Ασκήσεις 10 + 11 Έμμορφα συστατικά του αίματος 10.Α1. Ερυθρά αιμοσφαίρια 10.Α2. Λευκά αιμοσφαίρια 10.Α3. Λευκοκυτταρικός τύπος 10.Γ1. Ποσοτικός προσδιορισμός αιμοσφαιρίνης 10.Γ2. Προσδιορισμός αιματοκρίτη (*) 10.Γ3. Προσδιορισμός ταχύτητας καθίζησης (*) 11.Α. Ποιοτικός προσδιορισμός πρωτεϊνών πλάσματος 11.Β. Ποσοτικός προσδιορισμός πρωτεϊνών πλάσματος 11.Γ. Προσδιορισμός όγκου του πλάσματος Ρ. Τσιτσιλώνη, Π. Παπαζαφείρη Σ. Παπαβασιλείου, Α. Φωτεινοπούλου

Συστατικά του αίματος πλάσμα έμμορφα στοιχεία ερυθρά (απύρηνα) λευκά (εμπύρηνα) αιμοπετάλια

Φυσιολογικός αριθμός RBC= Ερυθρά αιμοσφαίρια αναιμία από έλλειψη Fe μικροκυττάρωση ανισοκυττάρωση ποικιλλοκυττάρωση Φυσιολογικός αριθμός RBC= 4,5-6 x 106/mm3 αίματος

Ερυθρά αιμοσφαίρια - Ερυθροποίηση

Φυσ. αριθμός WBC: 4-10 x 103/mm3 αίματος Λευκά αιμοσφαίρια (Ι) Φυσ. αριθμός WBC: 4-10 x 103/mm3 αίματος Κοκκιοκύτταρα Μη κοκκιώδη κύτταρα Ουδετερόφιλα Ηωσινόφιλα Βασεόφιλα Λεμφοκύτταρα Μονοκύτταρα

Λευκά αιμοσφαίρια (ΙΙ) ουδετερόφιλο & βασεόφιλο    μονοκύτταρο & ουδετερόφιλα ουδετερόφιλα    λεμφοκύτταρο & ουδετερόφιλο

Ερυθρά & Λευκά αιμοσφαίρια - Διαφοροποίηση Αιμοποιητικοί παράγοντες Ερυθροποιητίνη FILGRASTIM (G-CSF), SAGRAMOSTIM (GM-CSF), Θρομβοποιητίνη

Μέτρηση έμμορφων συστατικών Αραίωση αίματος (200 φορές για τα RBC, 20 φορές για τα WBC) Πλάκα Neubauer Καλυπτρίδα Παρατήρηση στο μικροσκόπιο Καταμέτρηση

Πλάκα Neubauer ή αιμοκυτταρόμετρο 16 x (1/20x1/20x1/10) 1x1x1/10

Πείραμα Α1. Μέτρηση ερυθρών αιμοσφαιρίων Θα χρησιμοποιήσετε: Αίμα από άνθρωπο Θα αραιώσετε: 3,98 ml (~4 ml) φυσιολογικό ορό στο σωληνάκι «RBC» 20 μl αίμα με πιπέττα σταθερού όγκου Ανάδευση στο vortex ΑΡΑΙΩΣΗ 200 φορές Με σιφώνιο με κόκκινο λαστιχάκι Αίμα μέχρι ένδειξη 0,5 Φυσιολογικό ορό μέχρι ένδειξη 101 ΑΡΑΙΩΣΗ 200 φορές Θα μετρήσετε: Αριθμό RBC σε πλάκα Neubauer (5 τετράγωνα με 16/αδες) Μέτρησα χ κύτταρα σε όγκο 16 x (1/20 x 1/20 x 1/10) mm3 για το ένα τετράγωνο ή 5 x 16 x (1/20 x 1/20 x 1/10) mm3 για τα πέντε τετράγωνα =80 Θα υπολογίσετε: Αριθμό RBC ανά mm3 αρχικού αίματος

