Βασιλική Ε. Γκρέκα-Σπηλιώτη1.

Παρουσίαση με θέμα: "Βασιλική Ε. Γκρέκα-Σπηλιώτη1."— Μεταγράφημα παρουσίασης:

1 Βασιλική Ε. Γκρέκα-Σπηλιώτη1.
Έκφραση των Rab5, GLUT4 και PI3kinase σε πρωτογενείς καλλιέργειες προ-λιποκυττάρων από ενδοκοιλιακό, υποδόριο κοιλιακό και υποδόριο λιπώδη ιστό μηρού ενηλίκων με νοσογόνο παχυσαρκία και λεπτόσωμων μαρτύρων σε διάφορες καταστάσεις ευαισθησίας της ινσουλίνης Μαίρη Σμαΐλη1,Ανδρέα Παόλα Ρόχας Χιλ1, Αλεξία Καρβέλα1, Γιάννης Κεχαγιάς3, Θεόδωρος Κ. Αλεξανδρίδης2, Δημήτριος Λινός4, Φώτης Καλφαρέντζος3, Βασιλική Ε. Γκρέκα-Σπηλιώτη1. Ερευνητικό Εργαστήριο Μονάδας Παιδιατρικής Ενδοκρινολογίας και Διαβήτη1, Παιδιατρικής Κλινικής, Τμήμα Ενδοκρινολογίας2 ,Παθολογικής, Κλινικής Χειρουργική Κλινική3, Ιατρική Σχολή Πανεπιστημίου Πατρών, Πάτρα, Χειρουργική Κλινική4, Νοσοκομείο Υγεία, Αθήνα Εισαγωγή: Δεσμεύεται η ινσουλίνη με τον υποδοχέα της και ξεκινά η μεταγωγή του σήματος Ενεργοποίηση της PI3K με στόχο την μεταφορά της GLUT4 στην πλασματική μεμβράνη Rab5: μια GTP-ase που έχει ως στόχο το «trafficking» διαφόρων μορίων όπως της GLUT4 και PI3K, προπαντός την ενδοκυττάρωση της GLUT4. Μονοπάτι Ινσουλίνης μέσω PI3K Ερευνητικό ερώτημα: Γιατί δεν παρουσιάζουν ΣΔΙΙ όλα τα παχύσαρκα άτομα? Σκοπός: Να μελετηθεί η έκφραση και η κυτταρική εντόπιση των Rab5, GLUT4 και PI3K σε παχύσαρκα και λεπτόσωμα άτομα με ή χωρίς ινσουλινοαντοχή.

2 ΥΛΙΚΑ ΚΑΙ ΜΕΘΟΔΟΙ: Ασθενείς
Ανάπτυξη πρωτογενών καλλιεργειών προ-λιποκυττάρων από ενδοκοιλιακό (ΕΚ), υποδόριο κοιλιακό (ΥΔΚ), υποδόριο λιπώδη ιστό μηρού (ΥΔΜ), από παχύσαρκα (BMI>45) και λεπτόσωμα (BMI<25) άτομα με ή χωρίς ινσουλινοαντοχή. Μελέτη της πρωτεϊνικής έκφρασης και της κυτταρικής τοπογραφίας των Rab5, GLUT4 και PI3K με ανοσοφθορισμό (IF) Μελέτη της πρωτεϊνικής έκφρασης του Rab5 και της GLUT4 με western Immunoblotting (w.b.) Μελέτη της έκφρασης του mRNA των Rab5, GLUT4 και PI3Κ με RT-PCR Ασθενείς 7 ασθενείς με νοσογόνο παχυσαρκία και ΣΔ2 (ΝΠΣΔ) 4 ασθενείς με νοσογόνο παχυσαρκία και υπερινσουλιναιμία (ΝΠΥΙ) 6 ασθενείς με νοσογόνο παχυσαρκία χωρίς ΣΔ2 ή υπερινσουλιναιμία (ΝΠΧ) 7 λεπτόσωμα άτομα (Μ)

