βρεθεί σε εξωτερικό μαγνητικό πεδίο μπορεί να πάρει δύο προσανατολισμούς (-1/2 και +1/2). Ο παράλληλος προσανατολισμός (ίδια κατεύθυνση με εξωτερικό πεδίο) αντιστοιχεί στην χαμηλότερη, ενεργειακή κατάσταση (+1/2), ενώ ο αντιπαράλληλος στην υψηλότερη ενεργειακή κατάσταση (-1/2) .

6 Η μεγάλη χρησιμότητα της φασματοσκοπίας NMR στη διερεύνηση της δομής των οργανικών ενώσεων έγκειται στο ότι όλα τα πρωτόνια σε ένα μόριο δεν συντονίζονται στην ίδια συχνότητα, αλλά υπάρχει μεταξύ τους διαφορά που οφείλεται στο διαφορετικό χημικό περιβάλλον του καθενός.

7 Οι πυρήνες που προστατεύονται επιπλέον από τα γειτονικά άτομα (δίπλα σε υποκαταστάτες δότες ηλεκτρονίων), χρειάζονται ισχυρότερο εφαρμοζόμενο πεδίο για να συντονιστούν και συνεπώς απορροφούν στη δεξιά πλευρά του φάσματος NMR (μικρές τιμές δ). Αντίθετα, οι πυρήνες που αποπροστατεύονται (πρωτόνια δίπλα ηλεκτροαρνητικά άτομα, π.χ. Ο, Ν, Cl), χρειάζονται ασθενέστερο εφαρμοζόμενο πεδίο για να συντονιστούν και επομένως απορροφούν στην αριστερή πλευρά του φάσματος NMR (μεγάλες τιμές δ).

8 Κλίμακα δ πυρήνων Η

9 Κλίμακα δ πυρήνων Η

10 Spin-Spin σύζευξη Σε ένα δεδομένο μόριο, πρωτόνια με το ίδιο περιβάλλον απορροφούν στην ίδια εφαρμοζόμενη ένταση πεδίου και αποκαλούνται «ισοδύναμα». Η «ισοδυναμία» ή «μη ισοδυναμία» δυο πρωτονίων μπορεί να προσδιοριστεί διερευνώντας αν θα προέκυπτε η ίδια δομή κατά την αντικατάσταση ενός πρωτονίου από μια ομάδα Χ. Αν τα πρωτόνια είναι χημικά ισότιμα, θα σχηματισθεί το ίδιο προϊόν, ανεξάρτητα από το ποιο πρωτόνιο αντικαθίσταται. Αν τα δυο πρωτόνια δεν είναι χημικά ισοδύναμα, θα σχηματιστούν κατά την υποκατάσταση διαφορετικά προϊόντα.

11 Χημικά ισοδύναμα πρωτόνια

12 Η πολλαπλότητα του σήματος που διασπάται υπολογίζεται από τη σχέση:
Χημικά ισότιμα πρωτόνια δεν παρουσιάζουν καμιά μαγνητική αλληλεπίδραση και δίνουν μια απλή κορυφή (s) στο φάσμα (NMR). Χημικά ανισότιμα πρωτόνια όταν βρεθούν σε γειτονικές θέσεις, τότε συμβαίνει αλληλεπίδραση των πυρηνικών spin, που οδηγεί σε διάσπαση του σήματος συντονισμού σε πολλαπλές (σχασμένες) κορυφές. Η αλληλεπίδραση αυτού του είδους ονομάζεται spin-spin σύζευξη. Η πολλαπλότητα του σήματος που διασπάται υπολογίζεται από τη σχέση: (n +1) όπου n τα γειτονικά ισοδύναμα πρωτόνια ως προς το εξεταζόμενο πρωτόνιο.

13 Στο χλωροαιθάνιο CH3αCH2βCl για παράδειγμα έχουμε δύο είδη χημικά ισότιμων πρωτονίων που βρίσκονται σε γειτονικές θέσεις, γι’ αυτό σύμφωνα με τον κανόνα συμβαίνει spin-spin σύζευξη και εμφανίζονται δύο σχασμένες κορυφές. Τα τρία (α) ισοδύναμα πρωτόνια –CH3 γειτονεύουν με τα δύο (β) πρωτόνια της ομάδας –CH2Cl και δίνουν τριπλή (2+1) κορυφή. Ενώ τα δύο (β) πρωτόνια αντίστοιχα που βρίσκονται κοντά σε τρία (α) πρωτόνια δίνουν τετραπλή (3+1) κορυφή.

