Κατασκευή πρότυπης καμπύλης

Παρουσίαση με θέμα: "Κατασκευή πρότυπης καμπύλης"— Μεταγράφημα παρουσίασης:

1 Κατασκευή πρότυπης καμπύλης
Σχολή Επαγγελμάτων Υγείας – Πρόνοιας Τμήμα Ιατρικών Εργαστηρίων Εργαστήριο Βιοχημειας ΙΙ Κατασκευή πρότυπης καμπύλης Κούρτη Μαρία Βιολόγος, Msc, PhD 23 Νοεμβρίου 2018

2

3

4

5 Προϋποθέσεις νόμου Lambert-Beer
1) Ο μόνος μηχανισμός αλληλεπιδράσεως ηλεκτρομαγνητικής ακτινοβολίας και της διαλυμένης ουσίας είναι η απορρόφηση 2) Η προσπίπτουσα ακτινοβολία είναι μονοχρωματική. 3) Η απορρόφηση γίνεται σε έναν όγκο διαλύματος ομοιόμορφης διατομής. 4) Τα σωματίδια που απορροφούν δρουν ανεξάρτητα το ένα από το άλλο και άσχετα προς τον αριθμό και το είδος τους.

6 Κατασκευή πρότυπης καμπύλης Bradford
Α Τιμές για πρότυπη καμπύλη. 595nm (μg/mL C(μg/μL) Η γραμμική εξίσωση είναι y=0,052x+0.015 Και επειδή R2>0.98 είναι αποδεκτή.

7 Από τη γραμμική εξίσωση y=0,052x+0
Για παράδειγμα φωτομετρούμε το προς μελέτη δείγμα στα 595nm και έχει OD = 0,525 Στην παραπάνω εξίσωση βάζω y=0,525 και λύνω ως προς χ που αντιστοιχεί στα mg/mL πρωτεΐνης. χ=0,525-0,015/0,052=9,8μg/μL

8

9 ΚΑΤΑΣΚΕΥΗ ΠΡΟΤΥΠΗΣ ΚΑΜΠΥΛΗΣ
ΚΑΤΑΣΚΕΥΗ ΠΡΟΤΥΠΗΣ ΚΑΜΠΥΛΗΣ Πειραματικά για να μπορέσουμε να υπολογίσουμε τη συγκέντρωση μιας ουσίας στο διάλυμα πρέπει πρώτα να σχηματίσουμε την πρότυπη καμπύλη της ουσίας αυτής. Φωτομετρούμε μία σειρά από διαλύματα που περιέχουν όλα την ίδια ποσότητα αντιδραστηρίων, αλλά συνεχώς αυξανόμενες γνωστές ποσότητες της ουσίας που μετράμε. Ο τελικός όγκος πρέπει να είναι πάντα ίδιος. Η μέτρηση αρχίζει πάντοτε με τη φωτομέτρηση του «τυφλού», όπως ονομάζεται το διάλυμα που περιέχει όλα τα αντιδραστήρια εκτός της ουσίας. Το «τυφλό» επομένως έχει συγκέντρωση ουσίας (0) μηδέν. Αφού πάρουμε τις αντίστοιχες τιμές του Α για τα γνωστά διαλύματα της ουσίας, σχεδιάζουμε τη γραφική παράσταση της απορρόφησης (άξονας ψ)συναρτήσει της συγκέντρωσης της διαλυμένης ουσίας που απορροφά (άξονας χ). Με την πρότυπη καμπύλη έχουμε τώρα τη δυνατότητα να προσδιορίσουμε οποιαδήποτε άγνωστη συγκέντρωση της ουσίας αν γνωρίζουμε την απορρόφηση του διαλύματος της.

10 Κατασκευάστε την πρότυπη καμπύλη του υδατικού διαλύματος KMnO4.