Χρώση Μπλέ του μεθυλενίου- Κινητική

Παρουσίαση με θέμα: "Χρώση Μπλέ του μεθυλενίου- Κινητική"— Μεταγράφημα παρουσίασης:

1 Χρώση Μπλέ του μεθυλενίου- Κινητική
Dr ΣτΕλιοΣ ΛογοθτηΣ

2 Βασίζεται Χρισημοποιείται κυρίως για την μέτρηση της βιωσιμότητας των ζυμών Βασίζεται στην ιδιότητα τωνν ζωντανών κυττάρων να διασπούν την χρωστική παράγοντας ένα ένζυμο που δεν υπάρχει στα νεκρά κύτταρα Τα ζωντανά παραμένουν λευκά ενώ τα μεκρά χρωματόζονται μπλέ

3 Μέτρηση Βιωσιμότητας Μεθοδολογία
Γίνεται έλεγχος βιωσιμότητας ως εξής: 1ml διαλύματος αραιώνεται σε 9ml νερό (αραίωση 1/10) 1ml από το καινούριο διάλυμα αραιώνεται σε 9ml νερό (αραίωση 1/100) Σε δοκιμαστικό σωλήνα τοποθετείται 1ml του αραιωμένου διαλύματος και 1ml μπλε του μεθυλενίου Το διάλυμα αναδεύεται και αφήνεται για 10’ Ανάδευση ξανά για ομοιογένεια δείγματος Με πιπέτα Pasteur τοποθετείται μια σταγόνα σε αντικειμενοφόρο πλάκα Thomas η οποία έχει την εμφάνιση στο οπτικό μικροσκόπιο (μοντέλο) x40 όπως στην φωτογραφία της επόμενης διαφάνειας Τα ζωντανά κύτταρα ανά ml υπολογίζονται με τον εξής τρόπο: Ν5/5*105*συντελεστής αραίωσης = ζωντανά κύτταρα ανά ml Όπου Ν5=σύνολο ζωντανών κυττάρων στα καρέ 1,2,3,4,5 Τα ζωντανά κύτταρα δεν έχουν χρωματιστεί με το μπλε του μεθυλενίου και στο μικροσκόπιο φαίνονται λευκά.

4 Αντικειμενοφόρος Thomas - Neubauer

5 Χρώση ζυμομυκήτων με μπλέ του μεθυλενίου

6 Κινητική ανάπτυξης Για την μελέτη της εξέλιξης μιας μικροβιακής καλλιέργειας πραγματοποιείται μια καλλιέργεια κλασσικού τύπου, όπου έπειτα απο τον εμβολιασμό, παρακολουθείται η ανάπτυξη μέχρι την εξάντληση των θρεπτικών υλικών του υποστρώματος. Επίσης, οι διάφοροι εξωτερικοί παράγοντες, και κυρίως η θερμοκρασία, διατηρούνται σταθεροί και ευνοϊκοί για τον προς μελέτη μικροοργανισμό. Ειδικότερα, σε χρόνο t=0 γίνεται εμβολιασμός ενός αποστειρωμένου θρεπτικού υλικού στον βιοαντιδραστήρα (δοχείο καλλιέργειας). Ακολουθεί επώαση κάτω από ελεγχόμενες άριστες φυσικοχημικές συνθήκες περιβάλλοντος. Κατά τη διάρκεια της αύξησης δε γίνεται καμιά προσθήκη, εκτός από οξυγόνο (υπό μορφή αέρα), ενός αντιαφριστικού παράγοντα και οξέος ή βάσης για τη ρύθμιση του pH. Κατά την διάρκεια της επώασης της καλλιέργειας η σύνθεση του θρεπτικού υλικού, η συγκέντρωση της βιομάζας και η συγκέντρωση των μεταβολιτών αλλάζουν και είναι αποτέλεσμα του κυτταρικού μεταβολισμού. Η μελέτη της μικροβιακής κινητικής συνίσταται στη μέτρηση του αριθμού των κυττάρων ανά ml, είτε στη μέτρηση του ξηρού βάρους ανά lt, σε συνάρτηση με το χρόνο. Η χρησιμοποίηση της μιας ή της άλλης μεθόδου, εξαρτάται κυρίως από το είδος του χρησιμοποιούμενου μικροοργανισμού (μονοκύτταρος ή όχι ). Γενικά, μπορούμε να διακρίνουμε 6 φάσεις στη καμπύλη ανάπτυξης: t1 2 1 3 4 5 6 t2 t ln x1 ln x ln x2 ΣΥΝΕΧΕΙΑ ΣΤΟ ΑΡΧΕΙΟ WORD ΜΕ ΤΙΤΛΟ ΚΙΝΗΤΙΚΗ ΑΝΑΠΤΥΞΗΣ