Ρεγγίνα-Μαρία Κολαΐτη1, και Σοφία Κουγιανού-Κουτσούκου1 AΠΟΜΟΝΩΣΗ ΚΑΙ ΜΕΛΕΤΗ ΤΗΣ ΚΙΝΑΣΗΣ ΤΗΣ ΚΑΖΕΪΝΗΣ 2 (CK2) ΤΟΥ ΜΥΔΙΟΥ Mytilus galloprovincialis Ρεγγίνα-Μαρία Κολαΐτη1, Ryszard Szyszka2 και Σοφία Κουγιανού-Κουτσούκου1 1Εθνικό και Καποδιστριακό Πανεπιστήμιο Αθηνών, Τμήμα Βιολογίας, Τομέας Γενετικής και Βιοτεχνολογίας, Πανεπιστημιόπολις, Αθήνα 15701 2John Paul II Catholic University of Lublin, Department of Molecular Biology, Al. Krasnicka 102, 20-718 Lublin, Poland

Ριβοσωμικός Μίσχος Ρ0(Ρ1/Ρ2)2 Εισαγωγή O μίσχος της μεγάλης ριβοσωμικής υπομονάδας αποτελείται από ένα πρωτεϊνικό πενταμερές, Ρ0(Ρ1/Ρ2)2, που αλληλεπιδρά με τους παράγοντες επιμήκυνσης κατά την πρωτεϊνοσύνθεση. Η αντιστρεπτή φωσφορυλίωση των P-πρωτεϊνών του ριβοσωμικού μίσχου ρυθμίζει την ενεργότητα των ριβοσωμάτων. Ριβοσωμικός Μίσχος Ρ0(Ρ1/Ρ2)2 Η Κινάση της Καζεΐνης 2 (CK2) είναι μία πλειοτροπική κινάση που φωσφορυλιώνει θέσεις Σερίνης/Θρεονίνης σε πολλά υποστρώματα, μεταξύ των οποίων και τις Ρ-πρωτεΐνες του ριβοσωμικού μίσχου. Η CK2 έχει δομή τετραμερούς και αποτελείται από δύο καταλυτικές υπομονάδες (α ή α’) που συνδυάζονται με μία διμερή β ρυθμιστική υπομονάδα. CK2 Στην μελέτη αυτή παρουσιάζεται η πορεία απομόνωσης της κινάσης CK2 του μυδιού Mytilus galloprovincialis με ιοντοανταλλακτική χρωματογραφία και ο έλεγχος της ενεργότητας της κινάσης (kinase assay).

Απομόνωση της κινάσης CK2 από βράγχια του μυδιού M. galloprovincialis Χρωματογραφία DEAE-κυτταρίνης του μετα-ριβοσωμικού κλάσματος S-100 Φωσφορυλίωση των ανασυνδυασμένων ριβοσωμικών πρωτεϊνών MgP1,P2 και ScP2b από την καταλυτική υπομονάδα CK2α (δότης φωσφόρου γ32Ρ-ΑΤΡ) Χρωματογραφία φωσφο-κυτταρίνης του flow-through κλάσματος της DEAE χρωματογραφίας

Μελέτη της επίδρασης αναστολέων και επαγωγέων στη φωσφορυλίωση της ανασυνδυασμένης ριβοσωμικής πρωτεΐνης MgP1 από την καταλυτική υπομονάδας CK2α

Συμπεράσματα Ειδικοί αναστολείς, Ηπαρίνη και ΤΒΒt, καταστέλλουν πλήρως τη φωσφορυλίωση των MgP1 και ScP2b πρωτεϊνών από την κινάση CK2α. Η ανασυνδυασμένη Υπεροξειδική Δισμουτάση SOD του μυδιού M.galloprovincialis, που απομονώσαμε σε ενεργή μορφή, καταστέλλει μερικώς τη φωσφορυλίωση της MgP1 πρωτεΐνης από την κινάση CK2α. Η Σπερμίνη επάγει την φωσφορυλίωση της MgP1 πρωτεΐνης από την κινάση CK2α. Σύμφωνα με τα παραπάνω και επειδή η Κινάση της Καζεΐνης 2 (CK2) είναι υπεύθυνη για τη φωσφορυλίωση των ριβοσωμικών Ρ-πρωτεϊνών: Θεωρούμε ότι το κλάσμα που απομονώθηκε με τη χρωματογραφία φωσφο-κυτταρίνης περιέχει την καταλυτική υπομονάδα της Κινάσης της Καζεΐνης 2 του μυδιού M. galloprovincialis (MgCK2α).