Πείραμα Α2. Μέτρηση λευκών αιμοσφαιρίων Θα χρησιμοποιήσετε: SOS: βλέπουμε μόνο τους πυρήνες των λευκοκυττάρων Αίμα από άνθρωπο Θα αραιώσετε: 380 μl (~400 μl) διάλυμα Turk στο σωληνάκι «WBC» 20 μl αίμα με πιπέττα σταθερού όγκου Ανάδευση στο vortex ΑΡΑΙΩΣΗ 20 φορές Με σιφώνιο με λευκό λαστιχάκι Αίμα μέχρι ένδειξη 0,5 Διάλυμα Turk μέχρι ένδειξη 11 ΑΡΑΙΩΣΗ 20 φορές Θα μετρήσετε: Αριθμό WBC σε πλάκα Neubauer (4 πλευρικά τετράγωνα με 16/αδες) Μέτρησα χ κύτταρα σε όγκο 1 x 1 x 1/10 mm3 για το ένα τετράγωνο ή 4 x (1 x 1 x 1/10) mm3 για τα τέσσερα τετράγωνα Θα υπολογίσετε: Αριθμό WBC ανά mm3 αρχικού αίματος

Πείραμα Α3. Προσδιορισμός λευκοκυτταρικού τύπου Θα χρησιμοποιήσετε: ΜΗ ΑΡΑΙΩΜΕΝΟ αίμα ανθρώπου Θα φτιάξετε πλακάκι με επίχρισμα: Απλώνετε μια σταγόνα σε αντικειμενοφόρο Αφήνετε να στεγνώσει Βάφετε με May-Grunwald και στη συνέχεια με Giemsa Ξεπλένετε καλά Θα μετρήσετε (στα έτοιμα παρασκευάσματα στο δίσκο σας): Τουλάχιστον 30 WBC Θα ξεχωρίσετε ουδετερόφιλα, λεμφοκύτταρα, μονοκύτταρα (ίσως ηωσινόφιλα & βασεόφιλα) Θα υπολογίσετε: % αναλογία του κάθε πληθυσμού στο σύνολο των WBC που μετρήσατε

Πείραμα Γ1. Ποσοτικός προσδιορισμός της αιμοσφαιρίνης Μετατροπή αιμοσφαιρίνης σε κυανομεθαιμοσφαιρίνη Θα φτιάξετε δείγματα με: 5 ml διαλύματος Drabkin (ANTΛΙΑ) + 0,02 ml αίμα (με πιπέττα σταθερού όγκου) ανάδευση επώαση για 15 min στους 25ο C φωτομέτρηση στα 540 nm Θα υπολογίσετε: συγκέντρωση Hb σε gr/100 ml αίματος

Πείραμα Γ2. Προσδιορισμός του αιματοκρίτη (*) 3000 rpm 30 min 25o C Ερυθρά αιμοσφαίρια Πλάσμα Λευκά αιμοσφαίρια & αιμοπετάλια

Πείραμα Γ3. Προσδιορισμός ταχύτητας καθίζησης (*) Θα χρησιμοποιήσετε: Σιφώνιο Westergen και αντίστοιχο στατώ Γεμίζουμε το σιφώνιο μέχρι την ένδειξη 0 Τοποθετούμε σε κάθετη θέση στο στατώ Θα μετρήσετε: ΤΚΕ μετά από 1 ώρα Καταγράψτε τις ενδείξεις

Αιματολογικές παράμετροι Θα υπολογίσετε: MCΗ (mean corpsular Hb): συγκέντρωση Hb (gr/100 ml) (φ.τ. 30-32 x 10-12 gr) (πόση Hb έχει κάθε RBC) αριθμό RBC (σε 100 ml) MCHC (mean corpsular Hb concentration): Hb (gr/100 ml) (φ.τ. 33,5%) (μέση συγκέντρωση Hb στο σύνολο των RBC) αιματοκρίτη (%) MCV (mean corpsular volume): αιματοκρίτης (φ.τ. 80-90 μ3) (‘πόσο μεγάλα’ είναι τα RBC) αριθμό RBC Mόρια Hb/RBC: MCH x (6 x 1023) (… x 107 μόρια Hb/ερυθρό) MB Hb 6,7 x 104

Συστατικά του αίματος πλάσμα έμμορφα στοιχεία ερυθρά (απύρηνα) λευκά (εμπύρηνα) αιμοπετάλια

Oι πρωτεΐνες του πλάσματος αλβουμίνη α2-σφαιρίνες γ-σφαιρίνες α1-σφαιρίνες β-σφαιρίνες

