荧光分析法简述 化学四班 苏世烟 03081124. 在我的的在分析课本中提到分子光谱法有 吸光光度法 荧光法 拉曼光谱法.

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1 荧光分析法简述 化学四班 苏世烟 03081124

2 在我的的在分析课本中提到分子光谱法有 吸光光度法 荧光法 拉曼光谱法

3 某些物质经紫外线照射后，能立即放 出能量较低（亦即波长较长）的光。 当照射停止后，如化合物的发射在 10-9 秒钟内停止，则称荧光 超过此限度即称为磷光。

4 荧光的波长与被照射物质有关。 以紫外线作激发光源，所发射的 荧光常在可见光区。 测量荧光强度以确定物质含量的方法 叫做荧光分析法， 所使用的仪器叫荧光计

5 一. 原理  设 I F 为荧光强度；  I 0 入射紫外线强度；  I t 为透过溶液后紫外线强度；  Ia 为溶液吸收紫外线；  C 为溶液中被测物质的浓度；  l 为溶液层的厚度。

6 被溶液吸收的紫外线强度为： Ia=I 0 -I t 据朗伯 - 比尔定律 代入上式得 ： 经数学推导，当浓 度很小时 ：

7 荧光强度 IF 与物质吸收紫外线的强度 成正比 当紫外线的强度一定，溶液的厚度一定， 对同一物质而言 2.3 KI0ξl 为常数，以 A 表 示, 故 :I F =AC 这说明浓度与荧光强度成正比，这 就是荧光定量分析的理论基础。

8 所以只要测出样品溶液的荧光强度 和标准溶液的荧光强度，就可按正 比关系计算样品溶液的浓度。 C X 为样品溶液浓度 C S 为标准溶液浓度 I FX 为样品溶液荧光 强度； I FS 为标准溶液荧光 强度

9 二．荧光计 荧光分析中有两种光线：紫外线和 荧光, 故 : 在比色计中光源、比色杯和光电源 三者排列成一条直线 在荧光计中三者需排成三角形，通 常呈直角三角形，如下图所示

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12 两种装置的不同 (1) 比色计中光源是普通的钨丝灯 荧光计中的光源则必须是产生紫外 线的汞灯，常用的是高压汞灯， 它发射的是线状光谱； 能透过汞灯玻璃套管的主要射线波 长是 365 钠米

13 两种装置的不同 (2) 比色计中只有一种光源，只需要一个滤光板 荧光计中有两种辐射、三个滤光板 : 滤光板 1 用于过滤紫外线，除去其中可见光 滤光板 2 用于过滤荧光，以去除其他颜色的 杂光； 滤光板 3 可滤去荧光中夹杂的紫外线

14 三，荧光分析的操作 1. 标准曲线法 先配制一第列浓度由大到小的标准 管 C 1 ， C 2 、 C 3 、、、、、、 C 1 为 浓度最大的标准管 作为起始浓度，置荧光计透光率为 100 ，调节光栅使检流计指零

15 然后再测一系列浓度较低的标准管 的透光率，以浓度对透光率作标准 曲线。 标准曲线的另一作法是以空白溶液 为起始浓度，置荧光计透光率于 10 或 20 处，调节光栅使检流计指零， 然后再测一系列浓度较高的标准管 的透光率，作出标准曲线。

16 2. 比较法 先配一标准溶液，其浓度应略大于 样品溶液 ; 浓度越接近，误差越小 以此标准溶液为准，调节透光率在 20~60 之间的某一数值上 然后测定样品溶液及空白溶液的透 光率。

17 由下式求得 : C 标准 透光率为 60 C 样品 的透光率为 X 空白溶液的透光率为 Y

18 四. 荧光分析的注意事项 1. 荧光的减退 荧光物质经紫外线长时间照射及空气的 氧化作用，会使荧光逐渐减退. 2. 试剂的浓度 有些试剂能吸收紫外线，有颜色的试 剂还有吸收荧光的作用，因此分析时所 加试剂的量不可太多 。

19 3.pH 的影响 大多数荧光反应都受溶液酸碱度的 影响，故荧光分析需在适合的酸碱 度溶液中进行。最适当的酸碱度必 须由实验来确定。所用酸的种类也 影响荧光的强度，例如，奎宁在硫 酸溶液中的荧光较在盐酸中的要强 些。

20 4. 溶剂 许多有机物及金属的有机络合物， 在乙醇溶液中的荧光比在水溶液中 强。乙醇、甘油、丙酮、氯仿及苯 都是常用的溶剂。荧光分析所用的 有机试剂，在有机溶剂中大多有荧 光，应设法避免；一般避免的办法 是稀释，或加入一部分水。

21 5. 盐类的影响 能与试剂发生反应的其他金属盐类都 应事先除去。碱金属与铵盐虽不参与 反应，但量太大亦有妨碍；强氧化剂、 还原剂及络合剂均不应存在于溶液中。 6. 荧光强度达到最高点所需要的时间不同 有的反应加入试剂后荧光强度立即达 到最高峰

22 有的反应需要经过 15~30 分钟才能达到最 高峰 7. 有机溶剂中常有产生荧光的杂质， 可用蒸馏法提纯。橡皮塞、软木塞 及滤纸中也常有能溶于溶剂的一些 带荧光的物质。

23 六. 总结 荧光分析法 灵敏度高， 仪器设备相对简单，休积小， 操作较简便 反应时间也较快

24 20 世纪 90 年代曾有两位瑞士化 学家提出一个叫 μ-TAS 的概念

25 μ-TAS 就是把整个实验室的功能，包括 采样、稀释、加试剂、反应、分离、检 测等集成到尽可能小的操作平台上。 μ-TAS 的进样量只有纳升级 (10 -6 L) 甚 至皮升级 (10 -12 L) 。 当然这就要求检测反应有高的灵敏度。

26 而荧光法是目前公认的最灵敏的检测方法 之一, 它正适应分析设备微型化、集成化、 与便携化的发展趋势。 但是它也有一些先天的不足限制了它的应 用，那就是只有少数化合物能发射荧光。 这就要靠这座的各位精英们以后多多努 力了 革命尚未成功，同志仍需努力啊！！！

27 参考文献 : > 中国医学科学院卫生研究所 编 > 彭崇慧 冯建章 张锡瑜 李克安 赵凤林 > 中国化学会 中国科学院院箕应用化学研究所主办

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