14 Πολλαπλότητες σπιν Τριπλή κορυφή Τετραπλή κορυφή
Αριθμός ισοδύναμων γειτονικών πρωτονίων Τύπος παρατηρούμενης πολλαπλής επιλογής Λόγος εντάσεων Απλή Singlet (s) 1 Διπλή Doublet (d) 1:1 2 Τριπλή Triplet (t) 1:2:1 3 Τετραπλή Quartet (q) 1:3:3:1 >4 Πολλαπλή multiple Τριπλή κορυφή Τετραπλή κορυφή

15 Πολλαπλότητες σπιν

16 Φάσμα 1H-NMR του CH3CH2Br

17 Φάσμα 1H-NMR του CH3CHICH3

18 Ολοκλήρωση – Εμβαδόν κορυφών και Μέτρηση πρωτονίων
Ολοκλήρωση της κάθε κορυφής (δηλ. μέτρηση του εμβαδού) μπορεί να μας δείξει την αναλογία των πρωτονίων που αντιστοιχούν σε κάθε κορυφή. Τα εμβαδά των ολοκληρωμένων κορυφών καταγράφονται πάνω στο φάσμα σαν μια κλιμακωτή γραμμή, όπου το ύψος του κάθε σκαλοπατιού είναι ανάλογο προς το εμβαδόν της κορυφής. Για να συγκρίνουμε το μέγεθος μιας κορυφής με το αντίστοιχο μιας άλλης, χρησιμοποιούμε απλώς ένα χάρακα και μετρούμε το ύψος κάθε σκαλοπατιού.

19 Ερμηνεία απλών φασμάτων 1Η-NMR
Ο αριθμός των σημάτων και η πολλαπλότητα των κορυφών, μας πληροφορεί πόσα είδη ισοδύναμων πρωτονίων υπάρχουν στο μόριο και μας βοηθάει στην αναγνώριση του αριθμού των γειτονικών πρωτονίων. Το εμβαδόν των σημάτων μας δίνει τον αριθμό των πρωτονίων κάθε είδους. Η χημική μετατόπιση κάθε σήματος μας βοηθάει στην ταυτοποίηση του πρωτονίου με βάση το χημικό περιβάλλον του.

20 Παράδειγμα / Φάσμα 1,3-διχλωροπροπανίου
Το 1,3-διχλωροπροπάνιο έχει δύο είδη πρωτονίων. Τα (Α) πρωτόνια δίνουν μια πενταπλή (n+1=4+1=5) κορυφή, γιατί επηρεάζονται από τα γειτονικά (Β) πρωτόνια. Τα (Β) πρωτόνια δίνουν μια τριπλή (n+1=2+1=3) κορυφή, γιατί επηρεάζονται από τα γειτονικά δύο (Α) πρωτόνια.

21 Παράδειγμα / Φάσμα διαιθυλαιθέρα C4H10O
Ο διαθυλαιθέρας έχει δύο είδη πρωτονίων (CH3CH2OCH2CH3), καθώς είναι συμμετρική ένωση και δίνει μια τριπλή και μια τετραπλή κορυφή που αλληλεπιδρούν, αντιστοιχούν δηλαδή σε γειτονικά πρωτόνια. Τα μεθυλενικά πρωτόνια συντονίζονται σε μεγάλες τιμές δ=3.8, καθώς βρίσκονται δίπλα στο ισχυρά ηλεκτραρνητικό άτομο του οξυγόνου.

22 Παράδειγμα / Φάσμα μεθυλο ισοπροπυλοαιθέρα, C4H10O
Η απορρόφηση των έξι μεθυλικών πρωτονίων (α), η οποία εμφανίζεται κανονικά σε χαμηλές τιμές δ=0.9, σχάζεται σε μια διπλή κορυφή από το απλό γειτονικό πρωτόνιο. Η απορρόφηση του πρωτονίου (β), που εμφανίζεται σε μεγάλες τιμές δ=4.0 λόγω του επαγωγικού φαινομένου του οξυγόνου, σχάζεται σε μια επταπλή κορυφή από τα έξι γειτονικά πρωτόνια (οι μικρές εξωτερικές κορυφές δύσκολα διακρίνονται). Αντίθετα, τα πρωτόνια (γ) που δεν έχουν γειτονικά άλλα πρωτόνια, δίνουν μια απλή κορυφή σε αυξημένες τιμές δ=3.5 λόγω του γειτονικού οξυγόνου.

