VALIDACIJA GRAVIMETRIJSKE METODE ODREĐIVANJA SUSPENDIRANE TVARI NA KRŠKIM IZVORIMA Marija Jadrušić, Dolores Grilec, Maja Režić, Irena Botica Zavod za javno zdravstvo Dubrovačko-neretvanske županije Dr. A. Šercera 4a, Dubrovnik

SUSPENDIRANA TVAR I MUTNOĆA NA KRŠKIM IZVORIMA Na njih utječe: Veličina protoka Vrijeme proteklo od pojave oborine Intezitet oborina Dio sliva zahvaćen oborinama Geološka i hidrogeološka svojstva sliva Vegetacija i pedološka svojstva tla Agrotehničke mjere na slivu Namjena zemljišta na slivu Godišnje doba Antropogeni zahvati

SUSPENDIRANA TVAR NA KRŠKIM IZVORIMA Koliko u određenom trenutku na slivu postoji nataloženog nanosa koji može biti unesen u vodu i njom transportiran? Složena struktura krškog podzemlja u kojem postoje brojni i prostrani podzemni prostori u kojima je moguće akumuliranje značajnih količina suspendirane tvari

SUSPENDIRANA TVAR NA KRŠKIM IZVORIMA Najveći dio godine je dosta niska, znatno ispod maksimalno dozvoljene koncentracije Niža od normama definirane “granice određivanja” (2 mg/l) HRN EN 872:2008: Kakvoća vode – Određivanje suspendiranih tvari – Metoda filtriranjem kroz filtar od staklenih vlakana primjenjuje se za određivanje suspendirane tvari u sirovoj i otpadnoj vodi te za efluente Je li to dobro za “čiste vode”?

NORMA HRN EN 872:2008 klasičan gravimetrijski pristup Određuje se masa osušenih filtera prije i nakon filtracije iz razlike masa računa se masena koncentracija suspendirane tvari.  dddddddddd

KAKO ODREDITI VALIDACIJSKE KRITERIJE Rezultati određivanja ovise do neke mjere o tipu filtera koji se koristi. Gotovo je nemoguće izvesti međulaboratorijsku studiju koristeći autentične uzorke vode uz jamstvo da će poduzorci biti identični po dolasku u različite laboratorije – navodi se u normi HRN EN 872:2008 Validacijski podaci navedeni u normi odnose se samo na sintetičke uzorke (obje studije). St. Meth. 2540 D. 22.Izd.2012. Studija napravjena na 3 različita koncentracijska područja 2 analitičara 4 seta uzoraka 10 replika Za ρ= 15 mg/l, RSDR= 33% Za ρ= 242 mg/l, RSDR= 10% Za ρ= 1707 mg/l, RSDR= 0,76%

HRN EN 872:2008 I PRILAGODBA Propisuje se filtriranje volumena uzorka koji će biti optimalan za mjerenje mase rezidua (5-50 mg). izbjegavati filtriranje više od 1 litre uzorka masa rezidua najmanje 2 mg Je li to dobro za “čiste vode”? Filteri sa staklenim vlakancima nespretni za raditi krti su i pucaju posebno neprikladni za uzorke u kojima filtriramo velike volumene (čiste vode) u validacijski eksperiment smo uzeli membranske filtere i od celuloze nitrata s porama od 0,45µm

ZAŠTO VALIDIRATI POSTUPAK ISPITIVANJA Profesionalna odgovornost analitičara: izdavanje točnih pouzdanih usporedivih mjernih rezultata Jedan od preduvjeta za to je dokazati kako odabrani mjerni postupak može ispuniti zahtjeve za posebnu predviđenu uporabu Validacija postupka je sastavni dio osiguranja kvalitete rezultata ispitivanja. Njenom provedbom osiguravamo dokaze da možemo za predviđenu uporabu izdati pouzdane rezultate

VALIDACIJE I ZAKONODAVSTVO Usklađivanjem zakonodavstva Republike Hrvatske s EU direktivama u području ispitivanja voda prihvaćen je niz pravilnika uobičajene zahtjeve MDK za neki pokazatelj u određenim vrstama voda zahtjevI za validaciju mjernih postupaka Ako su propisani validacijski kriteriji olakšana odluka o izboru radnih značajki olakšano definiranje kriterija prihvatljivosti Kako validirati postupak ispitivanja kada ni zakonski akt, a niti norma za metodu ispitivanja nema propisane radne značajke, a niti kriterije prihvatljivosti?

