Αγγελική Φωτεινοπούλου ΄Ασκηση 11 Ανάλυση πρωτεϊνών πλάσματος Προσδιορισμός όγκου του πλάσματος Παρατήρηση πλάκας Neubauer Ράνια Τσιτσιλώνη Αγγελική Φωτεινοπούλου Σύλβια Παπαβασιλείου
Συστατικά του αίματος πλάσμα έμμορφα στοιχεία ερυθρά (απύρηνα) λευκά (εμπύρηνα) αιμοπετάλια
Oι πρωτεΐνες του πλάσματος (Ι) Διαχωρισμός σε: λευκωματίνη (αλβουμίνη) σφαιρίνες (α, β, γ) ινωδογόνο
Oι πρωτεΐνες του πλάσματος (ΙΙ) thyroxin binding globulin α1-αντιθρυψίνη thyroxin binding globulin αντισώματα απτοσφαιρίνη α2-μακροσφαιρίνη β1-τρανσφερρίνη β-λιποπρωτεΐνη
Α΄ Μέρος. Ποιοτικός προσδιορισμός πρωτεϊνών Ηλεκτροφόρηση σε ταινία οξικής κυτταρίνης Θα πάρετε: Ταινία οξικής κυτταρίνης Τοποθετούμε 10 μl δείγμα πλάσματος αίματος Ηλεκτροφορούμε για 45 min στα 300 Volts Χρώση με Ponceau-S (σε γυάλινα τάπερ) Αποχρωματισμός (στα πλαστικά κουτιά) Εμβαπτίζουμε σε διάλυμα Ν-μεθυλικής πυρολιδόνης Στεγνώνουμε και πυκνομετρούμε Θα υπολογίσετε: % αναλογία των διαφόρων πρωτεϊνικών κλασμάτων ενδεικτικά: αλβουμίνη 58 % (55,8 % - 65 %) α1-σφαιρίνες 3 % (2,2 % - 4,6 %) α2-σφαιρίνες 11 % (8,2 % - 12,5 %) β-σφαιρίνες 11 % (7,2 % - 14,2 %) γ-σφαιρίνες 16 % (11,5 % - 18,8 %)
Β΄ Μέρος. Ποσοτικός προσδιορισμός πρωτεϊνών Μέθοδος της Διουρίας Θα πάρετε: πρότυπο διάλυμα αλβουμίνης συγκέντρωσης 10 mg/ml σε 8 σωλήνες θα προσθέσετε τα διαλύματα του Πίνακα 11.1 προσθέτετε 4 ml διουρίας (μπουκάλι με ANTΛΙΑ) επώαση για 30 min φωτομέτρηση στα 550 nm Θα κατασκευάσετε: πρότυπη καμπύλη αλβουμίνης από τιμές σωλήνων 1-6 [μg αλβουμίνης (άξονας x) συναρτήσει OD550 (άξονας ψ)] Θα υπολογίσετε: τη συγκέντρωση ολικής πρωτεΐνης στο δείγμα ορού (μέσος όρος σωλήνων 7-8) τη συγκέντρωση πρωτεΐνης κάθε κλάσματος που διαχωρίσατε ποιοτικά με την ηλεκτροφόρηση
Γ΄ Μέρος. Προσδιορισμός όγκου πλάσματος
Γ΄ Μέρος. Προσδιορισμός όγκου πλάσματος Μέθοδος αραίωσης της χρωστικής Evans Θα πάρετε: πρότυπο διάλυμα χρωστικής Evans συγκέντρωσης 0,5 mg/ml στους σωλήνες 1-6 θα προσθέσετε τα διαλύματα του Πίνακα 11.2 στους σωλήνες 7-12 θα προσθέσετε τα διαλύματα του Πίνακα 11.3 φωτομέτρηση στα 620 nm Σας δίνονται: βάρος περιστεριού 440 gr αιματοκρίτης περιστεριού 44 %
Προσδιορισμός του αιματοκρίτη Φυγοκέντρηση 3000 rpm 30 min 25o C
Γ΄ Μέρος. Προσδιορισμός όγκου πλάσματος Μέθοδος αραίωσης της χρωστικής Evans Θα πάρετε: πρότυπο διάλυμα χρωστικής Evans συγκέντρωσης 0,5 mg/ml στους σωλήνες 1-6 θα προσθέσετε τα διαλύματα του Πίνακα 11.2 στους σωλήνες 7-12 θα προσθέσετε τα διαλύματα του Πίνακα 11.3 φωτομέτρηση στα 620 nm Σας δίνονται: βάρος περιστεριού 440 gr αιματοκρίτης περιστεριού 44 % (άρα πλάσμα = ? %) πρόγραμμα gw.basic / Evans Θα υπολογίσετε: τον ολικό όγκο του πλάσματος % ποσοστό πλάσματος στο συνολικό βάρος του ζώου τον όγκο του αίματος του ζώου % ποσοστό αίματος στο συνολικό βάρος του ζώου
Συστατικά του αίματος πλάσμα έμμορφα στοιχεία ερυθρά (απύρηνα) λευκά (εμπύρηνα) αιμοπετάλια
Ερυθρά και λευκά αιμοσφαίρια Φυσιολογικά: RBC 4,5-6 x 106/mm3 αίματος WBC 4-10 x 106/mm3 αίματος
Μέτρηση έμμορφων συστατικών Πλάκα Neubauer Καλυπτρίδα Παρατήρηση στο μικροσκόπιο Καταμέτρηση
Πλάκα Neubauer ή αιμοκυτταρόμετρο