ΠΕΙΡΑΜΑΤΙΚΕΣ ΑΣΚΗΣΕΙΣ ΒΙΟΛΟΓΙΑΣ Γ΄ ΤΑΞΗ ΛΥΚΕΙΟΥ Άσκηση 1η(α) εργαστηριακού οδηγού: Καλλιέργεια βακτηρίων Επιμέλεια: Κωτίτσας Αριστοτέλης 2ο ΕΚΦΕ ΗΡΑΚΛΕΙΟΥ 2006-2007

Όργανα και υλικά Λύχνος Bunsen ή γκαζάκι Τρίποδο με πλέγμα 6 αχρησιμοποίητα τρυβλία Petri Γυάλινη ράβδος Ποτήρι ζέσεως των 500 ml Σύρμα εμβολιασμού ή βελόνα ανατομίας 200 ml νερό απεσταγμένο ή απιονισμένο ή εμφιαλωμένο (μη χλωριωμένο ) 3g Agar 4g θρεπτικό υλικό LB (Luria Browth) Χώμα Ζυγός ακριβείας

Όργανα και υλικά γκαζάκι Χώμα 6 τρυβλία petri Ζυγός ακριβείας Γυάλινη ράβδος Ποτήρι ζέσεως των 500 ml απιονισμένο νερό Agar θρεπτικό υλικό lb Χώμα 6 τρυβλία petri βελόνα ανατομίας Ζυγός ακριβείας

Παρασκευή θρεπτικού υλικού Στο ζυγό ακριβείας ζυγίζουμε 3g Agar και 4g θρεπτικό υλικό LB

Στο ποτήρι ζέσεως των 500 ml ζεσταίνουμε 200 ml νερό (κοντά στο σημείο βρασμού) διαλύουμε 3g Agar σιγά-σιγά και στη συνέχεια προσθέτουμε 4g θρεπτικό υλικό LB, ανακατεύοντας συνεχώς

Αφήνουμε το διάλυμα να βράσει για μερικά λεπτά προκειμένου να αποστειρωθεί ΠΡΟΣΟΧΗ ΞΕΧΥΛΙΖΕΙ

τα οποία αριθμούμε από 1 ως 6. Αφού κρυώσει, αλλά πριν στερεοποιηθεί, μεταφέρουμε το θρεπτικό υλικό στα πλαστικά τρυβλία Petri, τα οποία αριθμούμε από 1 ως 6. Εάν υπάρχει αποστειρωτικός κλίβανος τα έχουμε αποστειρώσει από πριν (προσοχή δεν τα θερμαίνουμε σε υψηλή θερμοκρασία)

Εμβολιασμός Αφήνουμε το τρυβλίο 1 ανοιχτό μέσα στην τάξη για πέντε λεπτά το τρυβλίο 2 ανοιχτό έξω από την τάξη για πέντε λεπτά Ένας μαθητής ανοίγει το τρυβλίο 3 και το αγγίζει με το δάχτυλο του. Ένας άλλος μαθητής πλένει τα χέρια του με σαπούνι και χωρίς να τα στεγνώσει ανοίγει το 4 και το αγγίζει με το δάχτυλο του.

Αποστειρώνουμε στη φλόγα τη βελόνα ανατομίας και προσθέτουμε λίγο χώμα στο τρυβλίο 5 Αφήνουμε το τρυβλίο 6 συνεχώς κλειστό, ώστε να χρησιμοποιηθεί ως «μάρτυρας», για σύγκριση με τα άλλα τρυβλία

Τρόποι εμβολιασμού Καλλιέργεια βακτηρίων στην οποία διακρίνεται ή πορεία του σύρματος εμβολιασμού

Τοποθετούμε τα τρυβλία σε θερμοκρασία δωματίου και μακριά από το ηλιακό φως. Μετά από δύο ημέρες παρατηρούμε σε ποια από τα αριθμημένα τρυβλία έχουν εμφανιστεί αποικίες (διακρίνονται σα στρογγυλοί, συνήθως, υπόλευκοι κύκλοι) Όταν οι αποικίες είναι εμφανείς μπορούμε να επιβραδύνουμε την ανάπτυξη των μικροοργανισμών μεταφέροντας τις καλλιέργειες στη συντήρηση του ψυγείου (θερμοκρασία 5-10οC)

Αποικίες που δημιουργήθηκαν μετά από μια εβδομάδα ανοιχτό μέσα στην τάξη ακάθαρτο δάχτυλο ανοιχτό έξω από την τάξη καθαρό δάχτυλο χώμα μάρτυρας

Προσέξτε τις διαφορετικές, σε σχήμα και χρώμα, αποικίες που δημιουργήθηκαν στο τρυβλίο με το χώμα Ανάπτυξη μυκήτων

Αποικίες βακτηρίων στο τρυβλίο που έμεινε ανοιχτό για 5 λεπτά στον εξωτερικό χώρο του σχολείου

Πολλαπλασιασμός βακτηρίων

ΠΡΟΣΟΧΗ για την αποφυγή τυχόν μολύνσεων: ΠΡΟΣΟΧΗ για την αποφυγή τυχόν μολύνσεων: Επειδή η μικροσκοπική παρατήρηση των μικροβίων απαιτεί ιδιαίτερη τεχνική, δε συνιστάται ή παρατήρησή τους με το μικροσκόπιο, παρόλο που τα μικρόβια που αναπτύσσονται είναι πιθανότατα ακίνδυνα

ΠΡΟΣΟΧΗ για την αποφυγή τυχόν μολύνσεων: ΠΡΟΣΟΧΗ για την αποφυγή τυχόν μολύνσεων: Πριν από το πείραμα καθαρίζουμε και απολυμαίνουμε την επιφάνεια εργασίας με χαρτί κουζίνας και οινόπνευμα και Καλή επιτυχία μετά το τέλος του πειράματος απολυμαίνουμε τα χρησιμοποιημένα σκεύη με βρασμό για μερικά λεπτά.