«ΑΝΑΠΤΥΞΗ PDLF ΚΥΤΤΑΡΩΝ ΣΕ ΔΙΑΦΟΡΕΤΙΚΟΥ ΤΥΠΟΥ ΙΚΡΙΩΜΑΤΑ» Κωνσταντινίδου Κ.1, Θεοχαρίδου Α.2, Τσιόπτσας Κ.3, Παναγιώτου Κ.3, Κοΐδης Π.2, Σιβροπούλου Α.1 1Εργαστήριο Γενικής Μικροβιολογίας, Τομέας Γενετικής, Ανάπτυξης και Μοριακής Βιολογίας, Τμήμα Βιολογίας, ΣΘΕ, 2Οδοντιατρική Σχολή, 3Πολυτεχνική Σχολή, Τμήμα Χημικών Μηχανικών, Αριστοτέλειο Πανεπιστήμιο Θεσσαλονίκης Ιστική Μηχανική Σταθερές οδοντικές προσθήκες Θεραπεία περιοδοντικών ασθενειών ΑΝΑΓΕΝΝΗΣΗ ΟΣΤΕΪΝΗΣ Απομόνωση κατάλληλης κυτταρικής σειράς Τοποθέτηση κυττάρων σε βιοσυμβατά ικριώματα-φορείς και επώαση Παραγωγή νέας θεμέλιας ουσίας Εμφύτευση του φορέα Αναγέννηση ιστού
ΥΛΙΚΑ ΚΑΙ ΜΕΘΟΔΟΙ 1. ΑΠΟΜΟΝΩΣΗ PDLF ΚΥΤΤΑΡΩΝ Α) Σπόγγοι χιτίνης Β) Σύνθετα ικριώματα Επώαση για 30 μέρες Μέτρηση μεταβολικά ενεργών κυττάρων (MTS) 3. ΠΑΡΑΓΩΓΗ ΑΝΤΙΣΩΜΑΤΩΝ ΕΝΑΝΤΙΑ ΣΤΗΝ CAP Εκχύλισμα βόειας οστεΐνης Ανάλυση σε πηκτή πολυακρυλαμίδης (SDS-PADE) Ανοσοποίηση πειραματόζωων Aνοσοανίχνευση Western-blot
2. ΕΛΕΓΧΟΣ ΒΙΩΣΙΜΟΤΗΤΑΣ & ΠΟΛΛΑΠΛΑΣΙΑΣΜΟΥ PDLF ΚΥΤΤΑΡΩΝ ΣΤΑ ΙΚΡΙΩΜΑΤΑ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ 1. ΑΠΟΜΟΝΩΣΗ PDLF ΚΥΤΤΑΡΩΝ Οπτικό μικροσκόπιο Χρώση DAPI 2. ΕΛΕΓΧΟΣ ΒΙΩΣΙΜΟΤΗΤΑΣ & ΠΟΛΛΑΠΛΑΣΙΑΣΜΟΥ PDLF ΚΥΤΤΑΡΩΝ ΣΤΑ ΙΚΡΙΩΜΑΤΑ Σπόγγοι χιτίνης Σύνθετα ικριώματα
3. ΠΑΡΑΓΩΓΗ ΑΝΤΙΣΩΜΑΤΩΝ ΕΝΑΝΤΙΑ ΣΤΗΝ CAP SDS-PAGE Απομόνωση και διαχωρισμός CAP Έλεγχος βιολογικής δραστικότητας της 65kDa πρωτεΐνης Δοκιμασία κυτταρικής προσκόλλησης Προσδιορισμός anti-CAP αντισωμάτων Ανοσοανίχνευση Western-blot
ΣΥΜΠΕΡΑΣΜΑΤΑ Απομόνωση και καλλιέργεια κυττάρων από ανθρώπινο περιοδοντικό σύνδεσμο (PDLF κύτταρα) Το μέγεθος πόρων των ικριωμάτων επηρεάζει τη βιωσιμότητα και τον πολλαπλασιασμό των PDLF κυττάρων Από όλα τα ικριώματα που μελετήθηκαν, τα σύνθετα ικριώματα με επικάλυψη χιτοζάνης-ζελατίνης ήταν τα πιο αποτελεσματικά: Αύξηση του κυτταρικού πληθυσμού Διατήρησή του για 20 ημέρες Παραγωγή πολυκλωνικών αντισωμάτων ενάντια στην CAP, κατάλληλη αραίωση ορού η 1/500 Οι συγγραφείς θα ήθελαν να εκφράσουν τις ευχαριστίες τους στην Γενική Γραμματεία Έρευνας και Τεχνολογίας του Υπουργείου Ανάπτυξης για την υλική στήριξη της εργασίας τους, που αποτελεί μέρος ευρύτερου έργου πραγματοποιούμενο στα πλαίσια του ΠΕΝΕΔ 2003-03ΕΔ/736.