ZADANI VALIDACIJSKI KRITERIJI Pravilnik o posebnim uvjetima za obavljanje djelatnosti uzimanja uzoraka i ispitivanja voda (NN 74/13 i NN 140/15) definirao je samo: kriterij za granicu kvantifikacije u skladu s Direktivom Komisije 2009/90/EZ od 31. srpnja 2009. o utvrđivanju tehničkih specifikacija za kemijsku analizu i praćenje stanja voda s Direktivom 2000/60/EZ mjernu nesigurnost

SUSPENDIRANA TVAR – VALIDACIJSKI KRITERIJI Uredba o standardu kakvoće voda (NN 73/13, NN 151/14 i NN 78/15) ne propisuje validacijske kriterije za ovaj pokazatelj Pravilnik o parametrima sukladnosti i metodama analize vode za ljudsku potrošnju (NN 125/13 i NN 141/13 i NN 128/15) Direktiva Vijeća 98/83/EZ o kvaliteti vode namijenjene za ljudsku potrošnju s pripadajućim aneksom 2015/1787 od 06. studenog 2015. također ne propisuje validacijske kriterije za ovaj pokazatelj

UZORCI VODA U VALIDACIJSKOM EKSPERIMENTU Izvor Palata Izvor Ombla

UZORKOVANJE I VALIDACIJA Uzorkovanje na dvije lokacije zamućenje po 5 uzoraka (boca) iz svake boce po 2 replike, V= 250 ml Usporedno provedena validacija na staklenim i celulozanitrat filterima

PRECIZNOST Membranski filteri- celuloza nitrat, Sartorius, veličina pore = 0,45 µm Uzorak, Izvor Ombla, 21.01.2015. V= 250 ml Red.br. suspendirana tvar (mg/l) 1. 13,6 2. 14,8 3. 15,2 4. 13,2 5. 12,8 6. 7. 14 8. 12 9. Srednja vrijednost 13,7 Standardna devijacija, sr 1,06 RSDr ,% 7,7 Membranski filteri- celuloza nitrat, Sartorius, veličina pore = 0,45 um Uzorak, Izvor Palata, 21.01.2015. V= 250 ml Red.br. suspendirana tvar (mg/l) 1. 13,6 2. 14,8 3. 12,4 4. 24 5. 22 6. 13,2 7. 14 8. 9. 21,6 10. 19,6 Srednja vrijednost 16,8 Standardna devijacija, sr 4,67 RSDr ,% 27,9

ISTINITOST Suspendirana tvar, mikrokristalna celuloza u uzorku, 𝞺 (mg/l) Filtrirani volumen (ml) Rezultat, mg/l(n=6) RSDr, % Isk. (%) 50 200 45,1 – 50,3 4,5 90,1 – 100,6 10 500 8,9 – 9,5 3,3 88,6 - 95 5 1000 4,39 – 4,75 87,8 - 95 2 1,34 – 1,59 5,9 67-79,5 Nacjepljeni uzorci demineralizirane vode s mikrokristalnom celulozom 4 koncentracijska područja 6 replika ZADANI VALIDACIJSKI KRITERIJI HRN 872:2008 – za 𝞺 (mikrokristalna celuloza) = 50 mg/l, V= 200 ml Isk. = 90-110 % AOAC, Appendix F: Guidelines for Standard Method Performance Requirements, 2012. Isk. = 80-110 %

PRAĆENJE TRENDOVA USPJEŠNOSTI NA MLU Distribucija Datum Rezultat, mg/l Priznata vrijednost, mg/l Dodjeljeni z-score 357 20-11-2008 14,5 14,10 0,28 377 23-11-2009 12,50 13,30 -0,60 405 13-05-2011 13,50 13,00 0,38 441 15-02-2013 21,33 22,80 -0,64 485 11-05-2015 11,86 11,40 0,40 Laboratorij od 2008. redovno sudjelujemo u međunarodnim poredbenim ispitivanjima u organizaciji LGC Aquacheck PT-AQ-3 (suspendirane tvari u uzorcima čistih voda)

PRAĆENJE TRENDOVA USPJEŠNOSTI NA MLU

PRAĆENJE TRENDOVA USPJEŠNOSTI NA MLU

GRANICA DETEKCIJE I GRANICA KVANTIFIKACIJE Membranski filteri- celuloza nitrat, Sartorius, veličina pore = 0,45 µm Vodovodna voda, 17.02.2015., V= 1000 ml Red.br. Suspendirana tvar, 𝞺 (mg/l) 1. 0,3 2. 0,2 3. 0,9 4. 0,6 5. 0,1 6. 7. 8. 0,5 9. Srednja vrijednost 0,4 Standardna devijacija, sr 0,33 LOD (3*sr prirodnog uzorka koji sadrži nisku koncentraciju pokazatelja) 1,0 LOQ 3,3

KONTROLNA KARTA

DUGOROČNA PRECIZNOST Iz kontrolne karte na standardu mikrokristale celuloze, 𝞺 = 50 mg/l, V=200 ml normom HRN EN 872:2008 definirana koncentracija standarda i filrirani volumen Rezultati mjerenja u 2013. i 2014., n=73 Srednja vrijednost = 49,2 mg/l Standardna devijacija, sR = 2,6 mg/l RSDR= 5,3% Iskorištenje = 98,4%

ZAKLJUČAK Validacijska mjeranja provode se s razlogom Potrebno je dokazati da je metoda prikladna za namijenjenu svrhu za rješavanje određenog analitičkog problema U našem slučaju - određivanje niskih koncentracija suspendirane tvari

HVALA NA PAŽNJI