实验四 质粒的电泳检测和酶切.

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实验五 简单正弦交流电路的研究 一、实验目的 1. 研究正弦交流电路中电压、电流的大小与 相位的关系。 2. 了解阻抗随频率变化的关系。 3. 学会三压法测量及计算相位差角。 4. 学习取样电阻法测量交流电流的方法。 二、实验原理说明 ( 略 )
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核 磁 共 振 兰州理工大学物理实验室.
1. 2 第一节 成形工艺中的冶金反应特点 3 液态成形的化学冶金过程主要发生在金属的熔炼阶 段。主要的物理化学反应为金属的氧化、金属的脱 磷、脱碳、脱氧、脱硫和合金化等。 金属熔炼过程中温度较低,约在 1600 ℃以下。温度 变化范围不大,液态金属的体积较大,熔炼时间较 长,冶金反应进行的较充分和完全,可采用物理化.
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郭凛凛. 引言 碘广泛分布在大气圈、水圈、生物 圈及岩石圈中, 在地质上重要的找 矿标志之一。并且碘还是人体必需 的微量元素, 是甲状腺素不可替代 的组成成分。尽管碘的分析方法较 多.
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水溶液中酶含量的分析测定 曾平 为什么要测定酶的含量? 酶的应用十分广泛:作为分析试剂(检 测血糖或尿糖浓度, ELISA 体系中作为指 示剂);多种有机化合物的实验室和商 业合成 ( 如从葡萄糖产生果糖 ) ,生物大分 子的降解(如淀粉生成葡萄糖,基因图 谱中 DNA 的特异剪切,低相对分子质量.
第12章 物质代谢的联系与调节 Interrelationships and Regulation of Metabolism
习 题 精 解 2-1 试判断下列各电路图对正弦交流电压信 号有无放大作用?为什么?. 习 题 精 解 解: 无放大作用,因为 电源 Vcc 极性不对。 无放大作用,因为无 基极偏置电流。
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DNA 的提取方法简介 为了研究 DNA 分子在生命代谢中的作用,常常 需要从不同的生物材料中提取 DNA. 由于 DNA 分子在生物体内的分布及含量不同,要选择适 当的材料提取 DNA 。 动植物中,小牛胸腺 ۰ 动物肝脏 ۰ 鱼类精子,植 物种子的胚中都含有丰富的 DNA 。 微生物中,谷氨酸菌体含.
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热工测量仪表 —— 热流测量. 背景 : 在热力设备的研究和运行中,除了测量温 度参数外,往往还需要测量热流密度。 例如 : 需测量火焰在单位时间内以辐射或辐射和 对流两种方式传至某单位面积上的热量,炉墙 和热力管道在单位时间和单位面积上向外散失 的热量,等等。 测量单位时间内单位面积上通过热量的仪表叫.
二维灵敏3He中子探测器的研制 高能所实验物理中心MDC组 王小胡
奇异曲面高斯通量的讨论 物理一班 野仕伟 1. 非封闭曲面的通量计算 — 投影法 平方反比场 E=A r/r 3 有 一特殊性质,即对两面元 dS 1, dS 2, 若对场源 O 张有相 同立体角 dΩ, 则 dS 1,dS 2 的通 量相等。 从而,任意曲面 S 0 , 对 O 张 Ω 的立体角,投影到.
第2章 遗传物质的分子基础.
交流电枢绕组的磁动势 重点讨论的问题: 要求: 单相绕组磁动势——脉振磁动势 三相绕组合成磁动势——旋转磁动势
第9章 生物氧化 Biological Oxidation
2.3 土 壤 水 分. 土壤水:是一种稀薄的溶液,存在于 土粒的表面和土粒间的孔隙中。 三种吸引力: 土粒的吸附; 毛管引力; 重力.
PMSM的问题 控制比直流伺服电机要复杂的多; 要想实现力矩控制,必须有角位置传感器,以测量d-q坐标系的旋转角;
激光拉曼光谱 (一)基本原理 当频率为ν0的单色光入射到一透明物体时,大部分入射光透过物质,然而约有10-5~10-3强度的入射光被散射。绝大部分散射光具有与入射光相同的频率ν0,这种弹性散射称为瑞利散射。 还有约为入射光10-7量级的非弹性散射光含有其他频率。这一效应于1928年由印度物理学家拉曼、前苏联物理学家兰斯别尔格和曼杰尔希达姆在实验中各自独立发现,通常称为拉曼效应。
§7-3 检波器 学习要点: 掌握检波原理及检波器的构成 了解几种检波器的特点和适用范围 掌握大信号峰值检波器的惰性失真及 负峰切割失真.
第五节 刚体的转动 掌握:角速度、角加速度、转动定律、角动量守恒定律 第一章 力学基本定律 理解:角动量、转动惯量.
项目二:电气设备的绝缘预防性试验与监测 学习情境二:电气设备的绝缘耐压试验 掌握交流耐压试验所用的仪器和设备、接线及试验方法。 掌握直流流耐压试验所用的仪器和设备、接线及试验方法。 了解冲击耐压试验试验。 教学目标.
SOUTHWESTJIAOTONG UNIVERSITY 学生个性化创新型实验 高 芳 清 基于桥梁结构静、动力行为的 西南交通大学力学实验教学中心.
第二节 钢在冷却时的转变 一、过冷奥氏体的等温冷却转变
活性炭处理硝基酚废水实验. 实 验 目 的 实 验 目 的 实 验 目 的 实 验 目 的 l 熟悉活性炭的结构; l 了解活性炭在水处理中的作用与原理; l 学会污染物定量分析方法; l 掌握活性炭脱除废水中有机污染物的应用技 术。
第二章 手机常要元器件的识别 一 、电阻(在电路中代号为 R ) 1 .电阻在电路中的作用:分压和限流 2. 电阻的阻值读取方法:电阻标识 abc__abc×10c 次 比如标识 103 的电阻,其阻值为 10×10 的 3 次 =10KΩ.
实验 54 E.Coli 感受态细胞的制备、质粒 DNA 的转化、提取与酶切鉴定 制作人:刘如石.
8.1 概述 8.2 数 / 模( D/A )转换器 8.3 模 / 数( A/D )转换器 退 出 第 8 单元 数 / 模、模 / 数转换.
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实验四 质粒的电泳检测和酶切