23 Παράδειγμα / Φάσμα διμεθυλοπροπανικού μεθυλεστέρα C6H12O2

24 Διάφορες ομάδες και τα αντίστοιχα σήματα στα φάσματα 1Η-NMR
Τετραπλή και τριπλή πολλαπλή δύο διπλές ευρεία απλή και διπλή (dd)

25 Παράδειγμα: ένωση με ΜΤ C10H14O

26 Ποια από τις ακόλουθες ενώσεις δίνει το παρακάτω φάσμα 1Η-NMR.
διπλή, πολλαπλή και διπλή κορυφή

27 Μία ένωση με Μ.Τ. C6H12Ο2 δίνει στο φάσμα 1H-NMR δύο απλές κορυφές σε δ=1.2 και δ=2,3 με αναλογία 3:1 και στο φάσμα IR απορρόφηση στα 1730 cm-1. Ποιος είναι ο συντακτικός τύπος της ένωσης. Δικαιολογήστε την απάντηση σας. Να βρεθεί ο Σ.Τ. ένωσης με Μ.Τ. C4H10O2, η οποία δε δίνει καμιά χαρακτηριστική απορρόφηση στο φάσμα ΙR και έχει το παρακάτω φάσμα 1Η-NMR.

28 Να βρεθεί ο Σ. Τ. ένωσης με Μ. Τ
Να βρεθεί ο Σ.Τ. ένωσης με Μ.Τ. C5H10O με βάση τα φάσματά της στο IR και ΝΜR.

29 Να βρεθεί ο Σ. Τ. ένωσης με Μ. Τ
Να βρεθεί ο Σ.Τ. ένωσης με Μ.Τ. C3H8O με βάση τα φάσματά της στο IR και ΝΜR.

30 Ποιο από τα παρακάτω φάσματα 1H-NMR ανήκει στην βουτανόνη

31

32 Πυρηνικός μαγνητικός συντονισμός άνθρακα-13
Ο άνθρακας –13 είναι το μοναδικό ισότοπο του άνθρακα με πυρηνικό spin που απαντά στη φύση, σε μικρό όμως ποσοστό, μόλις 1,1%. Αυτό σημαίνει, ότι μόνον ένας σε κάθε 100 άνθρακες κάποιου οργανικού δείγματος μπορεί να παρατηρηθεί στο NMR και επομένως τα σήματα είναι τόσο ασθενή, ώστε να καλύπτονται από τον τυχαίο ηλεκτρονικό θόρυβο του οργάνου (background). Με την ανάπτυξη όμως διαφόρων τεχνικών, όπως του μέσου όρου σημάτων και του μετασχηματισμού Fourier, τα λαμβανόμενα φάσματα κρίνονται αρκετά ικανοποιητικά. Η χαμηλή φυσική αφθονία του 13C είναι και ένα πλεονέκτημα, καθώς γι’ αυτόν το λόγο δεν παρατηρείται σύζευξη μεταξύ γειτονικών ατόμων 13C, αφού κάτι τέτοιο είναι πολύ απίθανο να συμβεί.

33 Πυρηνικός μαγνητικός συντονισμός άνθρακα-13
Το NMR του άνθρακα αξιοποιεί ένα ισότοπο με μικρή φυσική αφθονία: τον 13C

34 Η αποσύζευξη των υδρογόνων από τους άνθρακες δίνει απλές κορυφές
Οι φασματογράφοι 13C-NMR λειτουργούν με τρόπο, ώστε να επιτευχθεί αποσύζευξη (decoupling) των πυρήνων του 13C με τα γειτονικά πρωτόνια και έτσι παράγεται ένα πολύ απλό φάσμα με μια σειρά απλών κορυφών, μιας από κάθε είδος άνθρακα του μορίου. Κατά συνέπεια, η φασματοσκοπία 13C-NMR μας επιτρέπει να απαριθμήσουμε τους άνθρακες ενός μορίου.

35 Φάσμα 13C NMR του μεθυλοκυκλο-εξανίου με αποσύζευξη υδρογόνου.
Καθένας από τους πέντε μαγνητικά διαφορετικούς τύπους άνθρακα σ’ αυτήν την ένωση προκαλεί μια ξεχωριστή κορυφή σε δ = 23,1, 26,7, 26,8, 33,1 και 35,8 ppm.

36

37 Οι περισσότερες απορροφήσεις του 13C εντοπίζονται μεταξύ 0 και 220 ppm αριστερά του TMS, ενώ η ακριβής χημική μετατόπιση κάθε απορρόφησης εξαρτάται από το ηλεκτρονικό περιβάλλον κάθε πυρήνα 13C. Στο παρακάτω σχήμα δίνονται οι χημικές μετατοπίσεις του 13C ανάλογα με το περιβάλλον του.

