Μελέτη του μηχανισμού δράσης αιθερικών φωσφολιπιδίων με αντικαρκινικές ιδιότητες Περιστέρη1 Ελ., Αυλωνίτης2 Ν., Γεωργικοπούλου2 Κ., Καλογεροπούλου2 Θ., Παπαζαφείρη1 Π. 1ΕΚΠΑ, Τμήμα Βιολογίας, Τομέας Φυσιολογίας Ζώων & Ανθρώπου 2Ινστιτούτο Οργανικής και Φαρμακευτικής Χημείας, Εθνικό Ίδρυμα Ερευνών Τα αντικαρκινικά αιθερικά φωσφολιπίδια (ΑΕLs) είναι συνθετικά ανάλογα φωσφολιπιδίων, τα οποία ενσωματώνονται στην πλασματική μεμβράνη καρκινικών κυττάρων και την αποδιοργανώνουν, με αποτέλεσμα την τροποποίηση σηματοδοτικών μονοπατιών που σχετίζονται με την κυτταρική επιβίωση. Στην παρούσα μελέτη χρησιμοποιήθηκαν ανθρώπινα επιθηλιακά καρκινικά κύτταρα δέρματος, Α431, στα οποία διερευνήθηκε η επίδραση μιας σειράς δομικών αναλόγων αιθερικών φωσφολιπιδίων. Συγκεκριμένα διερευνήθηκε 1) η πιθανή επίδρασή τους σε δύο καρκινικούς δείκτες, την p-Akt και τον μεταγραφικό παράγοντα, HIF-1α 2) η πιθανή πρόκληση αποπτωτικού θανάτου και 3) η επίδραση στα ενδοκυτταρικά επίπεδα ασβεστίου ***Η εργασία αυτή χρηματοδοτήθηκε από τη Γενική Γραμματεία Έρευνας και Τεχνολογίας (ΕΠΑν, ΦΠ5) και από το πρόγραμμα «Καποδίστριας» του Πανεπιστημίου Αθηνών

Υλικά και Μέθοδοι Κυτταρικό σύστημα Καρκινική κυτταρική σειρά Α431 (προέλευση από επιθηλιακά κύτταρα δέρματος) Χρησιμοποιήθηκαν τα φωσφολιπίδια με κωδικό αριθμό 19, 20, 43, 44, 51, 52, 70, 95, 106, 135, 162. Η μιλτεφοσίνη χρησιμοποιήθηκε ως θετικός μάρτυρας. Μέθοδοι Μέτρηση κυτταρικής βιωσιμότητας με τη μέθοδο της ΜΤΤ και τη χρώση με Trypan blue Μέθοδος DNA laddering για ανίχνευση απόπτωσης Aνάλυση κατά Western (Western blot) Φθορισμομετρία για μέτρηση επιπέδων κυτταροπλασματικού ασβεστίου Μέθοδος προσδιορισμού ΑΤΡ

Αποτελέσματα: 72h, 20μΜ 48h, 25μΜ 24h, 50 μΜ ΙC50 19 >100 20 ctrl 51 43 44 ΗePC 72h, 20μΜ 20 52 48h, 25μΜ 24h, 50 μΜ Κωδικός συνθετ. φωσφολιπιδίων ΙC50 19 >100 20 55.2+/- 4.5 43 28.34+/-4.4 44 27.95+/-5.7 51 29.83+/-3 52 61.6+/-7.3 70 68.5+/-4.7 95 106 135 162 HePC 24.56+/-2.5 p-Akt 85 47 Total Akt

Αποτελέσματα: Κωδικός συνθ. φωσφο- λιπιδίων ΑΤΡ (% μάρτυρα) 20 87 43 68 44 61 48 74 51 78 HePC Cyt-c 20 ΒcL-xL actin 47 36 26 Κωδικός συνθ. φωσφολιπιδίων Κυτταρικά επίπεδα Ca2+ 43 21/223 44 17/364 48 18/267 50 31/235 51 34/278 20 77/127 HePC 24/304 μάρτυρας 81/132 Μέτρηση του κυτταροπλασματικού ασβεστίου και του ασβεστίου των ενδοκυττάριων αποθηκών (θαψιγκαργκίνης) παρουσία αιθερικών φωσφολιπιδίων. Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται σαν ποσοστό (%) του ασβεστίου που κινητοποιείται παρουσία θαψιγκαργκίνης προς τη βασική κυτταροπλασματική συγκέντρωση (nΜ). (Η τιμή SD κυμαίνεται σε όλες τις περιπτώσεις από 6-12% του μέσου όρου HIF-1a actin 118 47 36

Συμπεράσματα… Από τα 11 συνολικά εξεταζόμενα αιθερικά φωσφολιπίδια μόνο 5 εμφάνισαν αξιοσημείωτη κυτταροτοξική δράση: 43, 44, 48, 51 20 βιωσιμότητας βιωσιμότητας σταθερά επίπεδα p-Akt επιπέδων p-Akt σταθερά επίπεδα ΑΤΡ επιπέδων ΑΤΡ σταθερά επίπεδα Ca εισροής ιόντων ασβεστίου άθικτο DNA θραύση γενωμικού DNA κυτταρικός κύκλος ?? απόπτωση 5