质粒检测: 电泳检测:质粒电泳一般有三条带,分别为质粒的超螺旋、开环、线型三种构型。 吸光值检测:采用分光光度计检测260nm、280nm波长吸光值,若吸光值260nm/280nm的比值介于1.7-1.9之间,说明质粒质量较好,1.8为最佳,低于1.8说明有蛋白质污染,大于1.8说明有RNA污染。

琼脂糖凝胶电泳 琼脂糖凝胶电泳是利用琼脂糖熔化后再凝固后能形成带有一定空隙的固体基质的特性,其孔隙的大小取决于琼脂糖的浓度。在电场的作用及中性PH缓冲条件下,带负电的核酸分子就可以向阳极移动。

胶浓度(%) 线性DNA分子大小(kb) 0.3 5~60 0.6 1~20 0.7 0.8~10 0.9 0.5~7 1.2 0.4~6 1.5 0.2~4 2.0 0.1~3 在一定电场强度下,DNA分子的迁移取决于分子筛效应,即DNA分子本身的大小和构型(相对分子质量不同的DNA片段泳动速度不一样)。DNA分子的迁移速度与相对分子质量的对数值成反比关系。 凝胶电泳不仅可分离不同相对分子质量的DNA,也可以分离相对分子质量相同,但构型不同的DNA分子:一般来说,其中闭环结构泳动最快,其次为线性结构,最慢的可能是单链开环。

限制性内切酶的相关基础知识 核酸限制性内切酶是一类能识别双链DNA中特定碱基顺序的核酸水解酶,这些酶都是从原核生物中发现,它们的功能犹似高等动物的免疫系统, 用于抗击外来DNA的侵袭。 限制性内切酶是体外剪切基因片段的重要工具,所以常常与核酸聚合酶、连接酶及末端修饰酶等一起被称为工具酶。限制性内切酶是DNA重组的重要工具。

限制性核酸内切酶的类型及特性 按限制性酶的组成、与修饰酶活性关系以及切断核酸的情况不同,分为三类:Ⅰ类、Ⅱ类和Ⅲ类。 II型限制性内切酶能识别专一的核苷酸顺序,并在该顺序内的固定位置上切割双链。由于这类限制性内切酶的识别和切割的核苷酸都是专一的。因此,这种限制性内切酶是DNA重组技术中最常用的工具酶之一。 这种酶识别的专一核苷酸顺序最常见的是4个或6个核苷酸,少数也有识别5个核苷酸以及7个、8个、9个、10个和11个核苷酸的。这种酶的切割可以有两种方式:

质粒的酶切 每种酶有特异的识别核酸序列,称为酶切位点,一般为回文序列。 所有的限制性内切酶切割DNA均产生含5′磷 酸基和3′羟基基团的末端 。

酶切反应中应注意以下几个问题: .内切酶: 不应混有其它杂蛋白特别是其它内切酶或外切酶的污染; 注意内切酶的识别位点及形成的粘性末端; 内切酶的用量 根据内切酶单位和DNA用量而定,通 常 1u指在适当条件下,1小时内完全酶解1ug特定DNA 底物所需要的限制性内切酶量,使用中一般以1ug DNA对 2-3u酶短时间为宜。 同时内切酶体积不能超过反应体系10%,因内切酶中含 50%甘油,体系中甘油超过5%会抑制内切酶活力; 使用时防止操作中对内切酶的污染。

DNA: 作为内切酶底物,DNA应该具备一定的纯度,其溶液中 不能含酚、氯仿、乙醚、SDS、EDTA、高盐浓度、酒精等, 这些因素的存在均不同程度影响限制性内切酶的活力。 这种抑制可通过: 增加酶作用单位数(10~20U/ug DNA)、 增大反应体积以稀释可能的抑制剂 或延长反应时间加以克服。

反应缓冲液: 反应缓冲液主要由Tris·HCl、NaCl、Mg2+组成,其中 Mg2+为内切酶辅基; Tris·HCl维持反应体系pH值在7.2-7.6之间; NaCl浓度不同形成3种级别的离子强度: 低盐(10mM NaCl) 中盐(50mM NaCl) 高盐(100mM NaCl) 不同的内切酶选择特定的反应缓冲液。

酶解温度与时间: 大多数限制酶反应温度为37℃,如EcoRⅠ, HindⅢ, BamHⅠ, PstⅠ等,也有如BclⅠ需在50℃下进行反应,3小时即可充分酶解。

实验方法: 按下表分别加入各试剂(注意限制性内切酶最后加入且在冰上操作)于Eppendorf管中。 无菌水 12μl DNA 5μl 10×buffer 2μl 内切酶 1μl 总体积: 20μl