38 Άνθρακες συνδεδεμένοι με οξυγόνο, άζωτο ή αλογόνα απορροφούν σε χαμηλότερο πεδίο (αριστερά) σε σχέση με τους άνθρακες στα αλκάνια. Τα ηλεκτροαρνητικά αυτά άτομα έλκουν τα ηλεκτρόνια και ελαττώνουν την ηλεκτρονική πυκνότητα στα γειτονικά τους άτομα άνθρακα, με συνέπεια να μειώνεται η προστασία αυτών των ατόμων άνθρακα, έτσι ώστε να συντονίζονται σε χαμηλότερο πεδίο. Γενικά: άνθρακες με υβριδισμό sp3 απορροφούν στην περιοχή 0-90 δ άνθρακες με υβριδισμό sp2 απορροφούν στην περιοχή δ. Οι καρβονυλικοί άνθρακες διακρίνονται εύκολα και βρίσκονται στο πιο αριστερό τμήμα δ.

39 Χημικές Μετατοπίσεις σε Φάσματα 13C NMR Οργανικών Ενώσεων
Οι χημικές μετατοπίσεις χαρακτηρίζονται από τη μεγάλη έκταση πεδίου, 200 ppm, και μετρώνται σε σχέση με το TMS.

40

41

42 Αριθμός κορυφών σε φάσματα 13C-NMR σε μερικά ισομερή C7H14

43 Αλκάνια Οι άνθρακες των αλκανίων παρουσιάζουν φασματικές γραμμές
στην περιοχή 2-50 ppm σε σχέση με το TMS (0). Όσο πιο υποκατεστημένος είναι ο άνθρακας, τόσο μετατοπίζεται σε χαμηλότερα πεδία (καλείται α- φαινόμενο). Έτσι, οι χημικές μετατοπίσεις για τον 13C των παρακάτω ενώσεων είναι (σε ppm):

44 Για παράδειγμα το φάσμα 13C FT-NMR της ένωσης κ-επτανίου (με αποσύζευξη θορύβου πρωτονίων)
Η φασματική γραμμή στα 14.2 δ οφείλεται στις δύο μεθυλικές ομάδες και οι άλλες στους τρεις τύπους των μεθυλενικών ομάδων. Από τις ενδείξεις των εντάσεων των φασματικών γραμμών η μικρότερη είναι του C4. Η φασματική γραμμή για τον C2 είναι μετατοπισμένη σε χαμηλότερα πεδία από την φασματική γραμμή του C1, κατά 9 ppm, ενώ η φασματική γραμμή για τον C3 έχει μετατοπισθεί επιπλέον κατά δεξιά κατά ~ 9 ppm.

45 Αλκένια Οι άνθρακες του διπλού δεσμού εμφανίζονται στην περιοχή ppm. Φάσμα 13C FT-NMR του 1-δεκενίου. Φασματικές γραμμές: (1) δ, (2) δ, (3) 34.1 δ, (4) 32.2 δ, (5) 29.8 δ, (6) 29.6 δ, (7) 29.4 δ, (8) 29.2 δ, (10) 14.2 δ.

46 Αλκίνια Οι τιμές των χημικών μετατοπίσεων για τα άτομα του άνθρακα του τριπλού δεσμού είναι μεταξύ των τιμών των αλκανίων και αλκενίων, στην περιοχή ppm.

47 Αρωματικές ενώσεις Οι χημικές μετατοπίσεις των αρωματικών 13C βρίσκονται στην ίδια περιοχή με τα αλκένια, ppm. Η χημική μετατόπιση των βενζολικών 13C παρουσιάζεται στα δ και επηρεάζεται άμεσα από τους υποκαταστάτες. ο-βρωμοανισόλη

48 Τιμές των χημικών μετατοπίσεων σε υποκατεστημένο βενζολικό δακτύλιο

49 Καρβονυλικές ενώσεις Ο άνθρακας του καρβονυλίου είναι ισχυρά αποθωρακισμένος από το ηλεκτραρνητικό οξυγόνο. Έτσι, οι χημικές μετατοπίσεις είναι στην περιοχή ppm.

50 Αλκοόλες, αιθέρες και αλκυλαλογονίδια
Οι χημικές μετατοπίσεις των α-, β- και γ- ανθράκων επηρεάζονται από τις χαρακτηριστικές ομάδες —OH, —O — και Χ = Cl, Br, I, F κλπ. Όσο πιο ηλεκτραρνητική η ομάδα τόσο μετατοπίζεται η χημική μετατόπιση προς χαμηλά πεδία λόγω ηλεκτρονικής αποθωράκισης.

