Κατασκευή cDNA βιβλιοθήκης.

Παρουσίαση με θέμα: "Κατασκευή cDNA βιβλιοθήκης."— Μεταγράφημα παρουσίασης:

1 Κατασκευή cDNA βιβλιοθήκης

2 Αν υποθέσουμε ότι σε κάποιο βακτηριακό κλώνο μιας γονιδιωματικής βιβλιοθήκης έχει εισαχθεί «ανέπαφο» ένα γονίδιο, θα ήταν άραγε δυνατόν το γονίδιο αυτό να εκφραστεί; Μια cDNA βιβλιοθήκη είναι ένα σύνολο βακτηριακών κλώνων που περιέχουν αντίγραφα του mRNA όλων των γονιδίων που εκφράζονται σε συγκεκριμένα κύτταρα ( ηπατικά, παγκρεατικά, πρόδρομα ερυθροκύτταρα, κλπ)

3 Στάδια κατασκευής cDNA βιβλιοθήκης

4

5 Στάδια κατασκευής cDNA βιβλιοθήκης
Απομόνωση ώριμου mRNA από τα κύτταρα «στόχους» Σύνθεση complementary DNA: σχηματίζονται υβριδικά μόρια mRNA-cDNA Το mRNA διασπάται με χημικές ουσίες ή αποχωρίζεται από την συμπληρωματική αλυσίδα cDNA με θέρμανση Το cDNA γίνεται δίκλωνο: Τα δίκλωνα μόρια DNA εισάγονται σε πλασμίδια Τα πλασμίδια εισάγονται στα κύτταρα-ξενιστές (μετασχηματισμός βακτηρίων) καλλιέργεια των βακτηρίων σε θρεπτικό υλικό που περιέχει αντιβιοτικό Προσδιορίζονται τα βακτήρια που έχουν δεχθεί πλασμίδιο . επιλογή ενός κλώνου που έχει το επιθυμητό τμήμα DNA με ειδική διαδικασία

6 Αντίστροφη μεταγραφάση DNA πολυμεράση Μια περιοριστική ενδονουκλεάση
Ποια ένζυμα και με ποια σειρά συμμετέχουν στην κατασκευή μιας cDNA βιβλιοθήκης; Αντίστροφη μεταγραφάση DNA πολυμεράση Μια περιοριστική ενδονουκλεάση DNA δεσμάση