Α΄ Μέρος. Ποιοτικός προσδιορισμός πρωτεϊνών Ηλεκτροφόρηση σε ταινία οξικής κυτταρίνης Θα πάρετε: Ταινία οξικής κυτταρίνης Τοποθετούμε 10 μl δείγμα πλάσματος αίματος Ηλεκτροφορούμε για 45 min στα 300 Volts Χρώση με Ponceau-S (σε γυάλινα τάπερ) Αποχρωματισμός (στα πλαστικά κουτιά) Εμβαπτίζουμε σε διάλυμα Ν-μεθυλικής πυρολιδόνης Στεγνώνουμε και πυκνομετρούμε Θα υπολογίσετε: % αναλογία των διαφόρων πρωτεϊνικών κλασμάτων ενδεικτικά: αλβουμίνη 58 % (55,8 % - 65 %) α1-σφαιρίνες 3 % (2,2 % - 4,6 %) α2-σφαιρίνες 11 % (8,2 % - 12,5 %) β-σφαιρίνες 11 % (7,2 % - 14,2 %) γ-σφαιρίνες 16 % (11,5 % - 18,8 %)

Β΄ Μέρος. Ποσοτικός προσδιορισμός πρωτεϊνών Μέθοδος της Διουρίας Θα πάρετε: πρότυπο διάλυμα αλβουμίνης συγκέντρωσης 10 mg/ml σε 8 σωλήνες θα προσθέσετε τα διαλύματα του Πίνακα 11.1 προσθέτετε 4 ml διουρίας (μπουκάλι με ANTΛΙΑ) επώαση για 30 min φωτομέτρηση στα 550 nm Θα κατασκευάσετε: πρότυπη καμπύλη αλβουμίνης από τιμές σωλήνων 1-6 [μg αλβουμίνης (άξονας x) συναρτήσει OD550 (άξονας ψ)] Θα υπολογίσετε: τη συγκέντρωση ολικής πρωτεΐνης στο δείγμα ορού (μέσος όρος σωλήνων 7-8) τη συγκέντρωση πρωτεΐνης κάθε κλάσματος που διαχωρίσατε ποιοτικά με την ηλεκτροφόρηση

Γ΄ Μέρος. Προσδιορισμός όγκου πλάσματος Θα υπολογίσουμε τον όγκο πλάσματος και αίματος στο περιστέρι

Γ΄ Μέρος. Προσδιορισμός όγκου πλάσματος Μέθοδος αραίωσης της χρωστικής Evans Θα πάρετε: πρότυπο διάλυμα χρωστικής Evans συγκέντρωσης 0,5 mg/ml στους σωλήνες 1-6 θα προσθέσετε τα διαλύματα του Πίνακα 11.2 (SOS αλλαγή) στους σωλήνες 7-12 θα προσθέσετε τα διαλύματα του Πίνακα 11.3 φωτομέτρηση στα 620 nm Σας δίνονται: βάρος περιστεριού 310 gr αιματοκρίτης περιστεριού 41 %

Πείραμα Γ2. Προσδιορισμός του αιματοκρίτη 3000 rpm 30 min 25o C Ερυθρά αιμοσφαίρια Πλάσμα Λευκά αιμοσφαίρια & αιμοπετάλια

Γ΄ Μέρος. Προσδιορισμός όγκου πλάσματος Μέθοδος αραίωσης της χρωστικής Evans Θα πάρετε: πρότυπο διάλυμα χρωστικής Evans συγκέντρωσης 0,5 mg/ml στους σωλήνες 1-6 θα προσθέσετε τα διαλύματα του Πίνακα 11.2 (SOS αλλαγή) στους σωλήνες 7-12 θα προσθέσετε τα διαλύματα του Πίνακα 11.3 φωτομέτρηση στα 620 nm Σας δίνονται: βάρος περιστεριού 310 gr αιματοκρίτης περιστεριού 41 % (άρα πλάσμα = ? %) πρόγραμμα gw.basic / Evans Θα υπολογίσετε: τον ολικό όγκο του πλάσματος % ποσοστό πλάσματος στο συνολικό βάρος του ζώου τον όγκο του αίματος του ζώου % ποσοστό αίματος στο συνολικό βάρος του ζώου