51 Διαφοροποίηση ισομερών με 13C NMR
Σχεδιάστε τις δομές των πέντε πιθανών ισομερών του εξανίου, C6H14. Ένα από αυτά δίνει τρεις κορυφές στο φάσμα 13C NMR σε δ = 13,7, 22,7 και 31,7 ppm. Βρείτε τη δομή.

52 Χρόνοι αποδιέγερσης. Εντάσεις σημάτων
Η ένταση του σήματος εξαρτάται από το πλήθος των πυρήνων που απορροφούν ενέργεια για να μεταβούν στη διεγερμένη κατάσταση. Στα φάσματα του άνθρακα που χρειαζόμαστε πολλές επαναλαμβανόμενες μετρήσεις (σαρώσεις) οι τεταρτοταγείς άνθρακες εμφανίζουν μικρότερα σήματα λόγω μεγάλων χρόνων αποδιέγερσης. Αν σε μία ένωση λόγω συμμετρίας δυο άνθρακες έχουν ταυτόσημο σήμα και παραπλήσιο χρόνο αποδιέγερσης με έναν άλλο άνθρακα τότε θα εμφανίζουν διπλάσιας έντασης κορυφή από τον μεμονωμένο άνθρακα.

53 Παράδειγμα / Φάσμα οξικού αιθυλεστέρα
Ο οξικός αιθυλεστέρας έχει τέσσερα διαφορετικά είδη άνθρακα και επομένως το φάσμα του 13C αποτελείται από τέσσερις κορυφές. Χαρακτηριστικό είναι το σήμα του καρβοξυλικού άνθρακα στα 190 δ. Ενώ ο μεθυλενικός άνθρακας συντονίζεται στα 70 δ, γιατί βρίσκεται κοντά σε ηλεκτροαρνητικό άτομο (-Ο).

54 Παράδειγμα / Φάσμα ακετοφαινόνης
Η ακετοφαινόνη έχει έξι είδη άνθρακα, με τους τέσσερις αρωματικούς άνθρακες στην περιοχή δ, τον καρβονυλικό στα 198 δ και τον μεθυλικό στα 27 δ.

55 Παράδειγμα / Φάσμα ακετόνης, CH3COCH3
Η κορυφή στα 78 δ οφείλεται στο διαλύτη το CDCl3 (δευτεριωμένο χλωροφόρμιο). Παρατηρείται μια κορυφή για τους δύο μεθυλικούς άνθρακες και μια κορυφή στα 205 δ για τον καρβονυλικό άνθρακα.

56 Παράδειγμα / Φάσμα μεθυλο-αιθυλοκετόνης, CH3COCH2CH3
Η ένωση έχει τέσσερα είδη άνθρακα: έναν καρβονυλικό που δίνει την κορυφή στα 210 δ, το μεθυλικό και το μεθυλενικό που βρίσκονται κοντά στο καρβονύλιο και δίνουν κορυφές σε μεγαλύτερες τιμές δ σε σχέση με τον μεθυλικό άνθρακα της αιθυλομάδας, που δίνει κορυφή στα 10 δ.

57

58

59

60

61 ΦΑΣΜΑΤΟΣΚΟΠΙΑ DEPT – 13C-NMR
Αναγνώριση σημάτων που οφείλονται σε CH3, CΗ2, CH και τεταρτοταγείς άνθρακες. 1ο στάδιο: καταγραφή φάσματος αποσύζευξης για τον εντοπισμό των χημικών μετατοπίσεων όλων των ανθράκων 2ο στάδιο: Καταγράφεται υπό ειδικές συνθήκες ένα δεύτερο φάσμα, αποκαλούμενο DEPT-90, όπου εμφανίζονται μόνο σήματα οφειλόμενα σε τριτοταγείς άνθρακες CH. Σήματα από CH3, CΗ2 και τεταρτοταγείς άνθρακες δεν καταγράφονται. 3ο στάδιο: Καταγράφεται ένα τρίτο φάσμα, αποκαλούμενο DEPT-135, με τέτοιες συνθήκες, ώστε οι συντονισμοί CH3 και CH να εμφανίζονται ως θετικά σήματα και οι συντονισμοί των CH2 να εμφανίζονται ως αρνητικά σήματα, δηλ. ως κορυφές κάτω από τη βασική γραμμή.

62

63

64

65