3 1 Rab5 RT-PCR W.B IF * EK EK ΝΠΣΔ ΝΠΥΙ ΝΠΧ Μ ΥΔΚ ΥΔΚ ΠΕ Rab5: 1) Αυξημένη περιπυρηνική συσσώρευση στους ΝΠΣΔ και ΝΣΥΙ σε αντίθεση με τους Μ σε ΕΚ και ΥΔΚ ιστό (IF) 2) μειωμένη στους ΝΠΥΙ στον ΕΚ σε σύγκριση Μ (W.B) *p= 0,041 2 GLUT4 IF RT-PCR W.B EK EK ΝΠΣΔ ΝΠΥΙ ΝΠΧ Μ ΥΔΚ ΥΔΚ ΠΕ GLUT4: Μειωμένη περιπυρηνικά, σχεδόν ανύπαρκτη στην πλασματική μεμβράνη στους ΝΠΣΔ και ΝΠΥΙ σε αντίθεση με τους Μ και ΝΠΧ (IF), ενώ με W.B και RT-PCR δεν παρατηρήθηκαν στατιστικώς σημαντικές διαφορές

4 3 PΙ3Κ RT-PCR IF ΠΕ ΡI3K: ήταν μειωμένη στο κυτταρόπλασμα των ΝΠΣΔ στο ΕΚ και ΥΔΚ ιστό σε σύγκριση με τους λεπτόσωμους μάρτυρες (IF) ενώ δεν παρατηρήθηκαν διαφορές στην έκφραση του mRNA EK EK ΝΠΣΔ Μ ΥΔΚ ΥΔΚ 4 IF στον λιπώδη ιστό Rab5 GLUT4 PΙ3Κ ΕΚ ΥΔΚ ΥΔΜ ΕΚ ΥΔΚ ΥΔΜ ΠΕ Rab5: στον ΥΔΜ ήταν μειωμένη σε σχέση με την ΠΕ των ΕΚ και ΥΔΚ αλλά χωρίς σημαντικές διαφορές ανάμεσα στις υποομάδες στο λιπώδη ιστό του μηρού. ΠΕ GLUT4: των ομάδων στον ΥΔΜ ήταν αυξημένη περιπυρηνικά και μειωμένη στην πλασματική μεμβράνη όπως στο ΕΚ και το ΥΔΚ ΠΕ PI3K: στο ΥΔΜ ήταν αυξημένη στους ΝΠΣΔ σε σύγκριση με τους Μ

5 Συμπεράσματα 1) Παρατηρήθηκε αυξημένη κυτταρική εντόπιση της Rab5- GTPase στο ΕΚ και ΥΔΚ στους ασθενείς με νοσογόνο παχυσαρκία και ΣΔΙΙ ή υπερινσουλιναιμία Αυτή η αύξηση πιθανόν να εξηγεί εν μέρει την : περιπυρηνική εντόπιση της GLUT4 μειωμένη κυτταροπλασματική έκφραση της PI3K μειωμένη πρόσληψη της γλυκόζης που χαρακτηρίζει τους παχύσαρκους με αντίσταση στην ινσουλίνη και με ΣΔΙΙ 2) Στον υποδόριο λιπώδη ιστό του μηρού δεν παρατηρήθηκαν διαφορές στην έκφραση της Rab5 και GLUT4 σε όλους τους ασθενείς σε σύγκριση με τους μάρτυρες, ανεξάρτητα από την παρουσία ΣΔΙΙ ή ινσουλινοαντοχής. 3) Σε αντίθεση, η ΠΕ της PI3K στον υποδόριο λιπώδη ιστό του μηρού ήταν αυξημένη στους ΝΠΣΔ 4) Τα αποτελέσματα αυτά υποστηρίζουν την άποψη ότι η αποθήκευση λίπους στην περιοχή του μηρού είναι προστατευτική.